Методы с применением элюирования

Анализируемый препарат в виде раствора или смеси с небольшим количеством сорбента помещают в хроматографическую колонку сверху. После этого через колонку с определенной скоростью (около 20 капель в 1 мин) пропускают подвижную фазу, что должно приводить к разделению хроматографируемой смеси по длине колонки на более или менее отдаленные друг от друга зоны, содержащие индивидуальные вещества. Эти зоны перемещаются по сорбенту со скоростью меньшей скорости течения подвижной фазы. Это позволяет для выделения отдельных компонентов анализируемой смеси использовать элюентный метод, т. е. пропускать подвижную фазу через колонку до тех пор, пока разделенные вещества не будут элюированы из нее. Последовательность элюирования отдельных веществ зависит от их хроматографической подвижности в данных условиях. Элюат собирают по фракциям. При необходимости в ходе элюирования можно менять состав подвижной фазы, увеличивая ее полярность. Вещества, содержащиеся в различных фракциях элюата, могут быть выделены и определены качественно и количественно обычными препаративными и аналитическими методами. Применение элюентного метода делает возможным многократное использование хроматографических колонок. [c.97]

На рис. 82 сопоставляются. четыре простые хроматограммы, полученные при использовании обычной насыщенной камеры и камеры SB/ D в последнем случае все разделения оказываются улучшенными. Проанализируем, почему это происходит. Во-первых, выбранный вид разделительной задачи (два или три близких друг к другу пятна) идеально подходит для применения метода непрерывного элюирования. Ситуация окажется совсем иной в случае образца, компоненты которого сильно отличаются по полярности (когда большинство компонентов оказалось бы сгруппированным или около стартовой линии или около линии, с которой начинается испарение). Во-вторых, получение различной разрешающей способности на четырех парах пластинок хотя и не обусловливается одной и той же причиной, но легко объясняется благодаря использованию уравнения (54). [c.236]

Разделение марганца, железа, кобальта, никеля, меди, цинка и кадмия методом хроматографии с обращенными фазами с использованием три-н-октиламина в качестве неподвижной фазы и применением метода градиентного элюирования. [c.555]

Применение хроматографических методов при элюировании с целью вытеснения менее прочно удерживаемых ионов. [c.310]

Если в анализируемой смеси имеются компоненты, сильно различающиеся специфичностью адсорбции, а следовательно, и величинами удерживаемых объемов, то целесообразно применять ступенчатое элюирование, заключающееся в последовательном применении двух или более растворителей с повышающейся элюирующей способностью [112]. Дальнейшим развитием этого метода является метод градиентного элюирования [113—117]. В этом случае разделяемые вещества промывают в колонне жидкостью с непрерывно изменяющимся составом. Обычно в растворитель с небольшой элюирующей способностью с помощью специального устройства добавляется другой растворитель со значительно большей элюирующей способностью, концентрация которого будет постепенно возрастать. По возможности изменять времена удерживания градиентное элюирование можно сопоставить с методом программирования температуры в газовой хроматографии. При выборе смеси растворителей для ступенчатого и градиентного элюирования знание элюотропных рядов для разных адсорбентов весьма полезно. [c.232]

Для сокращения времени удерживания используется ступенчатое элюирование, заключающееся в последовательном применении двух или более растворителей с увеличивающейся элюирующей способностью. Дальнейшим развитием этой техники является метод градиентного элюирования. В этом случае разделяемые вещества промываются смесью жидкости с непрерывно изменяющимся составом. Обычно с помощью специального устройства в растворитель с небольшой элюирующей способностью добавляется увеличивающейся во времени концентрацией другой растворитель со значительно большей элюирующей способностью. По своему влиянию на характеристики удерживания этот метод можно сопоставить с методом программирования температуры в газовой хроматографии. [c.419]

МЕТОДЫ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЭЛЮИРОВАНИЯ [c.189]

Описаны многочисленные колоночные и хроматографические методы фракционирования (элюирование в градиенте температуры и растворителя, прямая экстракция, селективное осаждение с последующим элюированием, адсорбционная и гелевая хроматография и т. д.), позволяющие осуществить разделение не только по молекулярным весам, но также по степени разветвленности макромолекулы, химическому составу и структуре. При применении таких методов, которые могут быть частично автоматизированы, можно проводить [c.418]

Важное условие зональной аналитической аффинной хроматографии состоит в том, что концентрация подвижного компонента [Р] по мере прохождения зоны через слой адсорбента постоянно изменяется. Поэтому члены, содержащие [Р], не включаются в выражения, относящиеся к объемам элюирования и константам диссоциации (см., например, приведенные выше уравнения). Пренебрежение [Р] допустимо только в том случае, если этот параметр мал по сравнению с константой диссоциации /Сь- Проведение экспериментов по зональному элюированию при низком [р] обычно легко осуществимо и особенно желательно при анализе труднодоступных биомолекул. Использование низких [Р] в зональном анализе аналогично применению низких концентраций фермента в твердофазном ферментативном кинетическом анализе [7]. Было экспериментально показано (например, в работе [5]), что при низком (по отношению к /Сх) количестве фермента, введенного в аффинную матрицу, рассчитанные константы диссоциации практически не зависят от количества использованного подвижного компонента. В то же время в работе [8] предложены уравнения расчетов по методу постоянного элюирования/фронтального анализа, в которые входит точное значение концентрации подвижного компонента, нанесен ного на аффинную колонку (см. также гл. 6). С практической точки зрения метод зонального элюирования экспериментально более удобен и требует гораздо меньшего количества подвижного компонента. Таким образом, зональное элюирование, по-видимому, наиболее подходящий метод для изучения большинства взаимодействий, представляющих биологический интерес. Следовательно, существует необходимость в чувствительных аналитических методах для проведения элюирования и детектирования малых количеств подвижного компонента. [c.223]

До настоящего времени аффинный сорбент не использовали повторно, но если разработать метод элюирования белка без фотолиза, так чтобы сорбент можно было снова использовать, то это откроет путь широкому применению этому адсорбционному методу для очистки В12-зависимых ферментов. [c.395]

Применение для анализа растворов метода жидкостной хроматографии позволяет продвинуться в сторону малых концентраций равновесных растворов. Однако это лимитируется чувствительностью детекторов жидкостных хроматографов, которая может быть недостаточной, особенно если компонент плохо поглощает в ультрафиолетовой области спектра (ультрафиолетовые детекторы широко используются в жидкостной хроматографии). Непосредственное определение адсорбции данного компонента из его хроматограммы, полученной на колонне с изучаемым адсорбентом при элюировании изучаемым растворителем, рассмотрено в конце этой лекции. [c.251]

Значительно чаще находят применение методы количественного определения сахаров, элюированных с хроматограмм водой [37, 56, 57]. Например, микрометод количественного определения элюированных сахаров путем потенциометрического титрования [59] [c.76]

Преимуществом колоночной хроматографии является возможность количественного фракционирования больших количеств веществ без превращения их в какие-либо производные. Однако хорошее разделение часто возможно лишь при малых скоростях элюирования, поэтому были разработаны новые виды колоночной хроматографии. Методы аффинной и адсорбционной хроматографии основаны на избирательной адсорбции молекул на нерастворимом адсорбенте, который содержит группы (молекулы), специфически взаимодействующие с молекулами подлежащих очистке соединений, например ингибиторы (для очистки ферментов) или антитела (для очистки антигенов) в настоящее время эти методы нашли широкое применение и для разделения углеводов. Невзаимодействующие с адсорбентом примеси удаляются, а связанный с адсорбентом сахар затем десорбируют способом, не приводящим к его разрушению. Десорбцию можно осуществить, изменяя pH, ионную силу среды или применяя соответствующий ингибитор взаимодействия, удерживающего вещество на адсорбенте. Для разделения ряда полисахаридов были использованы иммобилизованные формы (см. разд. 26.3.7.6) конканавалина А [40], являющегося фитогемагглютинином (лектином), который специфически взаимодействует с разветвленными полисахаридами определенного строения в настоящее время применяют и другие иммобилизованные фитогемагглютинины. Колоночная хроматография на носителях, покрытых полиароматическими соединениями [41], также находит применение для разделения полисахаридов. Благодаря достижениям в производстве носителей для жидкостной хроматографии под высоким давлением можно осуществить хроматографическое разделение быстро и избирательно описаны методы фракционирования небольших олигосахаридов, продолжающегося менее 1 ч [42]. [c.224]

Жидкостная адсорбционная хроматография. Жидкостная адсорбционная хроматография применяется для группового разделения углеводородов на алкано-циклоалкановую и ареновую фракции, а также для разделения аренов по степени цикличности. Хроматографические колонки заполняют силикагелем или двойным адсорбентом — оксидом алюминия и силикагелем. В качестве десорбентов при анализе керосиновых и масляных фракций для вымывания насыщенных углеводородов используют н-алканы С5 — С7, для десорбции ароматических и гетероатомных компонентов — бензол, спиртобензольные смеси, ацетон, хлороформ. Применение ступенчатого или непрерывного увеличения полярности подвижной фазы позволяет значительно уменьшить время удерживания веществ. Этот метод называется градиентным элюированием. [c.130]

Позже метод разделения перрената и молибдата с использованием анионита амберлит IRA-400 в перхлоратной форме был значительно улучшен [1070]. Применением раствора оксалата натрия для разделения и элюирования молибдата, а затем хлорной кислоты для последующего элюирования перрената [c.128]

Обращенные фазы используются в ТСХ для имитации условий КЖХ. Однако есть и другие причины использования слоев с привитыми фазами в ТСХ. При использовании слоев на основе силикагеля или оксида алюминия необходимо контролировать влажность. Применение гидрофобных фаз исключает эту проблему. Кроме этого, весьма интересно использовать ТСХ для оптимизации условий разделения и переноса их на колонку. Более того, по сравнению с традиционной ТСХ на основе силикагеля привитые фазы в ОФ-варнанте обладают существенным преимуществом возможно превращение анализируемых кислот в эфиры непосредственно перед разделением (см., например, метод многократного элюирования, разд. 1П, Б, 2) [c.389]

Процессы разделения в методе селективного элюирования основаны, как правило, на различиях в константах устойчивости разделяемых ионов. Типичным примером успешного применения метода селективного элюирования является разделение смеси N1 — Мп — Со — Си — Ре — 2п элюиро ванием соляной кислотой (с анионообменников). Индивидуальные элементы последовательно элюируются соляной кислотой соответствующей концентрации в указанном выше порядке. [c.41]

Рис 7-13 Разделение эпоксидной смолы Epikote 1001 с применением метода градиентного элюирования Колонка 0 5 м х О 22 мм (внутр диам ) непод вижная фаза силикагель модифицированный ОДС (5 мкм) подвижная фаза а - ацетонитрил/вода (85/15) б - ацетонитрил/ТГФ (90 10) изменение со става элюента в процессе разделения показано иа рисунке объемная скорость [c.170]

Опубликовано несколько работ, посвященных методу градиентного элюирования со смешиванием при высоком давлении при помошд двух насосов [28, 32-35] Скотт и Кучера [341 исследовали основные характеристики такой системы и описали ряд примеров ее применения Так, на рис 7-49 представлена хроматограмма, полученная при анализе проб сыворотки крови на длинной открытой капиллярной колонке внутренним диаметром 1 мм, изготовленной из нержавеющей стали Шварц и сотр [35] применили градиентное элюирование со смешивани- [c.206]

Методом применения хроматографии в синтезе сахарных кислот может служить разделение эпимерных пар З-дезокси-о-гек-сулозоновых кислот, полученных конденсацией оксалоуксусной кислоты с о-глицериновым альдегидом. Хроматографическое разделение проводили на дауэксе-1 (НСОО -форма, 200—400 меш, 75x3,8 см), используя градиентное элюирование муравьиной кислотой концентрации 0,23—0,46 М [178]- [c.120]

Б результате подробного исследования Мильтон и Груммит [45 ] разделили все щелочноземельные металлы. Бериллий, магний, кальций, стронций и барий присутствовали в количестве нескольких миллиграммов, а радий — в виде следов. Лактат аммония дал лучшие результаты, чем цитрат аммония и соляная кислота. Разделение выполнялось методом ступенчатого элюирования при 78° С. Вначале элюировали бериллий 0,55М раствором лактата аммония при pH 5, а затем все остальные щелочноземельные металлы — 1,5М раствором лактата аммония при pH 7. Все шесть элементов можна количественно разделить из одной навески за 5 ч. Результаты разделения показаны на рис, 15, 11. Метод был применен для определения стронция-90 в молоке и в воде [35]. [c.311]

Металлические Mg и А] можно анализировать и косвенным методом — с помощью реакционной газовой хроматографии. Хоган и Тейлор [18] определяли магний и другие активные металлы путем измерения количества Нг, выделяющегося при взаимодействии металлов с кислотой. Аналогичный метод применен и в другой работе [19] для определения А1 и АЦСз. После обработки пробы соляной кислотой в газоволюметре образующиеся Нг, и СН4 определяли количественно с ошибкой 3,5% после элюирования смеси Нг, Ог, N2 и СН4 на колонке с цеолитом NaX. Отделяя водород, выделяющийся при взаимодействии металлов с кислотой, от углеводородов (метан и ацетилен), образуемых в этих условиях карбидами, можно определять металлы и их карбиды при совместном присутствии [19, 20]. [c.128]

Рис. 7-13. Разделение эпоксидной смолы Epikote 1001 с применением метода градиентного элюирования. Колонка 0,5 м х 0,22 мм (внутр. диам.) неподвижная фаза силикагель, модифицированный ОДС (5 мкм) подвижная фаза а - ацетонитрил/вода (85/15), б - ацетонитрил/ТГФ (90 10) изменение состава элюента в процессе разделения показано на рисунке объемная скорость 1,4 мкл/мин масса пробы 0,16 мкг детектор УФ, длина волны 225 нм.

При обработке комплексной канадской золотой руды цианид-ные растворы пропускались через сильноосновную анионообмеп-ную смолу для адсорбции комплекса цианистых металлов. Адсорбции подвергались следующие металлы золото, серебро, медь, железо, кобальт и никель. Было найдено, что разделение компонентов смеси может быть осуществлено путем применения метода избирательного элюирования. Элюирование соляной кислотой сделало возможным удаление никеля и цинка. С помощью цианистого натрия были элюированы железо и медь. Для удаления золота и серебра потребовалось применение органического растворителя, например ацетона, подкисленного соляной кислотой. С помощью крепкого раствора роданистого калия был удален сильно адсорбируемый кобальтоцианидный комплекс [18]. [c.311]

Рассмотрим применение неорганических ионитов в неорганическом анализе. Микроколичества уранил-ионов селективно сорбируют из растворов с pH = 5, содержащих винную кислоту и ЭДТА, на колонке, заполненной силикагелем. Элюирование проводят 3 М раствором уксусной кислоты [645]. Метод применен для спектрофотометрического определения урана в рудах и подземных водах. При анализе пресных и морских вод микроколичества Со, Си, Fe, Ni, Pb, U и Zn сорбируют на колонке, заполненной гидратированными оксидами титана, циркония или оксидом алюминия [646]. [c.101]

В данной работе мы исследовали ТО с точки зрения возможности применения его как адсорбента. Межплоскостное расстояние ТО -3,42 А. Различными физическими методами установлено, что поры у ТО отсутствуют, а поверхность обладает удельной площадью 32 м /г. Для заполнения колонки был приготовлен порошок ТО со средним диаметром частиц от 280 до 350 мкм массой 20 г. В колонку зафужался насыщенный раствор смеси фуллеренов в толуоле объемом Уф = 2 мл с концентрацией Сф = 0,7 мг/мл, масса фуллеренов в растворе Шф = 1,4 мг. В режиме выделения См в качестве элюента использовалась смесь растворителей толуол гексан в соотношении 50 50 по объему, при этом была получена фракция сиреневого цвета (фракция 1). В режиме выделения a элюирование проводили толуолом. Была получена фракция оранжевого цвета (фракция 2). [c.134]

Основной областью применения эксклюзионной хроматографии, безусловно, является исследование полимеров. Однако уникальные особенности этого метода, отличающие его от всех остальных вариантов ВЭЖХ (разделение молекул по размеру и полное элюирование всех компонентов из колонки за короткое время), обусловливают его преимущественное использование и для решения других задач. К ним, в первую очередь, относится разделение молекул, заметно различающихся по размерам. [c.57]

Изучение воиросов, связанных с механизмом взаимодействия иоликомплексонов с катионами, кинетикой процесса, составом и стабильностью образуемых комплексов, осложнено трудностями в исследовании гетерогенных систем. Весьма успешно для этих целей применен ряд косвенных методов, основными из которых являются потенциометрическое титрование полимера в присутствии ионов металлов, определение значения pH, при котором наблюдается вымывание катиона из ионита, так называемое рН-декомплексование (О pH) изучение равновесных систем катион — поликомплексон — раствор мономерного лиганда элюирование катиона из ионита хелантами с различной комплексообразующей способностью, изотопный обмен [1, 167, 547, 548, 553—557]. [c.296]

Исследование равновесия в растворах между сывороточными белками и различными лигандами, особенно фармакологически активными соединениями, показало значительное различие в константах связывания соответствующих энантиомеров [82, 83]. Этот эффект, однако, более надежно был зафиксирован с помощью хроматографической техники. Так, в 1973 г. ранее известное высокое сродство I -триптофана к бычьему сывороточному альбумину (БСА) было использовано для разделения энантиомеров на колонке, заполненной гелем БСА—сефарозы [84]. Элюирование о-формы проводилось боратным буфером (рН9), а элюирование ь-формы — разбавленной уксусной кислотой. Этот метод был в дальнейшем использован для определения сродства ряда лекарственных препаратов к сывороточным альбуминам [85, 86]. В последние несколько лет аналитические методы хиральной ЖХ, основанные на использовании иммобилизованных белков в качестве неподвижных фаз, развивались очень быстро и нашли применение для решения широкого круга задач. [c.132]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология