Методика гель-хроматографии

МЕТОДИКА ГЕЛЬ-ХРОМАТОГРАФИИ [c.363]

Прежде чем перейти к более детальному описанию методики гель-хроматографии, мы рассмотрим терминологию, применяемую в этом виде хроматографии, и объясним, в частности причины появления тех или иных терминов. [c.341]

Гель-хроматография является новым методам разделения, очистки и анализа органических соединений. Поскольку разделение смесей основано на различии в молекулярных весах ее компонентов, с помощью гель-хроматографии можно также определять и молекулярный вес соединений. Благодаря тому что этот метод весьма прост и не требует сложного оборудования, он в короткий срок нашел применение во многих химических и клинических лабораториях. К настоящему времени метод значительно усовершенствован и дополнен многочисленными модификациями, которые позволяют использовать его для работы как на микроуровне, так и в препаративных масштабах. В пограничной области между химией, биологией и медициной гель-хроматография приобрела большое значение как важный технический (и производственный) метод. Методика, которую первоначально можно было рассматривать лишь как атрибут специализированной биохимической лаборатории, развилась в стандартный хроматографический метод. В настоящее время гель-хроматография применяется всюду, где ставятся задачи разделения или анализа соединений с различными молекулярными весами. [c.9]

МИ 550-84. Хроматограф жидкостный лабораторный для гель-хроматографии типа Цвет-3002 . Методика поверки. [c.12]

Правильный выбор сорбента и соответствующей элюирующей системы — это первый и наиболее важный этап решения поставленной задачи. Поэтому необходимо обстоятельно знать свойства всех типов используемых в ТСХ сорбентов. Выбрать оптимальную хроматографическую систему достаточно сложно, поскольку разделение методом ТСХ обычно совершается в результате сочетания различных механизмов, чаще всего адсорбции и распределения между фазами, а также ионного обмена или затрудненной диффузии (гель-хроматография). Однако, еслп условия выбраны правильно, один из механизмов разделения становится преобладающим. Если разделяемые соединения неполярны, следует создать условия, благоприятные для адсорбционной хроматографии (применение сорбента с большой адсорбционной способностью), а для разделения полярных (растворимых в воде) соединений следует использовать принципы, применяемые в жидко-жидкостной хроматографии. Наконец, при работе с ионогенными соединениями следует избрать методику ионообменной хроматографии. Очевидно, что налицо определенная аналогия с колоночной хроматографией. [c.97]

Хроматография часто используется [22] для определения состава неизвестных сложных смесей при исследовании химического влияния на окружающую среду. Пока еще не разработаны анализаторы постоянного действия, позволяющие выявить какие-то определенные загрязняющие примеси, например, в воздухе или воде. При проведении анализа сложных смесей обычно проводится их обогащение или применяется экстракция, позволяющие определять компоненты при концентрациях их ниже 10 % с высокой селективностью. Для выявления газовых включений часто используется методика обогатительной хроматографии. Например, при определении кислородсодержащих компонентов в выхлопных газах обогащение проводят в колонках из нержавеющей стали (3,5 мХ4 мм, внутр. диаметр), заполненных хромосорбам (размер частиц 0,2—0,4мм), на который нанесено 20% 1,2,3-трис(2-цианэтокси) пропана. Обогащение ведется при 20 "С при пропускании через колонку гелия со скоростью 100 мл/мин. Углеводороды проходят через колонку, практически не задерживаясь, так что в десорбционном цикле в аналитическую колонку поступают только кислородсодержащие соединения. Аналитическую колонку — трубку из нержавеющей стали длиной 3,5 м с внутренним диаметром 2 мм и внешним диаметром 3,5 мм — упаковывают порапаком Р с частицами размером 0,1—0,2 мм. Разделение ведут при 156°С, газом-носителем служит гелий, который пропускают со скоростью 50 мл/мин. Пики на хроматограмме следуют в таком порядке ацетальдегид, окись пропилена, пропионовый альдегид, [c.242]

В настоящее время в связи с развитием гель-хроматографии и разработкой высокоскоростных ЖХ-систем жидкостная хроматография переживает период возрождения [2, 3]. Гель-хроматогра-фия применяется в основном для анализа высокомолекулярных соединений. Высокоскоростная жидкостная хроматография развивается в методическом отношении параллельно газовой. В данном обзоре в отдельных случаях рассматривается возможность использования методик ЖХ, разработанных при атмосферном давлении, для анализа при высоком давлении. [c.394]

Разделение субъединиц по размерам. Если субъединицы заметно различаются по молекулярной массе, их выделяют с помощью гель-фильтрации в присутствии денатурирующих агентов. Основы и методика гель-фильтрации на аналитическом уровне рассмотрены в разд. 1.3.1.3 при фракционировании на препаративном уровне они существенно не меняются. Хроматографию, как правило, проводят на препаративных колонках диаметром 2,5-г-5 см и длиной 100 см, рассчитанных на нагрузку от 500 мг до нескольких граммов белка. [c.37]

Смеси низкокипящих углеводородов и газов На, N2, и СО можно разделять путем перегонки как при атмосферном давлении с применением специальных хладоагентов, так и при повышенном давлении. Если разделение проводят при повышенном давлении, то стремятся повысить температуру головки колонны до такого значения, чтобы можно было использовать обычные охлаждающие средства (см. разд. 5.4.5). Из-за того, что для перегонки под давлением необходима более сложная аппаратура, чаще применяют лабораторные и пилотные установки низкотемпературной ректификации. Методика проведения низкотемпературной ректификации разработана очень подробно. Созданы полностью автоматизированные установки для проведения низкотемпературной ректификации в интервале от —190 до 20° С. В этих установках применяют как насадочные, так и полые спиральные колонны. Во многих случаях отбираемые пробы дистиллята и кубового продукта анализируют методом газовой хроматографии (см. разд. 5.1.2). Низкотемпературную ректификацию используют для очистки газов, а также как сравнительную ректификацию, аналогичную промышленному процессу. Это относится прежде всего к очистке отходящих промышленных газов без концентрирования в них водорода и, главным образом, к очистке природного газа, например выделение гелия и азота из природного газа, что по-прежнему является трудной проблемой. [c.250]

Следует отметить, что такая методика полного анализа продуктов горения — с применением двух промышленных хроматографов и двух газов-носителей, одним из которых является гелий, несколько громоздка и сложна, однако противопоставить ей проверенный на практике более простой метод автоматического анализа продуктов горения в настоящее время еще не представляется возможным. [c.194]

Детальное обсуждение достоинств различных методов, используемых для фракционирования полимеров, выходит за рамки данной книги. Большинство этих методов достаточно сложно и требует длительного времени, причем число получаемых при разделении фракций в значительной степени зависит от продолжительности фракционирования. Следует различать препаративное фракционирование, когда осу-щ,ествляется разделение полимера на фракции с последующим определением молекулярной массы каждой фракции, и аналитическое фракционирование, при котором определяется молекулярно-массовое распределение без выделения каждой отдельной фракции. В первой группе методов следует упомянуть новую быструю методику фракционирования с помощью гель-проникающей хроматографии. В этом методе разделения используется хроматографическая колонка, в которой в качестве стационарной фазы применяют пористый набухший полимер сетчатого строения. По мере прохождения полимерного раствора по колонке молекулы полимера диффундируют через гель в соответствии с их размерами. Молекулы небольшой длины глубоко проникают в гель, и, следовательно, для их прохождения через колонку тре- [c.239]

Смеси можно хроматографировать не только на колонках пористого геля, но и в однородном тонком слое адсорбента. Тонкослойная хроматография получила широкое распространение в современной лабораторной практике начиная с 1956—1958 гг. после того, как Сталь [16] описал простую стандартную методику приготовления тонкого слоя адсорбента. [c.231]

Компоненты элюента должны иметь квалификацию не ниже указанной в выполняемой методике. После смешения элюент должен быть отфильтрован и не содержать механических примесей. После фильтрования элюенты для обращенно-фазовой хроматографии должны быть дегазированы от растворенного кислорода. Дегазацию можно производить барботажем через элюент гелия или созданием невысокого разряжения любым лабораторным вакуумным насосом (можно водоструйным насосом или даже пылесосом). Дегазация прекращается при резком охлаждении сосуда с элюентом или по времени. [c.62]

Диоксанлигнин выделен из зрелых стеблей хлопчатника сорта 108Ф 1 по методике Пеппера, но с предварительным промыванием растения горячей водой ДЗС фракционирован по ММ дробным осаждением из диоксанового раствора эфиром по методу треугольника (рис 2 12), подробно методика фракционирования описана в работе [302] Этим способом получают небольшое количество фракций, каждая из которых имеет сравнительно узкое распределение по ММ Гель-хроматограммы ДЗС и его фракций также приведены в работе [302] Параметры, характеризующие Л/ , и Л/ и химический состав ДЗС и фракций 1—6, полученные химическими методами, приведены в табл 2 24 (потери при фракционировании составили 20,8%) Методики гель-хроматографии и расчета Л/ , и Л/ приведены в работах ]302, 328] [c.151]

Для тонкослойной гель-фильтрации слой носителя готовят из самых мелких гранул геля. Из препаратов, имеющихся в продаже, применяются гели декстрана марки сефадекс сверхтонкий или полиакриламидные биогели марки —400 меш . В описанных в литературе методиках тонкослойной гель-хроматографии в основном [c.238]

ЛИПИДОВ на сефадексе LH-20 с применением с качестве элюента хлороформа и этанола. Первая методика оказалась пригодной для отделения глицериновых эфиров от эфиров гликолей, простых эфиров от сложных эфиров и других нейтральных липидов (рис. 27.1). Для полного разделения использовалась комбинация гель-хроматографии и-тонкослойной хроматографии на кремневой кислоте. Кальдерон и Бауман [31] анализировали смеси липидов этиленгликоля, липидов глицирина, углеводов и восков. Наилучшие результаты были получены путем сочетания гель-хроматографии на сефадексе LH-20 с распределительной хроматографией [32]. [c.201]

Гель-хроматографию особенно целесообразно применять в тех случаях, когда необходимо очень быстро отделить высокомолекулярные компоненты от низкомолекулярных. На специально подготовленной колонке (3X6 сл) с сефадексом 0-25 (грубым) Эрлан-деру [25] удалось всего за 2 мин полностью отделить рибонуклеазу от воды, содержащей тритий. Этот быстрый аналитический метод позволяет изучить кинетику обмена трития и на этом основании сделать выводы о степени спирализации растворенного белка. Несколько позднее аналогичная методика была успешно использована при исследовании вторичной структуры растворимых рибонуклеиновых кислот [26] и дезоксирибонуклеиновых кислот [27]. Конечно, нуклеиновые кислоты также могут быть модифицированы химическим путем, например действием диазотированной сульфаниловой кислоты [28]. Избыток реагента и побочные продукты реакции удаляют на сефадексе 0-50. [c.146]

Хроматографические материалы для гель-хроматографии, их назначение и структура подробно описаны в гл. 6. При соответствующей степени грануляции и применении надлежащей методики их также можно использовать для приготовления тонких слоев. Полная информация о декстрановых гелях марки сефадекс суперфайн , поставляемых фирмой Pharma ia, содержится в выпущенной этой фирмой рекламной брошюре [2]. Выбранный гель оставляют набухать в жидкой среде в течение рекомендованного промежутка времени, после чего суспензию геля наносят в виде слоев толщиной 0,5 мм с помощью соответствующего приспособления. Чтобы в системе установилось равновесие, пластинки с нанесенным слоем помещают в специальную камеру (рис. 9.6). В разд. 9.2.2 кратко изложен метод приведения системы в равновесие. В работе [66] описано разделение пуриновых и пиримидиновых оснований и нуклеотидов по упрощенной методике на смеси 16 г сефадекса G-10 с 4 г силикагеля GF254 или 4 г целлюлозы. Приготовленный слой сохраняет разделяющие свойства сефадекса, но прочность его повышается, становится примерно такой же, как у слоев силикагеля или целлюлозы. [c.109]

Во второй части книги описаны методы жидкостной колоночной хроматографии. Но если, в главах, посвященных жидко-жидкостной и твердо-жидкостной хроматографии, подробно рассматриваются практически все аспекты этих методик и читатель найдет много полезных советов, то главы, посвященные гель-проникающей и ионообменной хроматографии, написаны значительно слабее, хотя и они дают общее представление об этих методах. Правда, по ионообменной хроматографии имеется достаточно обширная литература. По гель-проникающей хроматографии можно дополнительно посоветовать книгу Г. Детермана Гель-хроматография ( Мир , 1970), а также главу, посвященную этому виду хроматографии, в книге Фракционирование полимеров под ред. М. Кан-това ( Мир , 1971). [c.6]

Мур сконструировал прибор для аналитического фракционирования путем серийных повторяющихся операций. Скомбинировав принцип гель-проникающей хроматографии с экспериментальной методикой газовой хроматографии, Мур создал прибор, позволяющий после соответствующей калибровки получать распределение по молекулярным весам в течение нескольких часов. Область молекулярных весов можно было при необходимости значительно расширить, применяя для фракционирования гели с различными размерами пор. Малей [159] описал конструкцию такого хроматографа, допускающую их серийное производство подобный хроматограф был изготовлен фирмой Waters Asso iates, In . (США). [c.117]

В большинстве лабораторий, где анализируются меченые соединения, обычно используют различные методики колоночной хроматографии. Это может быть гель-фильтрация и ионный обмен, в которых используются водные элюенты, обычная адсорбционная и распределительная хроматография, где применяют органические растворители, и, наконец, высокоэффективная хроматография, в которой применяются водные и органические растворители. Поэтому желательно использовать универсальную методику, которая позволяла бы работать в различных условиях. Следует рассмотреть также и применение систем, способных работать под давлением и предназначенных для ВЭЖХ. [c.185]

Важность применения ВЭЖРХ в исследованиях метаболизма определяется несколькими причинами. Сейчас имеется целый набор носителей для адсорбционной и распределительной хроматографии, для хроматографии с обращенной фазой, анионо- и катионообменной хроматографии, а также гель-хроматографии. Это означает, что для разделения больщинства смесей веществ можно подобрать подходящий носитель и элюент. Методики с использованием обращенной фазы (когда стационарная фаза неполярна, а подвижная нолярна) особенно ценны при исследованиях метаболизма, так как наиболее полярные компоненты смеси будут в этом случае элюироваться из колонки раньще, чем менее полярные. Пестициды (а также лекарственные вещества) при метаболизме обычно распадаются на более полярные продукты, и использование системы с обращенной фазой позволяет разделить смеси, состоящие из сравнительно неполярного пестицида и всех его метаболитов, образовавшихся в тканях животных или растений. Кроме того, использование хроматографии с обращенной фазой рещает важную проблему, связанную с прочным удерживанием полярных веществ на колонках при обычной хроматографии. [c.195]

В настоящее время газовая хроматография начинает находить применение в анализе инертных газов. Еще недавно широко использовались для этих целей приборы Хлопин-Герлинга, основан Ные на низкотемпературной адсорбции активированным углем аргона, криптона и ксенона и на удалении азота путем его сожжения в кальциевой лампе. М. Г. Гуревич разработал прибор, основанный на этом принципе, в котором до начала анализа инертных газов состав газовой смеси упрощают с помощью поглотительного1 метода анализа и сжигания горючих компонентов над окиськ> меди. Поэтому на таких приборах определяется легкая фракция, содержащая гелий и неон, и тяжелая — аргон, криптон и ксенон. Легкая фракция принимается за гелий, а тяжелая за аргон, что, несомненно, является грубым приближением. Современные методики газовой хроматографии, рассмотренные в настоящей работе, позволяют с высокой чувствительностью определить раздельное содержание азота и всех благородных газов. Количественное определение гелия и аргона имеет важное значение для удовлетворения растущих нужд народного хозяйства и для решения задач поисковой геохимии. [c.120]

С помощью гель-хроматографии впервые удалось разделить высокомолекулярные соединения на группы [70]. Для разделения соединений в широком интервале молекулярных масс использовали многоступенчатую колоночную хроматографию с применением трех типов сефадекса [71]. Большой интерес представляет разделение природных высокомолекулярных органических соединений на порагеле-100 с помощью новой высокоскоростной методики, которая позволяет получить более точные результаты [72]. [c.408]

Со времени появления в третьем издании обзора по хроматографии углеводов [1] в этом направлении произошли кардинальные изменения, обусловленные быстрым развитием ВЭЖХ. Множество классических методик, которым ранее придавалось большое значение в химии углеводов, в настоящее время вытеснены методами ВЭЖХ, и эта тенденция устойчиво сохраняется. Необходимо также отметить все более широкое применение аффинной хроматографии при выделении полисахаридов и гликопептидов, а также открытие в самое последнее время большого числа специфических лектинов. ГЖХ, особенно в сочетании с масс-спектрометрией, представляет собой один из наиболее важных методов структурного изучения углеводов. Продолжение широких исследований в этой области связано прежде всего с модернизацией способов получения летучих производных, повышением эффективности неподвижных фаз и улучшением других параметров, определяющих степень разрешения в такого рода анализах. Существенный прогресс в плоскостной хроматографии связан в последние годы с появлением пластинок для ВЭТСХ, обеспечивающих гораздо большую скорость и эффективность разделения, чем при использовании ТСХ. В настоящей главе в основном обсуждаются новейшие методики разделения и анализа углеводов и их производных и, кроме того, рассмотрены такие не утратившие до настоящего времени своего значения традиционные методы, как ионообменная и гель-хроматография, особенно с точки зрения их сравнения с различными современными автоматическими системами обнаружения, используемыми при хроматографическом анализе углеводов. [c.5]

После того как было выяснено, что содержащиеся в бумаге типа ватман (вследствие применения при ее изготовлении жесткой воды) ионы Са + и Mg + можно удалить промывкой подходящей кислотой, бумажную хроматографию начали применять во всех новых исследованиях. Впоследствии были разработаны прекрасные методики тонкослойной и ионообменной хроматографии, гель-хроматографии и ВЭЖХ. Оглядываясь на- [c.335]

Если в работе используется коммерческий препарат ЛДГ из мышц свиньи (кристаллическая суспензия в 2,2 моль/л сульфате аммония), то он должен быть предварительно обессолен методом гель-хроматографии на колонке (15x1,5 см), упакованной сефадексом G-25. Выделение ЛДГ из сердца свиньи проводят по методике, описанной в лабораторной работе № 17. [c.268]

Окислительно-восстановительная хроматография неорганических ионов в гелях исследована Н. М. Морозовой, А. С. Конищевой и А. Ф. Кобелецкой [45]. Принятая ими методика получения хроматограмм аналогична получению диффузионных осадочных хроматограмм (см. стр. 196) с той лишь разницей, что в гель вносится вместо осадителя окислитель. В различных гелях (желатина, агар-агар), со--держащих окислитель, при изменении концентрации хроматографируемого раствора имеет место пропорциональное изменение высоты зоны диффузионной оксихроматограммы. Последняя зависит также от концентрации окислителя и длительности диффузии. [c.224]

Содержание свободного ментола должно быть не менее Методика количественного определения ментола в мятно методом газожидкостной хроматографии. Анализ проводят раторном газовом хроматографе ГХМ-72 на s-образных насг колонках длиной 3 м с внутренним диаметром 4 мм. Тверды тель — хромосорб W (60—80 мет), неподвижная фаза — п ленгликоль, газ-носитель — гелий, в качестве детектора [c.24]

Методика количественного определения I в эвкалиптовом масле методом газожидн хроматографии. Анализ проводят в лабора газовом хроматографе ГХМ-72 на 8-образк садочных колонках длиной 3 м с внут диаметром 4 мм. Твердый носитель—хромое (60—80 меш), неподвижная фаза — поли гликоль, газ-носитель — гелий, в качестве тора — катарометр. Температура в тер 200 С, в испарителе 250, в колонке 120 ( [c.26]

Газовая хроматография, широко используемая для определения состава скипидара, является методом разделения, в котором анализируемые соединения разделяются между двумя фазами неподвижной и подвижной. Подвижной фазой всегда служит газ, неподвижной — чаще всего жидкость, нанесенная на неподвижный твердый носитель. При анализе скипидара подвижной фазой является гелий или азот, неподвижной — раствор трикрезолфосфата в ацетоне, нанесенный на твердый носитель. В соответствии с методикой хроматографии небольшой объем скипидара вводят в газохроматографическую колонку одной порцией. Отдельные компоненты смеси выходят из колонки поочередно. Хроматографирование ведут в таких условиях, чтобы форма пиков компонентов, регистрируемых самописцем по сигналу детектора, была как можно ближе к гауссовой кривой и чтобы ширина пиков была как можно меньше. Расчет содержания компонентов в скипидаре в процентах производится методом внутренней нормализации по формуле [c.195]

Навеску 5 г исследуемого объекта (взятая из 100 г тщательно измельченной средней пробы) помещают во флакон (типа пенициллинового),добавляют 0,5 мл 96%-ного этилового спирта и 0,5 мл стандартного спиртового раствора бензола (1,7 мг/л). Смесь тщательно перемешивают, флакон закрывают эластичной резиновой пробкой и ставят на 5 мин в металлический цилиндр, который на /з высоты погружают в кипящую водяную баню. Затем нагретым до 60°С шприцем отбирают 5 мл газовой фазы и вводят в хроматограф. Измеренное на хроматограмме отношение высот пиков определяемого вешества и стандарта позволяет с помощью предварительно построенного калибровочного графика (в условиях, идентичных анализу) рассчитать концентрацию дихлорэтана в исследуемом образце. Условия газохроматографического анализа колонка 240X0,6 см с 15% триэтиленгликоля на сферохроме-1 (0,2—0,3 мм), температура 96 °С, скорость газа-носителя (гелий, водород) 70 мл/мин, детектор — катарометр. Предел обнаружения 0,25 мг в 5 г пробы. Погрешность определения в интервале содержания дихлорэтана от 0,25 до 12,5 мг составляет 5—107о- Аналогичная методика разработана Койима и Кобайаши [59] при определении толуола в тканях в интервале концентраций 0,2—2 мг/л с той лишь разницей, что твердая ткань суспендировалась в воде и в качестве стандарта использовался этилбен-зол, который добавлялся к суспензии в этанольном растворе. [c.135]

Специфичность ферментативных тестов можно значительно повысить, проводя анализ не общей ферментативной активности, а отдельных молекулярных форм или изоэнзимов. Для этого применяют такие методики, как электрофорез, ионообменную или гель-распределительную хроматографию, изоэлектри-ческое фокусирование. Еще одним методом анализа изоферментов может служить использование специфических к изоферменту антител. Этот метод обладает высокой чувствительностью и может быть легко автоматизирован. В последние годы получила распространение диагностика наследственных заболеваний при помощи рекомбинантньос ДНК и метода полимеразной цепной реакции. В этой технологии большую роль играют ферменты рестриктазы. [c.87]

Метод Нелсена и Эггертсена достаточно прост, производителен, не требует применения вакуумной системы, поэтому он привлек внимание многих исследователей и получил дальнейшее развитие [71]. Так, например. Рот и Элвуд [72] приспособили промышленный газовый хроматограф для адсорбционных исследований и упростили методику определения и вычисления величин удельной поверхности. В частности, применив заранее приготовленные смеси гелия и азота и проведя калибровку десорбционных пиков, они показали, что в этом случае не требуется измерения абсолютных скоростей потока. Экспериментальные результаты для трех образцов одного и того же адсорбента [c.382]

Ранее в лаборатории авторов были выполнены исследования il] деструкции при экструзии полистирола со средневесовым молекулярным весом М , 6,7-10 и узким молекулярновесовым распределением (МВР). Опыты проводили с помощью капиллярного реометра Instron , который использовался в качестве приспособления для создания высоких скоростей сдвига, моделирующих реальный процесс переработки полимера в изделие. Для оценки МВР образцов после экструзии использовали метод гель-проникающей хроматографии. Эту же методику использовали и в настоящей работе при исследовании высокомолекулярного образца полистирола с 1,8-10 . При этом варьировали различные параметры процесса, что позволило получить некоторые результаты, отличные от описанных ранее. [c.191]