Разделение уроновых кислот

Все методы анализа сырья с целью установления состава, строения и свойств полисахаридов основаны на определении отдельных компонентов, содержащихся в гидролизатах полисахаридов, полученных при различных условиях гидролиза. Наиболее полную информацию о составе моносахаридов, олигосахаридов и уроновых кислот, присутствующих в гидролизатах, получают тогда, когда делают анализ хроматографическим методом на бумаге. Этим методом сахара и другие вещества разделяют и выделяют из смеси с различными веществами в том виде в каком они присутствуют в гидролизатах без изменений, а затем определяют их количество. При анализе смесей углеводов ч помощью газожидкостной хроматографии сахара необходимо сначала превратить в летучие производные, а затем провести их разделение и определение. Без потерь перевести сахара в летучие производные невозможно, поэтому результаты анализов менее точны, но время, затрачиваемое на анализ этим методом, значительно меньше [14]. [c.24]

Весьма часто при исследовании гемицеллюлоз получают гидролизаты, содержащие одновременно моносахариды, уроновые кислоты, нейтральные и кислые олигосахариды. В этом случае для разделения и идентификации компонентов применяют хроматографию на бумаге, разделение на колонках с ионообменными смолами, углем, сефадексом, газожидкостную хроматографию. Ниже на примере фракционирования гидролизатов гемицеллюлоз люцерны [177] показан метод разделения такой смеси. [c.125]

Первые исследования в этом направлении молодых побегов сосны [26] без разделения их иа луб, древесину и сердцевину привели к недостаточно правильным выводам о постоянстве содержания пентозанов и лигнина в процессе развития древесных тканей. Исследование изменения состава отдельных тканей побегов, луба, древесины и сердцевины показало, что состав этих тканей в побегах сосны различен и по-разному изменяется с возрастом [27]. Так, в остатке после отделения растворимых веществ в этаноле, горячей воде и 0,57о-ном щавелевокислом аммонии обнаружено резкое снижение с возрастом содержания уроновых кислот, небольшое снижение содержания пентозанов и увеличение содержания лигнина. [c.312]

Для разделения уроновых кислот, а также для отделения их от нейтральных компонентов применяют колонки, наполненные ионообменными смолами [45, 47, 48]. [c.75]

Другим затруднением при разделении уроновых кислот является образование лактонов при растворении кислоты немедленно наступает равновесие между свободной кислотой и ее лактоном, зависящее от pH раствора, температуры и других условий. В этом случае на хроматографическую бумагу фактически наносят раствор двух веществ (кислоты и ее лактона). Уроновые кислоты и лактоны сравнительно устойчивы в нейтральных и кислых системах, нри помощи которых их можно отделить. В щелочной среде лактонный цикл размыкается и на хроматограмме образуется грязная полоска между лактоном и кислотой (рис. 138). В слабощелочных системах размыкание лактона не наблюдается, однако, как установили Фишер [c.280]

Боге и сотрудники предпочитают разделение метилированных сахаров проводить метилэтилкетоном, насыщенным водой. По данным Хафа и сотрудников [1], для разделения уроновых кислот целесообразно пользоваться кислой системой к-бутанол — уксусная кислота — вода в соотношении 4 1 5. [c.284]

Как указывалось ранее, в гидролизатах, помимо нейтральных моносахаридов, часто присутствуют О-глюкуроновая и О-галакту-роновая кислоты. Хроматографией на бумаге с растворителями, применяемыми для разделения моносахаридов (как, например, этилацетат—пиридин—вода), уроновые кислоты не разделяются. В кислых растворителях (этилацетат—уксусная кислота—вода) значения Rf этих уроновых кислот очень близки. По этой причине не достигается на хроматограммах достаточно отчетливое разделение. [c.87]

Мешающие вещества. При анализе растворов, не прошедших хроматографического разделения, определению суммы редуцирующих сахаров мешает разнообразие их редуцирующих способностей и присутствие посторонних редуцирующих веществ — уроновых кислот, фурфурола и т. д. При анализе элюатов из хроматограмм этих помех нет. [c.85]

Фракционирование обычно проводят при pH 7,0, при котором полисахариды наиболее устойчивы. При выдерживании гемицеллюлоз 1 кислой среде может происходить значительный гидролиз гликозидных связей [1], а в растворах оснований наблюдается щелочное расщепление 12]. При pH 7,0 карбоксильные группы уроновых кислот, входящих н состав гемицеллюлоз, находятся в форме ионизованных солей. Иногда хорошее разделение полисахаридов достигается только в кислой среде (pH 2—4), если эти карбоксильные группы не ионизованы. Поскольку при низких значениях pH может происходить гидролиз, разделения лучше проводить с небольшими количествами веществ, быстро и при пониженной температуре. [c.285]

Путем извлечения из больших объемов воды активированным уг--лем с последующими десорбцией и хроматографическим разделением в ацетоновой и щелочной фракциях во ВСЕГИНГЕО были определены Б составе органических веществ, растворенных в подземных водах, следующие типы химических соединений смоляные кислоты, жирные кислоты, вещества, образующие после гидролиза смолоподобные продукты, — в количестве единиц миллиграммов на литр фонолы, фульвокислоты, аминокислоты (гликоколь, лизин, аспарагин, р-аланин, глютаминовые кислоты), сахара и уроновые кислоты — в количестве сотых долей миллиграмма на литр углеводороды с числом атомов углерода 17 и выше, терпены, тимол, пуриновые и пиримидиновые основания — в количестве тысячных долей миллиграмма на литр. [c.70]

Электрофорез особенно успешно применяется для обнаружения моносахаридов, в молекуле которых имеются основные (как в аминосахарах) или кислые (как в альдоновых, уроновых, сахарных кислотах, фосфатах и сульфатах сахаров) группировки (см., например, ). В тех случаях, когда необходимо разделить нейтральные моносахариды, используют их способность образовывать отрицательно заряженные комплексы с борной кислотой или ее солями , с молибдатами , вольфраматами, германа-тами и рядом других неорганических анионов разные анионы предъявляют часто различные требования к стереохимии моносахарида, необходимой для образования устойчивых комплексов. Естественно поэтому, что выбор комплексообразователя и условий проведения электрофореза, в первую очередь pH растворов, весьма существенно влияет на результат разделения (см. ). Для обнаружения зон веществ на электрофореграммах применяется большинство реагентов, используемых при хроматографии на бумаге. [c.411]

О первом успешном разделении уроновых кислот на ионообменниках сообщается в работе Кима и Догерти [152]. Они разделили галактуроновую и глюкуроновую кислоты на дауэксе-1 (СНзСОО -форма) с применением в качестве подвижной фазы 0,15 М уксусной кислоты. Свободные сахариды (арабиноза и галактоза), которые не адсорбировались на смоле, отбирали в виде первой фракции. В другой работе [153] описывается отделение глюкуроновой и маннуроновой кислот друг от друга и от не полностью разделенной смеси глюкуроновой и галакту-роновой кислот на колонке (45x2 см) с дауэксом 1-Х8 (СНзСОО -форма) методом линейного градиентного элюирования уксусной кислотой (0,5—2,0 М.) при скорости подвижной фазы 0,3—0,5 мл/мин. [c.115]

Ход анализа. Хроматографирование исследуемой пробы проводят так же, как при количественном определении сахаров (см. с. 83), применяя растворитель — смесь бутанола, пиридина и воды. Через 120—130 ч хроматографирования снимают одну полоску, высушивают и проявляют анилинфталатом. На основании проявленной хроматограммы определяют, достигнуто ли нужное разделение уроновых кислот и отделение их от углеводов. Если результат хроматографирования удовлетворяет исследователя, то все хроматограммы снимают, сушат на воздухе до полного удаления запаха растворителя и, пользуясь дополнительными свидетелями, из хроматограмм вырезают кусочки, содержащие одну или несколько уроновых кислот (см. рис. 31). Извлекают уроновые кислоты из хроматограмм водой и определяют их количество так, как описано на с. 89 для сахаров. [c.93]

Много работ опубликовано по хроматографии углеводов, особенно В. В. Рачинским, Б. Н. Степаненко. Установив зависимость между структурой и величиной Rf, можно оценить степень полимеризации олигосахаридов, влияние положения оксигрупп. На бумаге из стеклянных волокон, предварительно забуференной, можно четко разделять различные монозы, биозы, триозы, галактуровую и глюкуроновую кислоты. В микроорганизмах можно определять связанные углеводы, свободные MOHO- и дисахариды в растительном материале, также свободные олигосахариды, свободные углеводы в крови и моче, молоке, наблюдать гидролиз и синтез олиго- и полисахаридов, энзиматические превращения моносахаридов в связи с процессами окисления, восстановления, изомеризации, реакции углеводов с азотсодержащими соединениями, контролировать чистоту углеводов и идентифицировать их, определять кислоты и ла-ктоны, уроновые кислоты, кетокислоты, метилированные сахара, дезоксисахара, аминосахара, полисахариды, инозит, сорбит, эфиры фосфорной кислоты, структуру галактоманнана, эремурана, новых галактозидов, проследить превращение сахарозы, синтез олигосахаридов в растущей культуре. Бумажная хроматография применяется в сахарной промышленности, в пивоварении. Мало еще разработана теория распределительной хроматографии углеводов, мало изучены возможности разделения оптических изомеров и антиподов. [c.201]

Состав уроновых кислот в некоторых фракциях был определен хроматографированием гидролизато на колонках с анионитами [11] и количественным определением разделенных уроновых кислот по реакции с орци-ном. Результаты, выраженные в виде соотношения количеств остатков D-маннуроновой и ь-гулуроновой кислот (M/G), приведены в табл. 2. В полученных величинах не учитывается различная скорость распада уроновых кислот во время гидролиза [11]. [c.321]

Неионообменная порошковая целлюлоза применяется в качестве носителя при распределительной хроматографии и электрофорезе на колонках и в слоях. Целлюлоза используется для хроматографического разделения сахаров, глицеридов, спиртов, фенолов, аминов, карбоновых и аминокислот, пептидов, белков, нуклеиновых кислот, уроновых кислот, липидов, алкалоидов, антибиотиков, гормонов, ферментов, витаминов, гербицидов и инсектицидов, неорганических ионов, красителей, углеводородов и других веществ. Применяется также для электрофореза белков, пептидов, аминокислот, нуклеиновых кислот, нуклеотидов. [c.127]

С исйользованнем аналогичной методики [28] из бамбука выделены ЛУК [29 , содержащие фе] ольные кислоты. .Tua из фракций ЛУК содержала (%) 34,7 — нейтральных сахаров, 1,6 — уроновых кислот, 52,1 — лигнина, 6,1 — фенольных кислот, а другая — 67,9, 3,6, 22,3 и 1,1 соответственно. Углеводы в выделенных комплексах представлены линейными цеиями -(l—v4)-связанных остатков ксилозы, к каждому третьему звену которой ири-соединено одно звено 4-0-метил-Л-глюкуроновой кислоты и один или два остатка арабинофуранозы. Фенольные кислоты представлены и-кумаровой и феруловой кислотами. В ЛУК имеются как щелочно-стабильные, так и лабильные связи между лигнином и углеводами. Отмечаются поверхностно-активные свойства ЛУК, объяснимые содержанием остатков гидрофильных углеводов и гидрофобного лигнина в одной молекуле. По мнению авторов работы [29], использование фракционирования на гидрофобных гелях открывает новые возможности для разделения смеси ЛУК, однородных по отношению к электрофорезу и ультрацентрифугированию ио содержанию в них лигнинной части. [c.174]

Определение моносахаридного состава проводится анализом продуктов кислотного гидролиза или. чаще, мета-нолиза сахарида. Состав продуктов кислотного гидролизата анализируется с помощью хроматографии или электрофореза на бумаге. Нередко используется коммерческий углеводный анализатор, разделение осуществляется на ионообменных смолах методом распределительной хроматографии в водно-спиртовой смеси или в виде боратных комплексов сахаров. Скорость гидролиза гликозидных связей, образованных остатками нейтральных, амино- и дезокси-сахаров, различна. Легче всего отщепляются остатки сиаловых (N-ацетилнейраминовой, N-гликолилнейраминовой) кислот, труднее всего расщепляются свяэи, образованные остатками амино-сахаров и уроновых кислот. Фуранозиды гидролизуются значительно быстрее пиранозидов. В итоге при гидролизе олигосахарида может иметь место неполное расщепление связей или кислотная деструкция образующихся моносахаридов, что искажает результаты анализа. Лучшие результаты дает метанолиз в присутствии газообразного хлористого водорода (1.7 н. H l, 80 С, 18 ч) — в этом случае образуются метилгликозиды, устойчивые к кислотной деструкции. Качественный и количественный состав продуктов метанолиза определяется методом газожидкостной хроматографии в виде триметилсилильных или трифторацетильных производных. [c.463]

Уроновые кислоты разделяли на слое силикагель — гппс, приготовленном с добавлением вместо воды 0,1 N борной кислоты [67], в системах бепзол — метаиол — уксусная Хлислота (1 3 1) и метилэтилкетон — метанол — уксусная кислота (3 1 1) и при двукратном хроматографировании на слое, приготовленном из порошка целлюлозы MN300. В этом случае разделение про- [c.87]

Способность сахаров образовывать комплексные соединения с боратами использовал Халлен [157] для разделения галакту-роновой и глюкуроновых кислот на дауэксе 2-Х8. Смеси этих кислот содержали также маннозу, фукозу, галактозу и глюкозу. Эти нейтральные сахара элюировали при комнатной температуре 0,01 М раствором буры в 0,2 н. растворе бикарбоната натрия. Уроновые кислоты элюировали 0,03 М раствором буры в 0,6 М растворе бикарбоната натрия после появления в элюате последнего нейтрального сахарида (скорость подвижной фазы [c.117]

Ионообменная хроматография карбоновых кислот в растворах ацетата натрия и уксусной кислоты имеет широкое использование. Этим методом оказывается возм[ожным разделять даже очень сложные смеси оксикислот, что особенно важно для химии сахаров. Раствор ацетата натрия является подходящим элюентом для разделения ионов различных монокарбоновых кислот. Альдоновые и уроновые кислоты элюируются в порядке увеличения молекулярной массы. Если сравнить поведение при элюировании кислот с равным числом углеродных атомов, но с различным числом гидроксильных групп, то оказывается, что силы взаимодействия со смолой увеличиваются с уменьшением числа таких групп. Это дает возможность разделять ряд стереоизомеров, различающихся по степени гидратации и по силе ионного взаимодействия. Однако некоторые изомеры кислот не разделяются путем элюирования раствором ацетата натрия, и в таком случае более выгодно использовать уксусную кислоту. При элюировании уксусной кислотой наиболее важным фактором является кислотность разделяемых кислот. Слабые кислоты элюируются легче, чем сильные кислоты. Если кислоты элюируются буферными смесями, составленными из уксусной кислоты и ацетата натрия, влияние состава элюирующей смеси на удерживаемые объемы легко оценить, применив закон действующих масс. Было найдено также, что элюционную хроматографию органических кислот на анионообменных смолах в ацетатной среде можно успешно использовать для анализов некоторых кислот, содержащихся во фруктовых соках. Гуди и Риман [27] количественно разделили смесь 4—9 мг яблочной, винной и лимонной кислот, находящихся в фруктовых соках, и отделили их от сахаров с помощью 2,0 М раствора уксусной кислоты и 0,4 М [c.160]

При разделении кислот с помощью элюирующих агентов, содержащих катионы, способные в определенной степени образовывать комплексы с разделяемыми кислотами, стремятся к увеличению скорости эксперимента. Самуэльсон [42] получил теоретические уравнения, в которых отражена зависимость поведения кислот при элюировании от величины комплексообразующих констант. В такой хроматографии центральный ион присутствует в значительной концентрации, в то время как лиганды встречаются только в следовых количествах, и, следовательно, использование выведенных уравнений совершенно не обосновано поэтому можно сделать лишь грубые количественные оценки. Вещества, которые образуют несорбирующиеся комплексы, например альдоновые кислоты, в элюате появляются быстро. Эти кислоты могут быть затем легко отделены от других кислот, например уроновых кислот, которые не образуют комплексы. Для различных кислот существуют значительные отличия в условиях элюирования. [c.171]

Для элюирования альдоновых и уроновых кислот первоначально использовали 0,05 М раствор уксуснокислой меди (II) (см. также гл. 22). Альдоновые кислоты образовывали прочные комплексы, которые не сорбировались и, следовательно, легко элюировались. Уроновые кислоты элюировались значительно позднее. Следовательно, условия для группового разделения альдоновых и уроновых кислот и последующего выделения некоторых уроновых кислот являются благоприятными. Однако удовлетворительного разделения достигнуто не было, так как уроновые кислоты окислялись с одновременным образованием закиси меди [42, 43]. По этой причине Ларссон и сотр. [44] в качестве комплексообразующего агента использовали 0,05 М раствор ацетата цинка. Было достигнуто разделение галактоно-вой, молочной, галактуроновой, глюкуроновой, муравьиной и пировиноградной кислот на дауэксе-1 с диаметром частиц 40— 60 мкм, а смесь галактоновой, арабоновой, гликолевой, леву-линовой, глюкуроновой, глиоксиловой и муравьиной кислот хорошо разделялась на анионообменнике даже с более мелкими частицами (13—18 мк). Так как большинство кислот образуют несорбируемые комплексы с ионами Zn , то коэффициенты распределения были значительно ниже, чем в растворах ацетата натрия. Порядок элюирования дан при постоянстве констант комплексных соединений и селективности коэффициентов анионов, не образующих комплексные соединения. Коэффициенты разделения некоторых кислот отличались до некоторой степени на обеих колонках с разными размерами частиц ионообменников [c.171]

Другим важным фактором, влияющим на величину обменной емкости, является продолжительность контакта раствора с анионитом. Вследствие хроматографического разделения кислот на анионите и присутствия крупных молекул полиуронидов процесс протекает более благоприятно при небольших скоростях фильтрации (для большинства анионитов удельная нагрузка не превышает 1). В ряде случаев большое значение имеет структура анионита. Например, несмотря на хорошие результаты, получаемые на блочном анионите АН-2Ф,тотже анионит, изготовленный в виде гранул, не поглощает значительной части уроновых кислот, однако по мере разрушения гранул pH фильтрата повышается. По-видимому, это явление связано с доступностью активных групп смолы. Согласно экспериментальным данным, наибольший эффект дает применение слабоосновных анионитов — ЭДЭ-ЮП, АН-2Ф, АН-9 и сильноосновных — АВ-16 и АВ-17 [18]. [c.233]

Изучение хроматографического разделения в ацетатной среде было позднее распространено на 44 в основном гидро-ксилсодержашие органические кислоты для нахождения соответствующих условий проведения анализов в различных областях химии сахаров [34]. Некоторые альдоновые, альдобионовые, метилированные альдоновые, уроновые и биуроновые, альдегидо- и кетокислоты и гетероциклические кислоты были исследованы на сильноосновной анионообменной смоле дауэкс [c.165]