Разделение и анализ гормонов

Начиная с работ М. С. Цвета, открывшего элютивную жидкостно-адсорбционную хроматографию, ее развитие сопровождалось ростом числа приложений в области биологии и медицины. Разработка А. Мартином и Р. Синджем (1941) жидкостной распределительной хроматографии значительно расширила возможности хроматографических методов. Преимуществами распределительной хроматографии является возможность работы в области линейной изотермы сорбции, что позволяет избавиться от деформации хроматографических полос. Кроме того, использование органических жидкостей в качестве неподвижной фазы улучшает возможность подбора необходимого сорбента. Она с успехом применяется для анализа и разделения лекарственных препаратов, гормонов, пестицидов, антибиотиков и других веществ. Основным недостатком классической жидкостной хроматографии является длительность процесса, достигающая суток. [c.78]

Хроматографический метод анализа в последние годы быстро внедряется в самые различные отрасли науки и техники. С помощью хроматографического метода решаются такие трудные проблемы, как разделение близких по свойствам элементов, изотопов, очистка витаминов, гормонов, концентрирование растворов, содержащих следы различных веществ, выделение индивидуальных компонентов из сложных смесей и т. д. [c.7]

Метод хроматографического адсорбционного анализа ( Ал сорбция в главе VI Белки ) был разработан в 1903—1906 гг. русским исследователем М. С. Цветом. В настоящее время этот метод применяется при разделении сложных смесей различных биологических соединений пигментов, аминокислот, антибиотиков, витаминов, энзимов, гормонов. Метод М. С. Цвета дает возможность использовать распределительную хроматографию на фильтровальной бумаге. [c.90]

Русский ботаник М. С. Цвет (1872—1919) создал так называемый хроматографический метод анализа, впервые применив его для разделения пигментов растений. Благодаря этому методу за последние 10—15 лет достигнуты большие успехи в химии витаминов, гормонов, энзимов и алкалоидов. В основу этого метода положено свойство растворенных веществ образовывать адсорбционные соединения с различными минеральными и органическими твердыми веществами. При протекании раствора в строго определенном направлении через колонку, заполненную адсорбе уом, отдельные компоненты раствора располагаются слоями в направлении убывающего адсорбционного сродства исследуемых веществ к адсорбенту. Этот тонкий метод может применяться для следующих целей 1) разделения сложной смеси на ее компоненты 2) определения степени однородности химических соединений 3) выделения веществ из весьма разбавленных растворов 4) определения идентичности двух веществ и контроля технических продуктов 5) количественного определения одного или нескольких компонентов 6) определения молекулярной структуры. [c.544]

Анализ продуктов жизнедеятельности организмов является одной из самых трудных задач биологии, химии и физики. В живом организме в процессе обмена веществ синтезируются и распадаются сложнейшие соединения (белки, углеводы, жиры, ферменты, витамины, гормоны и т. д.). Для очистки и разделения веществ в органической химии и биохимии широко применяются методы, основанные на различиях в упругости пара (обычная перегонка, перегонка с водяным паром, фракционная перегонка, перегонка в вакууме, сублимация и др.) и растворимости веществ (распределение между двумя несмешивающимися жидкостями, экстракция, осаждение специально подобранными веществами или изменением pH раствора и другие приемы). Бурное развитие химии в XX в. вызвало необходимость создания принципиально нового метода выделения и очистки природных веществ, применяемого в тех случаях, когда приведенные выше приемы вызывают глубокие изменения состава выделяемых веществ и когда последние находятся в природном материале в сложных смесях или в ничтожном количестве. Новый метод разделения веществ был открыт в 1903 г. выдающимся русским ученым М. С. Цветом и назван им хроматографическим методом. [c.5]

Только с применением стеклянных капиллярных колонок возможно изучение состава сложных смесей лабильных веществ, характерных для современных исследований в области биологии, судебной и клинической медицины, фармакологии и других дисциплин медико-биологического профиля. Разделение смесей оксикислот, жирных кислот и их производных, ряда терпеноидов и стероидных гормонов, аминоспиртов, аминокислот и их производных, продуктов химических превращений многоатомных спиртов и углеводов, анализ фармакологических средств и их метаболитов, определение следов пестицидов — вот далеко не полный перечень задач, решаемых с помощью стеклянных капиллярных колонок. [c.96]

Хроматографический анализ использовался М. С. Цветом только для разделения органических веществ (растительных пигментов). В настоящее время этот метод широко применяют для разделения, концентрирования и очистки витаминов, гормонов, антибиотиков, кислот, а также многих катионов и анионов. С помощью хроматографии определяют остаточные количества некоторых ионов на растениях, разделяют микроэлементы, мешающие друг другу при анализе почвы и других материалов Ч Таким образом, хроматография имеет особенно важное значение в биологии и сельском хозяйстве. [c.196]

Хроматографический анализ М. С. Цвет использовал для разделения органических веществ (растительных пигментов). Этот метод широко применяют с целью очистки витаминов, гормонов, антибиотиков и кислот от примесей, а также для разделения и концентрирования многих катионов и анионов. [c.468]

Многократное повторение процессов адсорбции — десорбции в динамических условиях, когда вещества непрерывно перемещаются, качественно изменяет возможности этих процессов, создает более благоприятные условия для разделения сложных смесей в одну операцию без сколько-нибудь заметного разложения или изменения их. Методом хроматографии удалось выделить в чистом виде витамины Л и Дз, гормоны, энзимы, ряд антибиотиков, идентифицировать алкалоиды спорыньи и т. д. Хроматография используется для следующих целей 1) разделение смеси веществ, 2) анализ смеси веществ, 3) установление индивидуальности вещества. [c.240]

Количественный газохроматографический анализ широко применяется при изучении медико-биологических объектов, в частности стероидных гормонов надпочечников, выделяемых с мочой [5]. На рис. 142 представлена хроматограмма разделения ацетатов стероидных гормонов из мочи больного инфарктом миокарда в острый период заболевания. Расчет хроматограммы проводился методом внешней калибровки по площади пика (калибровочные графики были получены заранее). [c.351]

Очень много труда было вложено за последние годы в работу по изучению способов разделения, идентификации и анализа различных эстрогенных и других гормонов. Описано хроматографическое разделение природных эстрогенов в виде эфиров тт-фенилазо-бензойной кислоты [450] этот метод пригоден и для определения эстрона и а-эстрадиола в смесях в количествах, меньших 1 мг [451]. [c.223]

Разделение тироидных гормонов методом газо-жидкостной хроматографии. (Анализ тироксина и др. АК нагрев программированный НФ SE-30 на газхроме Q детектор пламенно-ионизационный.) [c.189]

Особое распространение получили методы, основанные на использовании антигенов и антител, меченных ферментами, — так называемый иммунофермеитный анализ. Они используются для изучения широкого круга соединений — антител, пептидных и стероидных гормонов, вирусных и бактериальных антигенов, различных белков и ферментов. Существуют гетерогенные (твердофазные) и гомогенные методы иммуноферментного анализа, принципиально различающиеся способом разделения компонентов иммунохимической реакции. Твердофазные методы основаны на применении антител или антигенов, иммобилизованных на нерастворимых носителях. [c.306]

Применеиие. Ж х важнейший физ -хим метод исследования в химии, биологии, биохимии, медицине, биотехнологии Ее используют для анализа, разделения, очистки и выделения аминокислот, пептидов белков ферментов, вирусов, нуклеотидов, нуклеиновых к-т, углеводов, липидов, гормонов и т д, изучения процессов метаболизма в живых организмах лек препаратов, диагностики в медицине, анализа продуктов хим и нефтехим синтеза попупродуктов, красителей, топлив, смазок, нефтей, сточных вод, изучения изотерм сорбции из р-ра, кинетики и селективности хим [c.153]

Комбинированное использование тонкослойной гель-фильтрации с электрофорезом или иммунодиффузией до настоящего времени представляет собой один из наиболее тонких методов микроанализа белков. Хансон и др. [10] разработали метод двумерного разделения, используемый для анализа белков. На первом этапе белки подвергают гель-фильтрации в тонком слое сефадекса G-200 или G-100, а на втором — электрофорезу. Они предложили прибор, в котором хроматографическую пластинку можно закреплять под углом для гель-фильтрации и горизонтально для электрофореза. В описанных экспериментах использовали стеклянные пластинки размером 30 x 30 см и толщиной 1 мм, на которые наносили слой геля сефадекса толщиной 0,5 мм. Для набухания сефадекс оставляли в 0,05 М вероналовом буферном растворе pH 8,6. Сначала проводили гель-фильтрацию, а затем в направлении, перпендикулярном первому, в течение 3 ч вели электрофорез при градиенте напряжения 10 В/см. Этот метод весьма успешно был применен для анализа сывороток крови человека, спинномозговой жидкости и гормона роста. [c.240]

Гель-хроматография (гель-фильтрация, или ситовая хроматография) — метод разделения, очистки и анализа веществ, основанный на различии в размерах или массе молекул. В качестве стационарной фазы используют различные гели с трехмерной сетчатой структурой декстраны (полисахариды), полиакри ламиды, пористые силикагели, цеолиты и др. При разделении смеси небольшие молекулы диффундируют через поры набухшего в растворителе геля, а крупные молекулы проходят через пространство между частицами геля. При промывании геля растворителем в первую очередь перемещаются крупные молекулы, а затем уже мелкие, т. е. компоненты смеси элюируют в порядке уменьшения их молекулярной массы. Гель действует как молекулярное сито. Аппаратурная простота метода и мягкие условия разделения способствовали особенно широкому применению гель-хроматографии в биохимических исследованиях. Основное назначение гель-хроматографии — разделение высокомолекулярных веществ. С ее помощью выделены и очищены многие ферменты, пептидные гормоны, нуклеиновые кислоты. [c.498]

В работе [38], посвященной анализу стероидных гормонов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, авторы исследовали несколько видов носителей для фиксации амберлита ЬА-1 [н-додеканаль(триалкилметил)амин] в качестве неподвижной фазы. Эти же авторы приводят полезные сведения о разделении андрогенов с применением в качестве носителя фторопласта Р1азкоп СТРЕ-2300, представляющего собой трехзвенный полимер, в основном состоящий из трифторэтилена (рис. 28.1). [c.229]

Для иодсодержащих аминокислот, важных для медицинских целей, характерен низкий уровень их нормального содержания в крови, поэтому для их разделения решено было использовать присущую ГХ чувствительность. Клинический интерес представляют шесть аминокислот моноиодтирозин, дииодтирозин, дииод-тиронин, 3,3, 5 - и 3,5,3 -трииодтиронин, а также 3,5,3, 5 -тетра-иодтиронин. Для этих соединений приняты сокращения МИТ, ДИТ, Тг, Тз, обратный Тз и Т4. Аминокислота Т4—-это тироид-ный гормон тироксин, тогда как Тз обладает аналогичной, но еще большей физиологической активностью, а обратный Тз действует как антагонист Тз и Т4. Относительно концентраций этих веществ у больных и у здоровых людей имелись различные мнения [97, 133, 134], что стимулировало поиск новых методов анализа. Присутствие иода в аминокислотах позволяет приме- [c.92]

Сочетание тонкослойных электрофореза и гель-фильтрации служит удобным методом исследования труднодоступных объектов, поскольку таким способом можно анализировать образцы, содержащие 10—50 мкг белка. При анализе этим методом лио-филизованные препараты гормона роста человека [50] оказались явно гетерогенными (рис. 6). Портер и сотр. [73] применяли двухмерное разделение в тонком слое сефадекса 0-150 при исследовании связывания гепарина белками плазмы было [c.269]

Если вещество, способное, как думали алхимики, превращать неблагородные металлы в благородные, было названо философским камнем , то препаративную газохроматографическую колонку можно, наверно, назвать философской трубкой , которая обеспечивает очистку веществ путем разделения их смеси в газовой фазе. Однако, чтобы не слишком обольщаться нашими достижениями в этой области, следует вспомнить недавно опубликованную работу Нидмана и Гвей-Джена [162]. В этой работе авторы пишут о том, что еще в XI веке нашей эры китайские ятрохимики применяли замечательно тонкие методы фракционирования для выделения из человеческой мочи стероидов половых гормонов, применявшихся в полуэмпирической медицине тех дней. Завершающим этапом в этих методах была сублимация в глиняных горшках. Большое внимание обращалось на степень нагревания с тем, чтобы горшки не были ни слишком горячими, ни слишком холодными [162]. Все мы согласимся с тем, что со времен алхимиков произошел значительный технический прогресс в этой области, однако и по сей день в ГЖХ мы все еще не в состоянии преодолеть трудности, связанные с температурным режимом. Однако существует возможность (лучше сказать, необходимость) создания новой улучшенной методологии, и на этом замечании мы хотели бы здесь остановиться. Последние достижения в ГЖХ, включая образование специальных производных и создание новых детекторов, позволили расширить применение ГЖХ для анализа многих типов соединений, нелетучих в нормальных условиях, а также уменьшить величину анализируемых проб до нанограммов и пикограммов. Настало время, когда хроматографисту нужно дерзнуть и довести [c.324]

Так как исследуемые глюкокортикоиды подвергаются частичному разложению, то определение их носило характер качественного анализа, особенно ценного в случаях недостоверного разделения гормонов на силикагеле. Метод газо-жидкостной хроматографии позволил уточнить присутствие гармона на тонком слое силикагеля. Удалось установить, что при заболеваниях, сопровождающихся резким увеличением выделения стероидных гормонов с мочой, например при инфаркте миокарда, газо-жидкостная хроматография дает вполне удовлетворительную качественную информацию о наличии различных фракций стероидных гормонов в моче. [c.64]

В последнее время особое распространение для разделения и выделения органических соединений нашел так называемый хромотографический адсорбционный анализ, разработанный выдающимся русским ученым М. С. Цветом (1903 г.). Метод этот заключается в том, что раствор, содержащий несколько веществ, пропускается через колонку, наполненную поглотителем (адсорбентом). Так как вещества могут обладать различной адсорби-руемостью (способностью поглощаться), то при пропускании их раствора через адсорбент одни вещества (легче поглощаемые адсорбентом) задерживаются в верхнем слое, другие (труднее поглощаемые)— в более низких слоях. Таким путем происходит разделение сложных смесей на отдельные составные части. Хромотографический адсорбционный анализ нашел широкое применение при биохимических исследованиях. При его использовании удалось выделить многие, витамины, гормоны, ферменты. [c.19]

Этот метод предназначен для анализа и исследования ферментов, гормонов и других амфолитов, представляющих интерес для биологов. Разделение соединений основано на различии их изоэлектрнческих точек. Метод можно определить как электрофорез на слое с градиентом pH. Амфолиты перемещаются по такому слою до тех пор, пока не достигнут такого места, где pH равен их изоэлектрической точке. В этом месте они концентрируются в виде резко очерченной зоны. Следовательно, таким образом можно не только разделить эти соединения, но и определить одновременно их изоэлектрические точки. [c.170]

Большинство веществ биологического происхождения термически неустойчивы, поэтому при анализе их методом газовой хроматографии встречаются трудности. Обычно эти вещества переводят с помощью химических реакций (этерификации, силанизирования) в более устойчивые и более летучие производные. Методом жидкостной хроматографии можно определять практически все соединения непосредственно в биологических жидкостях или их экстрактах. Описано много примеров применения жидкостной хроматографии в этой важной области. Здесь приводятся лишь некоторые из них. Прежде всего следует упомянуть прямой анализ стероидов в биологических жидкостях. На рис. 13.6 приведена хроматограмма разделения стероидов, находящихся непосредственно в сыворотке крови, пики идентифицированы с помощью масс-спектрометра [55]. Искусственная смесь кортнкостерона, кортизона и гидрокортизона хорошо разделяется на колонне с силохромом С-80 [56]. Больщие успехи достигнуты при разделении и анализе стероидных гормонов. Хорошо разделяются сложные смеси эстрогенов [57] и андрогенов [58]. [c.273]

Физические свойства сесквитерпеновых углеводородов идеально соответствуют требуемым для разделения и выделения методом ГЖХ. Впрочем, анализ сложных смесей терпенов не лишен и трудностей, связанных с вышеупомянутой возможно стью их разложения, а также с тем, что на большинстве колонок диапазоны времени удерживания сесквитерпенов и кислородсодержащих монотерпенов перекрываются [38, 39, 82] Успешное разделение ациклических, моноциклических, бициклических и трициклических сесквитерпеновых углеводородов было осуществлено на весьма разнообразных полярных и неполярных жидких фазах [170 —174], и на основании полученных результатов была составлена [175] обширная таблица характеристик удерживания этих соединений (табл. 5.2). Сравнительно меньше внимания исследователи уделяют газо-жидкостной хроматографии кислородсодержащих сесквитерпенов [39], хотя этот метод и оказался вполне пригодным для разделения, например, сесквитерпенов, принадлежащих к группе элемола и эвдесмола [39], трикотекановых митотоксинов и их триметилсилильных производных [176], фураносесквитерпенов [177— 180], а также соединений, относящихся к некоторым другим структурным типам [181, 182]. На колонках с полиэфирной неподвижной фазой и с силиконовым маслом были разделены разнообразные геометрические изомеры фарнезола [183] и ювенильного гормона [184]. ГЖХ (в сочетании с использованием пламенно-ионизационного детектора или детектора по захвату электронов) лежит в основе различных методов определения абсцизовой кислоты [185—188]. [c.241]

Ионообменные, в том числе хроматографические, методы выделения, очистки и разделения сложных смесей органических веществ приобрели исключительно широкое распространение как в области экспериментальных исследовашга, так и в промышленной практике. Получение многих аминокислот, полипептидов, белков, нуклеотидов, нуклеиновых кислот, выделение и очистка антибиотиков, витаминов, гормонов, алкалоидов стали немыслимы без использования ионообменных процессов, часто в сочетании с гелевой хроматографией. В нодавляюш,ем большинстве случаев процесс осуш ествляется на ионитах, принадлежащих к числу синтетических нерастворимых нолиэлектролитов с различной степенью набухания. Можно без преувеличения сказать, что ионообменные процессы как метод избирательного извлечения или метод анализа применяются во всех отраслях химии и биологии. [c.3]

Хроматографический метод анализа аминокислот. Метод хроматографии впервые был применен в 1903 г. М. С. Цветом для разделения растительных пигментов. По словам швейцарского химика П. Каррера, никакое другое открытие не оказало такого огромного влияния и так не расширило возможности исследования химика-органика, как хроматографический анализ Цвета. Исследования в области витаминов и гормонов, кароти-ноидов и многочисленных других природных соединений нико- [c.14]

Карстен и Пирс [27] получили гликопентиды из ТСГ обработкой гормона трипсином и папаином и использовали сефадекс для выделения углеводсодержащих пептидов из инкубационной смеси. Дальнейшее разделение было достигнуто с помощью хроматографирования на ДЭАЭ-целлюлозе. На основании анализа гликопептидов авторы сделали вывод, что все углеводы сосредоточены в одном компоненте, состоящем из 1 остатка фукозы, [c.242]

Дипептид вилон (L-Lys—L-Glu) был сконструирован на основании статистического анализа аминокислотного состава препарата Тималин (Морозов и др., 20006 Хавинсон, 20016). Данные табл. III Приложения свидетельствует о том, что этот дипептид представляет собой структурный элемент многих тимических гормонов. Как показывает рис. 3, отличительной особенностью этого дипептида является отчетливое разделение электростатических зарядов между двумя его концами положительно заряженные аминогруппы принадлежат остатку лизина, а отрицательные заряды сосредоточены на остатке глутаминовой кислоты. Такая структура свидетельствует о способности вилона активно участвовать в электростатических (ион-ионных и ион-дипольных) взаимодействиях. [c.34]

В том случае, когда рецептор построен нз нескольких субъединиц, необходимо установить вклад каждой из них в формирование активного центра. Для этого производят разделение субъединиц изолированного рецептора, прибегая при необходимости к восстановлению межсубъединичных дисульфидиых связей. Подобный анализ, выполненный, например, на инсулиновом рецепторе, показал, что за связывание гормона отвечает а-субъ-единица, в то время как р-субъединица какого-либо вклада в этот процесс не вносит (см. гл. 1). [c.44]

В настоящее время существуют методы одновременного анализа около 1000 разных белков из одной и той же ткани (например, двухмерное разделение по электрофоретической подвижности и изоэлектрическим точкам),. Обработка клеток-мишеней стероидными или тиреоидными гормонами и последующий анализ качественного и количественного состава белков показьтеа-ют, что в одной и foй же клетке индукции или- репрессии подвергается, как правило, 5—7 белков. Таким об- [c.56]

Книга разделена на главы, посвященные отдельным классам соединений, причем последовательность глав не связана с последовательностью разделения по Стас — Отто (гл. ХХ1П), так как мы не считали это необходимым. Указанный способ и в настоящее время используется для предварительного разделения органических лекарственных веществ. Однако наряду с ним часто оказывается предпочтение хроматографическим методам. Поэтому последовательность глав не должна ограничивать выбора той или иной последовательности разделения. Ведь разумный выбор наиболее подходящих для работы аналитических методов служит важнейшей предпосылкой успешного выполнения органического анализа. При наличии в молекуле исследуемого вещества нескольких реакционноспособных групп включение вещества в ту или иную главу определялось самой характерной группой, хотя, конечно, однозначная классификация не всегда была возможна. Иначе построены главы, посвященные витаминам, гормонам и антибиотикам, объединение которых в указанные группы в соответствии с традициями, сложившимися в литературе по фармакологии, не подчинено принципу химической классификации. То же относится к гл. ХХП Вспомогательные вещества в фармации . [c.8]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология