Альбумин сывороточный получение

Из гидролизатов желатина, например, было получено путем ресинтеза вещество, не отличимое от исходного желатина. При давлении выше 6000 атмосфер степень ресинтеза достигает 100%. Аналогичные результаты были получены, исходя из яичного альбумина, сывороточного альбумина, инсулина и других природных белковых веществ. Полученные при ресинтезе вещества были подобны исходным по биологическим свойствам. Вещество, полученное ресинтезом из гидролизатов инсулина, в значительной мере обладает даже гормональной активностью исходного инсулина. [c.393]

Альбумины — белки, хорошо растворимые в воде. Из растворов их не удается осадить поваренной солью (как многие другие белки). При прибавлении к раствору альбумина сернокислого аммония альбумин осаждается лишь тогда, когда концентрация (МН4)2304 достигнет 65% той концентрации, которая необходима для полного насыщения раствора Ряд альбуминов был получен в кристаллическом состоянии. Альбумины содержатся в белке яйца (яичный альбумин), молоке (молочный альбумин), сыворотке крови (сывороточный альбумин). [c.341]

Из полученных результатов возникает вопрос о возможном взаимодействии флавоноидов с белками крови (сывороточным альбумином) или поверхностными белками биомембран различных клеток. [c.578]

На то, что прочные пространственные структуры поверхностных и межфазных слоев биополимеров могут быть стабилизованы водородными связями, указывает результат, полученный Александером и сотр. [53—55] введение в субстрат агентов, разрушающих водородные связи, приводило к исчезновению структурной вязкости и упругости монослоев белков. В тех же работах обсуждена роль солевых связей в упрочнении белковых пленок. Авторы считают, что эластические свойства сывороточного альбумина обусловлены возникновением большого числа солевых связей в межфазных слоях. Пленки этого белка чувствительны к изменению электрического потенциала. [c.160]

Ход работы. Окса.татную кровь, т. е. кровь, стабилизированную добавлением щавелевокислого калия (удалены ионы кальция), отцентрифугировать и отделить плазму от форменных элементов. К 30 мл полученной плазмы добавить 20 мл воды, затем 50 мл насыщенного раствора сернокислого аммония. Выпавший осадок, состоящий из фибриногена и сывороточного глобулина, отфильтровать и фильтрат насытить добавлением твердого сернокислого аммония. Образовавшийся осадок альбумина отфильтровать и растворить, добавляя к осадку воды. Отделить на центрифуге прозрачный раствор альбумина и с этим раствором проделать реакции осаждения и цветные реакции. [c.179]

В отличие от карбоксипептидазы большая часть природных белков не содержит ионов металла в активном центре. Ионы металлов часто образуют с белками обратимые комплексы. Бычий сывороточный альбумин (БСА) связывает до 20 ионов переходных металлов на молекулу. В соответствии с данными фиг. 78 можно ожидать, что при физиологических pH происходит связывание с имидазолом или карбоксильными группами, расположенными благоприятно для образования комплексов, что, по-видимому, и имеет место в данном случае. Однако из фиг. 78 следует также, что единственная сульфгидрильная группа в БСА должна быть местом преимущественного связывания металла. Так, каждый третий ион меди, приходящийся на молекулу БСА, по-видимому, связывается с сульфгидрильной группой. На высокую специфичность связывания с ионами металлов указывает также возможность получения для целей рентгеноструктурного-анализа производных гемоглобина и миоглобина, содержащих тяжелые атомы. [c.414]

Рис. 31. Ультрафиолетовые спектры поглощения типичной белковой молекулы сывороточного альбумина (кривые 2 и 4) и аминокислот полученных после его разрушения (кривые / и 5). Кривые 1 и 2 получены в кислом растворе, где фенольные группы неио-низированны кривые 3 и 4—в щелочном растворе, где фенольные группы находятся в виде фенолят-ионов .

На самом деле из табл. 11 видно, что при указанных условиях для ряда белков значения ВМ лежат в пределах, отличающихся от теоретического значения 3,0 примерно лишь в 2 раза. Это обстоятельство следует рассматривать как очень хорошее доказательство того, что форма молекул в действительности близка к сферической. Вероятно, не имеет смысла делать предположения относительно возможных причин отклонения наблюдаемых величин ВМ от 3,0 (низкие значения, наблюдаемые для яичного альбумина и бычьего сывороточного альбумина, могут быть обусловлены межмолекулярным притяжением, о чем шла речь в разделе 12д), поскольку точность экспериментальных измерений низка. Равенство ВМ = > означает, что величина П/сг при концентрации белка 0,01 г мл отличается от величины, полученной путем экстраполяции, на 3%, что не намного больше ошибки опыта поэтому на практике значения В получают, проводя опыты при концентрации белка от 0,05 г мл и выше. Это высокие кон- [c.274]

На рис. 65 приведены данные, полученные Скэтчардом и сот-рудниками для вириального коэффициента В бычьего сывороточного альбумина при значениях I, отличающихся от нуля. [c.275]

Все эти участки одинаковы, и при степени полимеризации кислоты, равной п, их число также равно п. С другой стороны, при изучении реакции метилового оранжевого или иона иодида с сывороточным альбумином такая информация отсутствует и может быть получена только при экспериментальном исследовании этой реакции. Ниже обсуждаются пути обработки экспериментальных результатов с целью выяснения этого вопроса. Мы покажем, что во многих случаях реагирующие участки вообще не могут быть определены, если исходить только из данных, полученных при изучении состояния равновесия [c.612]

Разные денатурирующие агенты вызывают различное изменение конформации. Один и тот же белок может вступать в различные реакции денатурации. Например, как было показано в разделе 28, в кислом растворе сывороточный альбумин денатурирует, т. е. принимает более рыхлую конформацию. Денатурация сывороточного альбумина происходит также под действием теп-ла 2, приводя к получению продукта, нерастворимого в определенных стандартных условиях, при которых нативный продукт растворим. (Вопрос о том, является ли конформация макромолекул на начальных стадиях процесса более развернутой, не исследовался.) Было показано, что скорость термической денатурации уменьшается в тех условиях, когда скорость кислотной увеличивается, т. е., очевидно, кислотная денатурация приводит к образованию продукта, отличного от продукта термической денатурации. [c.704]

Хотя метод получения вакцин с использованием синтетических пептидов обладает значительными потенциальными возможностями, имеются и существенные сложности, связанные прежде всего со слабой антигенной активностью большинства индивидуальных пептидов из-за их малого размера. Усиления иммуно-генности таких пептидов часто удается добиться после связывания их с высокомолекулярными носителями (например бычьим сывороточным альбумином). Однако получение таких вакцин весьма трудоемко и дорого. [c.435]

Смит II соавторы с помощью аффинной хроматографии очищали рецептор прогестерона человека. Содержание рецептора в матке составляет лишь 0,002% суммарного белка, и оп весьма лабилен. В качестве лиганда использовали 11-дезоксикортикостерон. Гормон сажали на Br N-активнрованную сефарозу 41 в виде конъюгата с бычьим сывороточным альбумином. Полученный таким образом аффинный сорбент инкубировали 18 ч с частично очищенным цитозолем матки, промывали 0,4 М КС1 и элюировали мкМ раствором меченного тритием прогестерона. Рецептор выходил в комплексе с гормоном. Операция обеспечивала очистку в 10 ООО раз. Вместе с предварительной 6-кратной очисткой цитозоля осаждением сульфатом аммония это позволило авторам получить гомогенный препарат рецептора [Smith et al., 1981). [c.434]

Для получения органических препаратов, меченных можно применять как методы синтеза, так и методы изотопного обмена. Сравнительно короткий период полураспада изотопа является одним из решающих факторов при выборе того или иного метода получения. В нашей литературе имеется весьма ограниченное число работ, посвященных методам получения йодсодержащих органических соединений, меченных Это в основном работы Бокарева К. С. и Мельникова Н, Н. [1], Ойвина В. И. и Корец-кой Л. С., описывающие получение сывороточного альбумина [2], и ряд исследований по получению дийодфлуоресцеина [3]. [c.188]

Многими исследователями показано, что изменение температуры не сильно влияет на связывание дифильных молекул белками [143, 173—178]. В работе [175] указывается, что температурный коэффициент связывания каприлата натрия сывороточным альбумином равен нулю. Значения, полученные для теплот связывания сывороточным альбумином ионов ароматических сульфатов натрия и алкилсульфатов натрия [176], во всех случаях также очень малы. Так как AF и А/7 малы, то сродство альбумина к этил1 ионам, объясняется в первую очередь положительными изменениями энтропии. По представлению Клотца [177], увеличение энтропии при образовании комплекса между двумя отдельными частицами указывает на то, что растворитель играет главную роль в этом процессе. [c.34]

Давно известно, что облучение водных растворов белков изменяет спектры поглощения в ультрафиолетовом свете. На рис. 39 приведены данные Гузман Баррона [62], полученные при облучении сывороточного альбумина быка рентгеновскими лучами, Максимум поглощения при 2800 А в значительной мере обусловлен тирозином и частично триптофаном максимум [c.225]

Реакции разрыва и сшивания и обусловленные ими изменения размеров и формы молекул отражаются на физических свойствах растворов облученных белков. При агрегации фибриногена [58, 70] и сывороточного альбумина быка [62, 63] обычно цроисходит увеличение вязкости растворов. Вязкость растворов овальбумина возрастает, если облучение проводится при изо-электрической точке или при низких pH, но уменьшается при высоких pH [75]. Мы видели, что уменьшение вязкости может сопутствовать увеличению молекулярного веса при образовании разветвленных структур поэтому результаты, полученные при высоких pH, не обязательно отражают деградацию. [c.228]

Антигены, полученные из гаптена, часто могут связывать малые молекулы, если последние по размерам и природе близки к связывающим группам гаптена. Так, антигены, полученные при инъекции кроликам бычьего сывороточного альбумина, к которому был присоединен диазотированный 4-аминофеноксихолин [c.393]

Чтобы разделение осуществлялось строго по размерам молекул, необходимо свести к минимуму электростатическое взаимодействие между пептидами и матрицей. С этой целью применяют буферные растворы с высокой ионной силой и соответствующей величиной pH. Удобно работать с летучими буферными растворами, упомянутыми в предыдущем разделе. В качестве примера успешного разделения пептидов по размерам молекул следует указать получение фрагментов сывороточного альбумина человека [20]. Смесь трех пептидов в виде малеилпроиз-водных фракционировали в 0,1 М растворе бикарбоната натрия на колонке длиной 250 см с сефадексом 0-100. Как и следовало ожидать, первый пик соответствовал наиболее крупному фрагменту, а последующие — среднему и наиболее короткому (рис. 34.1). [c.398]

Особый интерес представляет общий метод выделения триптофансодержащих пептидов, разработанный на примере сывороточного альбумина человека и цитохрома с лошади [50]. Остатки триптофана в белках количественно модифицировали с использованием высокоспецифичного реагента, 2,4-динитрофенил-сульфинилхлорида, проводили триптический гидролиз, после чего соответствующие пептиды избирательно извлекали на колонке с фиксированными анти-ДНФ-антителами. Получение сор- [c.416]

Как уже указывалось, глобулины сыворотки могут быть выделены при помощи электрофореза. Нельзя с уверенностью утверждать, что фракции, полученные этим методом, представляют индивидуальные белки, так как в результате ультрацентрифугирования получаются несколько иные фракции и, вообще говоря, по мере усовершенствования методов разделения белков удается получить все большее число фракции . Некоторые фракции сывороточного альбумина содержат гликопротеид. С другой стороны, состав сывороточных белков непостоянен. Исследование иммунологических реакций показало, что в сыворотке животного могут образоваться многочисленные новые белки, не существующие в сыворотке других индивидуумов этого рода. Установлено, что белки такого типа — антитела — составляют фракцию у-гло-булинов. В случае некоторых заболеваний при помощи электрофореза обнаруживают изменение состава белков сыворотки. Таким образом, эти белки являются чрезвычайно сложной смесью. [c.444]

Исследование полярности окружения радикальных фрагментов зондов АХЦ14), AVI, адсорбированных на белке, проведено сравнением изотропных (для зонда АХЦ14)) и анизотропных констант СТВ (для зонда AVI) этих радикалов с соответствующими константами для сред различной полярности. Полученные при этом данные, выраженные с помощью соотношений (1.14), (1.15) в виде значений параметра гидрофобности h, соответствуют h = = 0,05 для зонда AXI (14) и /i = 0,45. Отсюда в работе [44] сделан вывод, что в исследованных условиях зонд AVI не лежит полностью на поверхности сывороточного альбумина, а по крайней мере частично погружен в некоторую гидрофобную полость молекулы белка. Зонд же АХЦ14) локализован таким образом, что его полярная головка, которой является радикальный фрагмент зонда, контактирует с водным окружением белка. [c.192]

Существует значительный разрыв между числом статей, описывающих газохроматографические методы, и числом работ, посвященных приложению этих методов. Качественные анализы или же анализы, ограничивающиеся измерением лишь нескольких аминокислот пептидных или белковых гидролизатов . были выполнены уже давно [25, 69, 88, 147]. Наиболее полными являются данные Герке проведенное им газохроматографическое определение аминокислот в гидролизатах бычьего сывороточного альбумина, каппа казеина, белка бобов [41] и рибонукле-азы [43] прекрасно согласуется с результатами, полученными на ионообменниках. В табл. 5, 6 и 7 приведены некоторые экспериментальные данные, полученные ГХ н-пропиловых эфиров ацетиламинокислот из нескольких пептидных гидролизатов. Для гидролизатов фибриноиептидов те же молярные соотношения (табл. 6) найдены на ионообменниках [62]. С помощью ГХ контролировался синтез брадикинина (табл. 7). [c.130]

Обработка карбоновых кислот диазосоединениями является обычным методом получения сложных эфиров. При действии диазометана [148] в 85%-ном этаноле происходит частичное метилирование карбоксилов -лактоглобина, а диазоацетамид и метилдиазоацетат [149] этерифицируют карбоксилы сывороточного альбумина человека. Недавно для этих целей стали использовать диазоацетоглицинамид [150—152]. В этом случае при кислотном гидролизе образующегося сложного эфира получают свободный глицин, по избытку которого судят о степени модификации. В рибонуклеазе таким путем не удается модифицировать Asp 14, Asp 38 и Asp 83, вероятно вследствие образования водородных связей с остатками тирозина. [c.365]

Поскольку беспорядочного движения молекул белка в растворе недостаточно для эффективного усреднения анизотропного вза-идюдействия, полученные результаты свидетельствуют о том, что небольшая часть свободных радикалов фиксирована относительно жесткой третичной структуры сывороточного альбумина. Это явление получило название сильной иммобилизации спин-метки , в отличие от слабой иммобилизации , когда компоненты СТС спектра ЭПР лишь слегка уширяются. [c.167]

Сывороточный альбумин. Главный белковый компонент плазмы крови — сывороточный альбумин — имеет молекулярный вес около 65 ООО. Результаты титрования хорошо согласуются с данными об аминокислотном составе этого белка, полученными с помощью аналитических методов. Наблюдаются, однако, и некоторые аномалии. Так, значение со (с поправкой на связывание ионов), постоянное в интервале 4,2<рН<11, при pH 4,2 вдруг резко падает. Вероятно, это падение обусловлено разбуханием -молекул , -чт доатвержлается-ллшшмц- по вязкости и свето- [c.118]

Рис. 81. Сравнение значений второго вириального коэффициента сывороточного альбумина, полученных при помощи различных методов. Протонный заряд может быть приблизительно на десять зарядов более положительным, чем истинный суммарный заряд, потому, что белок связывает ионы хлора. Точки на графике получены методом рассеяния света. Кривая взята из данных по осмоти-ческо.му давлению, показанных на рис. 65 (из работы Эдсолла и сотрудников )

Этот расчет был произведен Скетчардом, Колеманом и Шеном , анализировавшими данные о равновесии между сывороточным альбумином и различными анионами, в том числе полученные ранее данные относительно иодида. Поскольку реакция носит ионный характер, можно предположить, что взаимодействие участков полностью сводится к электростатическим силам. Известно далее, что в экспериментальных условиях молекула сывороточного альбумина компактна, непроницаема и имеет форму, близкую к сферической, так что из уравнения (26-30) можно оценить Поэтому данные можно представить уравнением (29-31), причем гю выразится следующим образом [из уравнений (29-28) и (26-30)] [c.615]

Было найдено, что эти уравнения согласуются как с непосредственными данными о реакции с ионом металла, так и с кривой титрования инсулина в присутствии цинка , и для данной реакции было определено ( хар.)м> оказавшееся равным приблизительно 6,0. Следует отметить, что это значение почти вдвое превосходит значение, полученное для случая реакции с сывороточным альбумином. Такое расхождение полностью соответствует ожиданию. В то время как раньше й ар. по порядку величины приближалось к константе равновесия реакции А+М =2АМ, где М—металл, а А—малая молекула, сходная с реагирующим участком, теперь йдар Должно быть близко к константе равновесия реакции М+2А =г МА2. Для имидазола и Эдсолл и сотрудники получили gk=2,8 для реакции +Им 2п(Им) и lg г = 5,l для реакции 2п +2Им г 2 2п(Им)2 . [c.652]

Другой интригующей реакцией является взаимодействие сывороточного альбумина с двумя изомерами оптически активного красителя а-(М-п-аминобензоил)-аминофенилацетата. Данные, полученные Карушем для этой реакции, представлены на рис. 179. Можно видеть, что Ь-изомер этого красителя ведет себя как типичный анион (ср. рис. 159) искривление графика обусловлено совместным эффектом электростатического взаимодействия и наличия участков, различающихся по сродству. Вместе с тем для [c.657]

Различная степень набухания ионообменных смол в воде (и в водных растворах), зависящая от степени сшитости ионита, числа и свойств ионогенных функциональных групп, приводит к различию в проницаемости зерен сорбентов для ионов больших размеров. Повышение степени набухания ионитов вызывает повышенную способность для ионов больших размеров проникать в зерна и поглощаться сорбентами. Так, например, ионы органических веществ с молекулярным весом порядка 500—1000 могут быть сорбированы с огромными емкостями, превышающими вес сухого сорбента при коэффициентах набухания ионитов (отношении объема набухшей смолы к объему сухой смолы) порядка 3—4. Емкость сорбции тех же веществ на сильносшитых сорбентах, полученных при введении 10—20% дивинилбензола в смолу, составляет всего лишь миллиграммы на грамм сорбента. На этой основе созданы системы сорбентов с постепенно изменяющейся пористостью (проницаемостью). Так, сульфокатиониты типа СБС с коэффициентом набухания 1,2—1,4 сорбируют лишь аминокислоты и низкомолекулярные пептиды те же катиониты с коэффициентом набухания 1,7—2 сорбируют уже пептиды с молекулярным весом порядка тысячи наконец, катиониты СБС с коэффициентом набухания 4 поглощают сотни миллиграмм инсулина в расчете на грамм сорбента, не сорбируя сывороточные альбумин и глобулин [16]. Избирательная сорбция инсулина из белковых растворов проводится в колонке, заполненной набухающей сульфосмолой с зернами диаметром 0,2—0,5 мм. Медленная диффузия молекул белков в столь большие зерна сорбента не приводит к равновесию даже в течение многих часов. В связи с этим емкость сорбции зависит существенным образом от времени контакта раствора и сорбента. При значительных временах эксперимента сорбентом начинает поглощаться уже заметное количество белков большего молекулярного веса, что ухудшает избирательность сорбции инсулина. [c.197]

Влияние температуры и длительности термостатирования, количества NaBH4 и числа ступеней восстановления, необходимых для полного завершения реакции -SH с AgNOj, были исследованы на примере бычьего сывороточного альбумина, в молекуле которого содержатся 17 групп -S —S— и 1 группа -SH (мОЛ. масса 69000) [578, 579]. Этот метод успешно использовался для определения групп -SH и в других белках. Полученные результаты хорошо согласуются с литературными данными, исключение составляет лишь белок лизоцим. [c.194]

Гетеросетчатые аниониты [146], полученные в условиях осадительной сополимеризации с участием ГТА, по ряду основных характеристик аналогичны гетеросетчатым катионитам. Сорбция белков (сывороточного альбумина и инсулина) на этих сетчатых полиэлектролитах осуществляется с большой сорбционной ези-костью при малом или большом содержании кроссагента (рис. 2.4). Малое содержание ГТА соответствует гелевому типу ионитов, в то время как нри 15—24 % кроссагента проявляется резко выраженная гетерогенность сетчатой структуры. Особенно ценной является высокая поглотительная способность гетеросетчатых анионитов при большом содержании кроссагента, так как в этих условиях проявляется полная обратимость сорбции. [c.43]

Естественно было ожидать, что размеры зерен особенно заметно скажутся на способности ионитов сорбировать большие органические ионы, в частности макромолекулы белков [180, 208]. Действительно, как показано на рис. 3.31, сорбция сывороточного альбумина существенно возрастает при увеличении степени дисперсности анионитов. Предельная сорбционная емкость достигает примерно 6 г/г при радиусе зерен 2—5 мкм. Дальнейшее измельчение ионита приводит к некоторому падению сорбируе-мости белка. Полученные кривые отражают как увеличение до- [c.118]

Тем не менее небольшую избирательность адсорбции оптических антиподов изученного ранее азокрасителя 92 594 наблюдал Каруш при адсорбции изомеров этого соединения на сывороточном альбумине. Адсорбция (—)-антипода близка к адсорбции рацемата и сильно отличается от адсорбционной способности (- -)-изомера красителя. -Триптофан связывается с сывороточным альбумином в 100 раз прочнее, чем О-триптофан . Полученные данные подтверждают прежние наблюдения по адсорбции на белке антиподов красителя, образующегося из фенил-(/г-ами-нобензоиламино)-уксусной кислоты . [c.177]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология