Полиакриламидный гель для полимеризация

Раствор образца перед нанесением либо сгущают, например добавляя сахарозу, либо вводят в слой геля при его полимеризации (рис. 12.9). За слоем, содержащим образец, следует слой фокусирующего геля с равномерной низкой концентрацией полиакриламидного геля. В этом слое компоненты образца после их миграции из геля с образцом концентрируются в зону, в которой они с различной степенью разделения следуют друг за другом. На этом этапе сфокусированные компоненты образца переходят в следующий слой более концентрированного разделяющего геля. Электрофоретическая подвижность макромоле-кулярных соединений уменьшается до такой степени, что низкомолекулярный замыкающий ион догоняет концентрирован- [c.301]

Полиакриламидные гели для гель-хроматографии получают эмульсионной полимеризацией. Их производит и поставляет в виде сухих порошков под названием биогели фирма Bio- [c.351]

Джордан и Реймонд [411] предложили катализатор, содержащий аскорбиновую кислоту, 0,0025 % сульфата железа (II) и 0,03 % перекиси водорода. Для полимеризации полиакриламидных гелей в кислотных системах они рекомендуют 30 %-ный исходный раствор этого катализатора. [c.175]

Статистически достоверно установлено, что если подвергнуть магнитной обработке дистиллированную воду, а затем внести в нее мономер и провести полимеризацию, то пробег белков в полученном полиакриламидном геле уменьшается. Если же подвергнуть магнитной обработке раствор мономера в дистиллированной воде, то этот пробег в полученном полиакриламидном геле возрастает (табл. 5). [c.73]

Выше уже отмечалось, что живые иммобилизованные клетки осуществляют как одностадийные, так и многостадийные процессы, даже сложнейшие процессы биосинтеза антибиотиков, ферментов и коферментов. В отличие от свободных клеток они подвергаются специфическим воздействиям уже на стадии иммобилизации. Особое влияние оказывает процесс полимеризации акриловых мономеров. Рассмотрим более детально особенности поведения клеток в полиакриламидном геле (ПААГ). [c.231]

Для получения полиакриламидного геля используют акриламид и какой-либо агент, образующий поперечные сшивки, — обычно Ы,Ы -метиленбисакриламид (сокращенно б с-акриламид). Реакцию проводят в присутствии катализаторов и инициаторов. В ходе ее происходит винильная полимеризация (рис. 28), приводящая к формированию геля с хаотически свернутой структурой. [c.74]

Аппаратура и реактивы. Полиакриламидные гели готовят в виде стержней в стеклянных трубках или в виде пластин последний вариант более удобен при определении молекулярных масс. При электрофорезе в трубках различная электрофоретическая подвижность может быть обусловлена изменениями степени полимеризации геля, а также зависеть от длины слоя геля, условий проведения электрофореза. Техника извлечения геля из трубок разработана детально [35] показано, в частности, что извлечение гелей с концентрацией мономеров более 10% бывает затруднительным. Рекомендации по использованию аппаратуры и меры безопасности при работе с реактивами обсуждаются в разд. 1.2,1.1. [c.28]

Принципы изоэлектрического фокусирования были описаны в разд. 5.3. Распространенным методом с высокой разрешающей способностью является аналитическое изоэлектрическое фокусирование на пластинах полиакриламидного или агарозного геля. Компоненты смеси разделяются в соответствии с их изоэлектрическими точками, и полосы сужаются вследствие фокусирующего эффекта. Гель служит только стабилизирующей средой, которая не должна замедлять миграцию крупных белков. Поскольку необходимо, чтобы все молекулы в конце концов достигли положения, соответствующего их изоэлектрической точке, среда не должна оказывать сопротивления их движению из-за слишком большой вязкости, Из полиакриламидных гелей наиболее предпочтительны крупнопористые. Однако с ними трудно обращаться, а иногда вследствие неравномерной полимеризации получаются неоднородные гели. Если представляющие интерес белки имеют довольно небольшие размеры [c.323]

Полиакриламидные гели получают путем полимеризации.акрил-амида и метиленбисакриламида. Изменяя соотношение между этими двумя мономерами, удается получать гели с различной степенью пористости. По своим свойствам они очень близки к декстрановым и агарозным гелям — стабильны в водных буферах в интервале [c.95]

Цепными реакциями помимо реакций с галогенами и процессов термического распада являются многие реакции окисления органических и неорганических веществ кислородом, а также процессы полимеризации мономеров, содержащих двойные связи. Например, полимеризация амида акриловой кислоты СН 2 = СН — ONHg, которая в последние годы нашла широкое применение в биохимии для получения полиакриламидных гелей, позволяющих эффективно проводить разделение сложных смесей белков и нуклеиновых кислот. [c.317]

Поперечно-сшитые полимеры растворяться не могут, так как каждая частица (гранула) такого полимера является одной гигантской молекулой. Однако сродство полимера к соответствующим молекулам растворителя сохраняется, и при соприкосновении с растворителем его молекулы начинают проникать между цепями полимера в полости между точками сшивок. Этот процесс получил название набухания. Так, резина набухает в присутствии гидрофобных растворителей, например углеводородов. Гранулы поперечно-сшитого полиакриламида набухают в воде. Если проводить полимеризацию акриламида в водном растворе в присутствии мети-ленбисакриламида, то весь раствор превращается в сплошной массив полиакриламидного геля, В отличие от гелей желатины такой гель не может быть переведен в раствор нагреванием, так как гелеобразное состояние поддерживается в этом случае ковалентными связями мостиковых фрагментов с цепями полимера. [c.145]

Приготовление геля. Фракционирование РНК проводят в 2,2%-ном полиакриламидном геле (поскольку полиакриламидный гель данной концентрации имеет полужидкую консистенцию, рекомендуется сначала сделать пробку из геля более высокой концентрации или 1%-ной агарозы трубки можно закрыть снизу целлофановой пленкой). К смеси 2,2 г акриламида и 0,12 г метиленбисакриламида добавляют 33 мл трис-ацетатного буфера pH 7,8, 50 мл прокипяченной Н2О, 0,075 мл ТЕМЕД, 16 мл 0,5%-ного раствора персульфата аммония. Смесь осторожно перемешивают и заливают для полимеризации в кассету или трубочки электрофоретической камеры (с. 94). Сверху наслаивают трис-ацетатный буфер, разведенный в 3 раза (электродный буфер). [c.173]

Полимеризацию полиакриламидного гели чап1С всего производлт и стеклянных трубках под с ием воды, так как кислород воздуха замедляет этот процесс (рис. 6). [c.39]

Электрофорез в полиакриламидном геле. Полиакриламидный гель (ПАГ) представляет собой синтетический продукт сополимеризации акриламида и сшивающего агента, чаще всего Ы, Ы -метиленбисакриламида. Благодаря образованию поперечных связей между растущими соседними полиакриламидными цепями, возникающими в результате полимеризации Бинильных групп, такой гель имеет структуру трехмерной сетки. В отличие от природного полимера крахмала синтетический гель прозрачен, химически стабилен, инертен, устойчив к изменениям pH и температуры, нерастворим в большинстве растворителей и, наконец, в нем практически отсутствуют адсорбция и электроосмос. [c.147]

Ускорение полимеризации акрилонитрила после воздействия низкочастотного (10 Гц) электромагнитного поля на водный раствор мономера установлено Пиккарди, который использовал этот феномен в качестве одного из индикаторов действия внешних наводок [72]. В нашей лаборатории были проведены развернутые исследования влияния магнитной обработки дистиллированной воды (удельная электропроводность порядка 100 мкОм -м ) и водного раствора мономера на полимеризацию и свойства полиакриламидного геля [73, 74]. [c.64]

Статистически достоверно установлено, что если подвергнуть магнитной обработке дистиллированную воду, а затем внести в нее мономер и провести полимеризацию, то пробег белков в полученном поликриламидном геле уменьшится. Если же подвергнуть магнитной обработке раствор мономера в дистиллированной воде, то этот пробег в полученном полиакриламидном геле возрастает (табл. 5). Известно, что подвижность белков зависит от структуры геля, на которую, очевидно, и влияет магнитная обработка. Это подтверждено не [c.64]

Первые партии полиакриламидного геля уступали по своим свойствам гелям на основе декстрана. Однако после введения разработанного автором этой главы нового метода полимеризации в суспензии био-гели Р характеризуются удовлетворительными физическими и химическими свойствами. В большинстве случаев при фракционировании на био-геле Р и соответствующем типе сефадекса получаются сходные результаты. [c.251]

Применение. В гистохимии ферментов при электрофоретическом paKiiHOj-яировании кислых фосфатаз в полиакриламидном геле [1, 2], В электронной микроскопии в качестве катализатора полимеризации метакрилатов, применяемых для заливки срезов, [c.37]

Подобные же результаты дает синтетический полиакриламидный гель, предложенный в 1959 г. Реймондом и Вейнтраубом [45]. Гель образуется полимеризацией акриламида в водном буферном растворе pH раствора может быть выбран в достаточно широком диапазоне, начиная от pH 2 [46, 47]. В качестве сшивающего агента добавляется небольшое количество NN -метиленбисакрил-амида. Инициатором обычно служит реакция падсерпокислого [c.97]

Несмотря на то что полиакриламид стал применяться в качестве носителя для электрофореза лишь после 1960 г., этот материал в настоящее время наиболее широко используется при разделении смесей макромолекул кислого или основного характера. Сейчас полиакриламидный гель как носитель практически вытеснил бумагу и крахмальный гель, поскольку в случае белков и нуклеиновых кислот он дает очень хорошее разрешение. Гель получают полимеризацией акриламида в присутствии метиленбисакриламида или других соединений, служащих сшивающими агентами. В работе Сарджента [3] подробно описаны способ получения гелей, процедура нанесения пробы и условия разделения. [c.138]

Реймонд и Вейнтрауб [342] первыми применили полиакриламидный гель в качестве среды для тонкослойного электрофореза. Этот гель получают в результате полимеризации смеси акриламида с Ы,Ы-метилен-б с-акриламидом в буферных рас- [c.168]

Не меньшей популярностью пользуется в настоящее время и метод электрофореза в полиакриламидном геле. Добавляя к раствору акриламида, налитому в стеклянные трубки, различные количества мономеров (например, метиленбисакриламид, этилендиакрилат), образующих в процессе полимеризации поперечные сшивки, можно получить гели с различной степенью связанности [137, 404]. Устойчивость к денатурирующим растворителям, например к 8 М раствору мочевины или 1 %-ному раствору додецилсульфата натрия, составляет еще одно важное преимущество этих гелей. При наложении разности потенциалов белки, пептиды, нуклеиновые кислоты и вирусы передвигаются в этих гелях на характерные расстояния, которые зависят главным образом от их молекулярного веса (или веса частицы), а также от степени связанности сшивок геля. Разделившиеся вещества образуют характерные полосы, которые можно выявить либо с помощью методов окрашивания или локального осаждения, либо (в случае разделения радиоактивных веществ) с помощью метода радиоавтографии (см. гл. XI, разд. Б). Разрешающая способность электрофореза в полиакриламидном геле такова, что с помощью этого метода можно обнаружить и идентифицировать приблизительно 37 видов рибосомных белков [508]. То, что разделение белка на многочисленные полосы происходит в силу действительного различия между белками, а не в результате каких-то артефактов, теперь уже не вызывает солшений. Однако известно, что разделяться на отдельные полосы могут не обязательно совершенно различные вещества, но и такие близкие между собой вещества, как, например, один и тот же белок, у которого часть молекул содержит одну лишнюю амидную (— СО — NH2 С00 ) группу, а другая часть — ацетильную (—NH+— NH — СОСН3) группу [136]. С помощью электрофореза в полиакриламидном геле [c.61]

В середине 60-х годов был разработан модифицированный метод электрофореза - электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПААГ). Этот метод был существенным щагом вперед по сравнению с обычными методами анализа белков, известными к тому времени. При использовании данного метода белки мигрируют в инертном матриксе - полиакриламидном геле с высоким содержанием поперечных сщивок. Обычно гель готовят полимеризацией мономеров непосредственно перед использованием. Размеры пор геля могут быть подобраны произвольно с тем, чтобы гель мог замедлить миграцию определенных молекул. При этом белки находятся в растворе, содержащем мощный, отрицательно заряженный детергент - додецнл-сульфат натрия или ДСН (8В8) (рис. 4-48). [c.215]

Метод включения клеток в полиакриламидный гель (ПААГ) используется уже более 20 лет. В первых работах он рекомендовался как универсальный для многих микроорганизмов. Имеющиеся сейчас экспериментальные данные свидетельствуют о наличии отрицательного воздействия акриловых мономеров и в еще большей степени самого процесса полимеризации на жизнеспо-собнось и ферментативную активность многих микроорганизмов. Поэтому в ряде случаев ПААГ заменяют Са-альгинатным гелем, каррагинаном и другими носителями. С другой стороны, следует отметить и преимущества геля простота приготовления, относительная дешевизна, возможность включения клеток любого размера и заданное их количество, прочность фиксации клеток, прочность гранул на стирание и разрыв (свойство, необходимое для реакторов с перемешиванием). Уменьшить набухание геля можно путем его армирования каким-либо неорганическим носителем. [c.224]

Разработка методов иммобилизации клеток этой бактерии в полиакриламидный гель (ПААГ), в мембраны из поливинилового спирта и адсорбция ее на целлюлозе позволила повысить эффективность метода трансформации стероидов. Для иммобилизации в ПААГ культуру выращивали описанным выше способом, отделяли центрифугированием, отмывали фосфатным буфером. Система для полимеризации состояла из 10 %-ного полиакриламидного геля с 0,5 %-ным относительным содержанием сшивающего агента метиленбисакриламида и катализаторов тетраметил-этилендиамина (ТЕМЕД) и персульфата аммония. Акриламид перекристаллизовывали перед употреблением из хлороформа. В сосуд для полимеризации помещали 6 мл клеточной суспензии, содержащей 0,1—0,6 г биомассы, смесь 1,90 г акриламида с 0,10 г метиленбисакриламида в 11 мл воды, 3 капли ТЕМЕД а и 15 мг персульфата в 3 мл воды. Общий объем 20 мл. Полимеризацию мономера проводили при температуре 10—12 °С в атмосфере азота в течение 2—15 мин. Полученный блок геля механически фрагментировали, продавливая через сито 20—30 меш, промывали физиологическим раствором до исчезновения невключившихся клеток (4—5 л). Полученные гранулы помещали в термостатируемую колонку (1X28 см). Реакционная смесь, пропускаемая через колонку, содержала 0,1 г/л гидрокортизона в фосфатном буфере (pH 7,0), скорость потока через колонку 1,3 мл/ч на 1 мл геля (ЗУ), акцептор водорода — феназинметасульфатдобавляли в концентрации 0,1 г/л с момента трансформации, температура 20—22 °С. Выделение стероидов и определение активности проводили по методике, описанной выше. При таких условиях [c.545]

Приготовление пробы. По мнению Дэвиса [281], включение исследуемой пробы в стартовый гель препятствует тепловой конвекции диффузии веществ, что приводит к более эффективному разделению. Однако некоторые белки повреждаются в результате полимеризации геля [1407] или под действием флуоресценции [975]. Кроме того, белки могут подавлять полимеризацию геля [570]. Если есть подозрение, что флуоресценция или персульфат (см. ниже) приводят к возникновению артефактов, вместо стартового геля желательно использовать суспензию сефадекса 0-200, гл1ицв рин, сахарозу или мочевину. В то же время эти материалы сам и способны при определенных условиях стать причиной артефактов. Так, сефадекс 0-200 может задерж1И1вать движение белков [173], а сахароза — взаимодействовать с 8-аминогруппой лизина [455] или боратом с образованием отрицательно заряженного комплекса. Поэтому присутствие сахарозы в боратном буфере может привести к эффекту усеченного конуса и боковому распространению белков в процессе электрофореза [759]. С другой стороны, мочевина вызывает диссоциацию белков на субъединицы, препятствует затвердению агарозы в агарозно-полиакриламидных гелях [574] и влияет на активность водородных ионов. [c.97]

Выход материала, полученного после электрофореза, определяется многими причинами. Потеря белков может произойти вследствие их сорбции на геле, стенках прибора или элементах элюционной камеры [658]. Сорбция белков полиакриламидным гелем зависит от количества нанесенного материала, а также от pH и концентрации геля. Ее нельзя предотвратить добавлением формамида, тиогликолата, сахарозы или полиаспараги-новой кислоты. Однако если заранее ввести в гель (желательно при полимеризации) посторонние белки, то белоксвязываю-щая способность акриламида оказывается насыщенной, и тогда удается частично или полностью избежать адсорбции исследуемых белков. Для этой цели особенно пригодны белки с высокой подвижностью (глюкагон, бацитрацин, В-цепь инсулина). [c.116]

Приготовление полиакриламидного геля описано в разделе, посвященном аналитическому электрофорезу. Важмо отметить, что дегазирование раствора акриламида до добавления к нему персульфата необходимо выполнять особенно тщательно, так как наличие пузырьков в геле нарушает условия проведения электрофореза. Полимеризация геля долж на происходить при той же температуре, при которой будет проводиться разделение. Для получения узких зон нужно, чтобы поверхность геля была совершенно гладкой, поэтому воду на раствор акриламида наслаивают как можно аккуратнее. Есл же для внесения пробы используют канавку, то ее формируют при помощи специального шаблона [320]. Готовый гель выдерживают до употребления не менее 1 ч или, что еще лучше, оставляют на ночь. Для удаления несущих заряд примесей и непрореагировавших Б процессе полимеризации реактивов рекомендуется проводить в течение 1 ч преэлектрофорез. [c.117]

Полиакриламидный гель, как правило, готовят обычным способом лутем полимеризации, инициируемой персульфатом, или фотсмюлимернзации с участием рибофлавина. Правда, фотополимеризация применима лишь тогда, когда амфолиты-но-снтел и охватывают или весь диапазон pH, или его кислую область с рН не выше 5—8 [1456]. На полимеризацию с персульфатом амфолиты не оказывают влияния, поэтому их можно добавлять к исходной смеси мономеров и катализатора. Другой способ получения гелей для ИЭФ заключается в том, что сначала гель формируют без амфолитов, затем отмывают дистиллированной водой от непрореагировавших мономеров и остатков катализатора и, наконец, уравновешивают с амфоли-тами-носителями, вымачивая его в соответствующем растворе. [c.148]

Изоэлектрическое фокусирование в пластинах полиакриламидного геля. Предложена методика проведения ИЭФ в тонком слое 5%-ного полиакриламидного геля, содержащего 2% амфолина [71]. Гель получают путем фотополимеризации в кювете, образованной двумя стеклянными пластинками, которые удерживаются на расстоянии 1 мм друг от друга с помощью прокладок из силиконовой трубки. Поверх ность одной из пластинок оиликонизируют. Всю конструкцию скрепляют большими пружинными зажимами для бумаги. По око1нчании полимеризации силиконизнрованную пластинку отделяют от геля, который остается прикрепленным ко второй пластинке. Для внесения пробы кусочек фильтровальной бумаги пропитывают определенным объемом исследуемого раствора и вставляют в щель, прорезанную в слое геля. Затем пластинку с гелем переносят в пластмассовую коробку и укладывают на два горизонтально расположенных угольных стержня, служащих электродами. Катод и анод смачивают 5%-ными растворами соответственно этилендиамина и фосфорной кислоты. На время опыта в коробку помещают насыщенную водой синтетическую губку для создания в камере влажной атмосферы. ИЭФ проводят в [c.149]

Сузуки и др. [1253] предложили использовать электрофорез для выделения белков из любого типа геля после любого способа их фракционирования. Вырезанный участок геля с белковой зоной помещают в стеклянную трубку поверх слоя предварительно заполимеризованного геля, который не доходит на несколько миллиметров до нижнего конца трубки. Этот гель можно приготовить следующим образом. Сначала, как обычно, закрывают дно трубки н в нее до желаемой высоты наливают концентрированный раствор сахарозы или глицерина, на который затем аккуратно наслаивают забуференную смесь компонентов полиакриламидного геля. После полимеризации сахарозу или глицерин удаляют, дно трубми затягивают диализной мембраной, а образовавшееся между ней и гелем пространство заполняют буферным раствором. Такую трубку с находящимися в ее верхней части кусочками геля, содержащего сфокусированную при ИЭФ белковую полосу, устанавливают в аппарат для диск-электрофореза и проводят электрофорез в соответствующем буфере. Под действием электрического поля [c.151]

Для разделения белков в первом направлении можно использовать не только электрофорез, но и другие методы. Так, например, Пиндер и Гратцер [1008] описали простой и прямой способ последовательного сочетания центрифугирования в градиенте плотности сахарозы и электрофореза в геле. Белки сыворотки человека центрифугировали в градиенте 0—40%-ного раствора сахарозы, содержащего 5% акриламида (2,5% составлял бас-акриламид), ТЕМЭД, (1 мг/мл) и рибофлавин (50 мкг/ /мл). После центрифугирования пробирки облучали люминесцентной лампой для полимеризации акриламида. Чтобы видеть, результаты центрифугирования, один из параллельных гелей окрашивали амидовым черным. Затем из центральной части неокрашенного геля вырезали полоску шириной 2 мм и использовали ее как стартовую зону для электрофореза на пластине 57о-но-го полиакриламидного геля при pH 8,5. [c.234]

Во многих методиках вспомогательные ферменты просто добавляют к инкубационной среде. Можно также использовать индикаторный гель , содержащий вспомогательный фермент (или ферменты). Еще один способ применения вспомогательного фермента описал Харрисон [518]. Для обнаружения после электрофореза в полиакриламидном геле гексокиназы, глюкозо- фосфатизомеразы и фосфоглюкомутазы к гелеобразующему раствору перед полимеризацией акриламида добавляют глюкозо-б-фосфат— дегидрогеназу. В результате вспомогательный фермент оказывается равномерно распределенным в геле и иммобилизованным благодаря возникновению ковалентных связей с матриксом. При этом он сохраняет способность катализировать превращение глюкозо-6-фосфата, образующегося под действием указанных выше ферментов. Таким образом, при инкубации геля в среде, содержащей NADP, ФМС и соль тетразолия, в местах локализации разделенных ферментов появляется формазан. [c.286]

Модификация методов последнего типа была использована для определения константы диссоциации глюканфосфорилазы [1271]. После электрофореза полиакриламидные гели инкубируют в 2 М На-ацетатном буфере (pH 5,9), содержащем 0,5 мг/мл АМФ и 2,5 мг/мл глюкозо-1-фосфата гликоген добавляют либо перед полимеризацией геля, либо к инкубационной среде. После инкубации при 37 С в течение 5—10 мин (в завиг симости от количества присутствующего фермента) гели погружают в раствор Щ—Ь в 7%-ной уксусной кислоте. Появление фиолетовых полос указывает местонахождение фермента. Через [c.292]

Молекулы гаптоглобинов состоят из нескольких полипептидных цепей [243, 244, 1205, 1206]. Связи между отдельными по-липептидными цепями можно разорвать путем их восстановления в 8 М мочевине. Образующиеся одиночные цепи разделяют затем с помощью электрофореза в крахмальном или полиакриламидном геле в присутствии мочевины. В гаптоглобинах имеются два типа полипептидных цепей а- и р-цепи. р-Цепи во всех гаптоглобинах одинаковы, а а-цепи различаются. а-Цепь, входящая в состав гаптоглобинов с фенотипом Нр 1 — 1 (а -цепь), имеет мол. массу 8900, тогда как а-цепь, входящая в состав гаптоглобинов с фенотипом Нр 2—2 (а -цепь), имеет примерно вдвое большую молекулярную массу. В гаптоглобинах Нр 2—I содержатся как а -, так и а -цепи. Способность гаптоглобинов к полимеризации обусловлена наличием а -цепей, и именно поэтому гаптоглобины Нр 2—1 и Нр 2—2 образуют при электрофорезе целый ряд зон, соответствующих гомологичным полимерам, а монодисперсный гаптоглобин Нр 1 — 1, мигрирует в виниле одной-единственной зоны. [c.343]

Недавно был описан принципиально новый метод избирательного разделения полинуклеотидов аффинный электрофорез в геле [1011]. Полиакриламидные гели, содержащие поли-(1-винилурацил) или поли-(9-виниладенин) были получены путем полимеризации акриламида в присутствии указанных веществ. При электрофоретическом разделении нуклеиновых кислот в таких гелях важную роль играют спаривание оснований и более слабые стэкинг-взаимодействия. [c.379]

Полиакриламидные гели. Свойства геля зависят от общей концентрации мономеров (акриламид+ N,N -би aкpилaмид) и доли сшивающего агента (N,N -мeтилeнби aкpиламида) [34]. Гели готовят путем радикальной полимеризации мономеров, в водном растворе в присутствии катализатора — персульфат аммония + ТЕМЕД. [c.29]

Полиакриламидный гель образуется при полимеризации акриламида (СНг = СН— ONH2) в присутствии небольших количеств бифункционального сшивающего реагента, обычно N,N-Me-тилен бисакриламида (Бис, СНг = СН-СОЫН—СНг—HN O— —СН = СНг). Поры создающейся при этом трехмерной сетчатой структуры способны задерживать макромолекулы. Решающую роль играет весовое соотношение акриламида и сшивающего агента, поскольку оно определяет плотность и хрупкость образующегося геля. Для получения эластичного геля необходимо повысить концентрацию акриламида и одновременно снизить концентрацию сшивающего реагента. [c.95]

Для иммобилизации ферментов используют захват их полиакриламидным гелем и иными полимерами при полимеризации составляющих их мономеров, а также захват гелями, возникающими при желатинизации природных полимеров, например полисахаридов морских водорослей присоединение ферментов к целлюлозе, сефарозе, сефадексу, крахмалу, декстрану, агарозе и другим полисахаридам, активированным цианбромидом и другими агентами привязку ферментов к стеклянным бусинкам через диазосоединение ковалентное связывание фермента с азидными и гидразидными группами сополимера акриламида и акрилгидразина (энзакрила) и других носителей соединение фермента с гидратированными оксидами металлов, производными поливинилового спирта, альдегидными и диазогруппами модифицированных фенольных полимеров, силикагелями и многими другими материалами. [c.141]

Полимеризация полиакриламидного геля есть каталитический процесс, протекающий с помощью тетраметилендиамина и персульфата аммония. Хорошо известно, что последний при длительном хранении своих водных растворов частично теряет реакционные свойства и в связи с этим рекомендуется использование свежеприготовленных растворов. Для исключения многократного взвешивания персульфат аммония поставляется некоторыми фирмами в виде желатиновых капсул с заранее отвешенными количествами. Удобство использования таких фасовок может оборачиваться при секвенировании ДНК нежелательным эффектом размазывания полос ДНК в верхней части геля [Kamps-Holtzapple, Stanker, 1995]. Этими авторами был проведен модельный эксперимент, в котором выяснилось, что именно желатин оказывает такой отрицательный эффект, и они советуют в связи с этим просто вскрывать капсулы и высыпать их содержимое, исключив, таким образом, растворение желатины. Довольно сильным ингибитором полимеризации является растворенный в воде кислород, и для его максимального удаления рекомендуется дегазация уже готового раствора мономеров перед добавлением инициатора и катализатора этого процесса. [c.173]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология