Количественное определение моносахаридов

Наиболее обычным объектом для анализа в химии углеводов служат смеси свободных моносахаридов, получаемые как непосредственно из природных источников, так и при гидролизе гликозидов, олиго- и полисахаридов. Другим важным классом соединений, разделение, количественное определение и идентификация которых составляют основу установления строения олиго- и полимерных углеводных цепей методом метилирования, являются полностью или частично метилированные моносахариды. Кроме того, в синтетической химии углеводов приходится встречаться с разделением смесей и идентификацией самых разнообразных производных моносахаридов. Ниже коротко рассматриваются некоторые наиболее употребительные методы анализа углеводов. [c.409]

Этот метод количественного определения моносахаридов в гидролизатах в последнее время после появления хроматографии потерял свое значение и в настоящее время не применяется. [c.70]

Способность углеводов легко превращаться в фурфурол и другие производные фурана, образующие окрашенные продукты с различ-.ными органическими соединениями, используется в аналитических целях для качественного и количественного определения моносахаридов, колор [метрическими методами [106]. [c.86]

Благодаря этому моносахариды проявляют свойства альдегидов (кетонов) с некоторыми ограничениями, а свойства спиртов с некоторыми особенностями. Все особенности свойств моносахаридов были подробно разобраны в курсе органической химии, поэтому напомним лишь о двух свойствах восстанавливающих и оптических, так как они используются для качественного и количественного определения моносахаридов. [c.7]

Кислотный гидролиз. Для идентификации и количественного определения моносахаридов, входящих в состав олиго- и полисахаридов и углевод-белковых полимеров, применяется кислотный гидролиз, в процессе которого расщепляются гликозидные связи. [c.77]

Все природные моносахариды обладают оптической активностью. Их вращательная способность представляет собой не только важную константу, характеризующую эти соединения, но может быть также использована для количественного определения известных сахаров в растворе. [c.415]

В косвенных методах анализа содержание компонентов можно рассчитывать по разности либо использовать характерные реакции с количественным определением получаемых производных. Так, при анализе полисахаридов обычно используют реакцию гидролиза полисахаридов до соответствующих моносахаридов с их анализом. [c.187]

Сполна метилированные моносахариды, не содержащие в циклической форме ни одного спиртового гидроксила, могут образоваться только из концевых моносахаридных звеньев, а их структура позволяет сделать заключение о размере окисных циклов соответствующих остатков. Количественное определение этих соединений в гидролизате дает возможность, в частности, определить молекулярный вес неразветвленных олигосахаридов. [c.433]

Методы количественного определения гексозаминов . Ввиду исключительно важной роли, которую играют 2-амино-2-дезоксигексозы в построении биополимеров и в биохимических процессах, необходимы надежные методы количественного определения этих моносахаридов. Однако ни один из известных методов количественного определения гексозаминов не является специфическим получаемые результаты зависят от наличия в смеси обычных моносахаридов и аминокислот, которые наряду с аминосахарами всегда образуются при гидролизе мукополисахаридов и гликопептидов. Поэтому все современные методы анализа аминосахаров включают стадию отделения их от аминокислот, других моносахаридов и неорганических солей с помощью ионообменной хроматографии [c.280]

Многие из упомянутых выше качественных реакций моносахаридов были положены в основу методов их количественного определения (см. стр. 414). [c.410]

В основу количественного определения сахаров положены те же реакции, что и для их качественного обнаружения . Классические методы анализа использовали, главным образом, восстанавливающие свойства моносахаридов и сводились к весовому или объемному определению продуктов реакции, тогда как новейшие методы являются в большинстве случаев колориметрическими. Для определения содержания данного моносахарида в смеси с другими сахарами используют, как правило, предварительное хроматографическое разделение ряд методов количественного анализа может быть с известной осторожностью применен для определения суммы сахаров в исследуемой смеси. [c.414]

Наряду с образованием пиразинов при подщелачивании водных растворов 2-амино-2-дезоксисахаров происходит деструкция с образованием оксиметилфурфурола и моносахаридов с меньшим числом углеродных атомов Ы-Ацильные производные аминосахаров в отличие от аминосахаров со свободной аминогруппой при нагревании со щелочью не дезаминируются, а превращаются в производные аминофурана. Эта реакция лежит в основе количественного определения аминосахаров по методу Моргана — Эльсона (см. стр. 280), так как образующийся хромоген при взаимодействии с /г-диметиламинобензальдегидом дает интенсивное красное окрашинание. Природа хромогена, образующегося из Ы-аиилгексозаминов при нагревании со щелочью, выяснена сравнительно недавно Было показано, что в условиях реакции Моргана — Эльсона К -ацетилглюкозамин дает три хромогена при нагревании два из них пе реходят в третий. Этот хромоген является 3-ацетамидо-5-(Г,2 -диокси- [c.274]

Метод метилирования, имеющий со времени Хеуорса исключительно большое значение в установлении строения полисахаридов, заключается в получении полностью метилированного производного полисахарида, последующем полном его гидролизе и разделении, идентификации и количественном определении образующихся полностью или частично-метилированных моносахаридов. Основы метода рассмотрены при установлении строения олигосахаридов (см. стр. 433), однако его применение при исследовании полисахаридов имеет ряд особенностей. Поскольку метод включает стадию расщепления полисахарида на мономеры, он характеризует только состояние моносахаридов в полимерной молекуле-(число и положение заместителей и размер цикла у каждого моносахарида), но не дает сведений о последовательности мономеров в полимерной, цепи. [c.494]

Количественное определение моносахаридов методом газо-жидкостной хроматографии. (НФ карбовакс 20М на хромосорбе W т-ра 170°.) [c.138]

Сходный метод — количественное определение одного из моносахаридов в осадке, который дает полисахарид с избытком антитела, — применяется для контроля чистоты антигенов, особенно часто в случае групповых веществ крови . Потеря иммунологической активности в процессе очистки свидетельствует о несомненной деструкции полисахарида. [c.518]

Количественное определение массы индивидуальных моносахаридов производят с использованием внутреннего стандарта (сорбита). Масса сорбита, добавляемая в анализируемую смесь, должна обеспечить его концентрацию в растворе, примерно соответствующую концентрации индивидуальных моносахаридов. Расчет ведут по градуировочному графику. График получают, по данным хроматографирования эталонных растворов, содержащих индивидуальный моносахарид и сорбит. Градуировочный график строят в координатах по оси абсцисс — масса чистого моносахарида в эталонном растворе, по оси ординат — отношение площади характеристического пика этого же моносахарида к площади пика внутреннего стандарта. График имеет линейную форму. Прямую линию проводят с использованием метода наименьших квадратов. [c.140]

Восстановление фелинговой жидкости моносахаридами применяется для их количественного определения объемным методом (по количеству израсходованной фелинговой жидкости) или весовым методом (по количеству осевшей закиси меди). [c.644]

Устаносление строения углеводного остатка тритерпеновых и стероидных сапонинов осуществляется с помощью методов структурной химии олиго- и полисахаридов. Сюда входит 1) определение качественного и количественного состава моносахаридов 2) установление последовательности моносахаридных остатков в углеводной цепи 3) определение положения гликозидных связей в моносахаридных остатках 4) определение размеров оксидных циклов моносахаридов 5) установление конфигурации гликозидных центров, [c.47]

При помощи реакции восстановления металлов обычно производят количественное определение углеводов. В случае моносахаридов определение ведут непосредственно, а полисахариды предварительно подвергают гидролизу, при котором происходит распад на моносахариды и освобождение всех связанных карбонильных групп. [c.130]

Для установления количественного состава входящих в гликопротеин моносахаридов и аминокислот биополимер подвергают полному кислотному гидролизу, и состав гидролизата определяют обычными методами количественного анализа. Пептидные связи устойчивее гликозидных по отношению к кислотам, поэтому для полного расщепления на мономеры гликопротеины приходится гидролизовать в более жестких условиях, чем обычные полисахариды (6 н. НС1, 100—ПО °С, 24 ч) . Нужно иметь в виду, что как сахара, так и аминокислоты могут частично распадаться в условиях кислотного гидролиза, причем в ряде случаев можно с помощью ХОЛОСТЫХ опытов внести соответствующие поправки при анализе. Специфической для гликопептидов побочной реакцией в условиях кислотного гидролиза является возможная конденсация сахаров с аминокислотами, приводящая к окрашенной сложной смеси различных веществ, в том числе простейших карбонильных соединений (так называемая реакция Майяоа). Например, по данным Готшалка , потеря аминокислот при кислотном гидролизе богатых сахарами гликопротеинов может составлять до 30 %. Количественное определение моносахаридов проводят с использованием хроматографии, спектрофотометрической и колориметрической техники (см. гл. 14). Для анализа аминокислот применяют обычно методы, хорошо известные из химии белка. Так, количественный анализ аминокислотного состава проводят в автоматических анализаторах или с помощью газо-жидкостной хроматографии . [c.567]

Реакция простых сахаров с А оО, Си(ОН)., и фелинговым раствором широко применяется для открытия моносахаридов, установления их подлинности, количественного определения и т. д. [c.228]

В ряде работ применялась следующая схема [31, 32] количественного определения моносахаридов в гидролизатах полисахаридов растительных тканей. Исследуемый гидролизат после нейтрализации углекислым барием вначале делили на две части. Одну часть его концентрировали под вакуумом до 0,25 первоначального объема, затем кипятили с щестью объемами 96%-ного этанола в течение 15 мин для осаждения минеральных солей и коллоидов. Образовавшийся при этом осадок удаляли фильтрованием. В фильтрате определяли содержание редуцирующих веществ по Бертрану. Фильтрат концентрировали под [c.69]

Для количественного определения моносахаридов колориметрическим методом [60] каждую порцию элюата содержащую 10—70 мкг моносахарида), предварительно профильтрованную через стеклянную вату, смешивают с 1 мл 57о-ного водного раствора фенола и быстро добавляют на поверхность смеси концентрированную серную кислоту (5 мл, 95,5%, уд. вес 1,84) из пипетки с широким отверстием. Через 10 мин. пробирки встряхивают и помещают в водяную бан19 при температуре 25—30° С на 15 мин. Интенсивность оранжево-желтой окраски определяют на спектрофотометре. Степень поглощения света гексо-зами измеряют при 490 ммк, пентозами и гексуроновыми кислотами — при 480 ммк. Количество моносахарида находят по стандартной кривой степени поглощения света аналогично приготовленными растворами чистых углеводов. Точность метода 5%. [c.77]

Среди методов, основанных на окислении моносахаридов, наиболее изученным и широко применяемым,является действие солей двухвалентной меди в щелочной среде . Эта реакция, приводящая к образованию закиси меди, не является стехиометрической. Разные моносахариды обладают различным восстановительным действием однако можно подобрать условия, в которых в определенном интервале концентраций выделение закиси Меди пропорционально количеству данного моносахарида. Не менее широко применяется в количественном анализе сахаров во многом сходный с предыдущим метод окисления феррицианидом калия в щелочной среде " . Из других окислителей необходимо упомянуть гипоиодит Натрия, используемый для определения альдоз в присутствии кетоз, ко-Тэрые этим реагентом не окисляются. Поскольку гипоиодит натрия реагирует со многими органическими соединениями, этот метод дает хорошие результаты только с достаточно чистыми растворами сахаров, полученными например, после элюирования зон с бумажных хроматограмм . Стехиометрическое протекание этой реакции позволяет использовать ее й то же время и для определения степени полимеризации олигосахаридов . Несколько методов количественного определения моносахаридов основаны на реакциях периодатного окисления . Для той же цели применяется ряд органических окислителей наилучшие результаты получены с 3,5-динитросалициловой кислотой и солями тетразолия . [c.414]

Для количественного определения моносахаридов применяли методы восстановления. После обработки образца сахара (0,3—0,4 ммоль) при pH 9—10 титрованным раствором борогидрида натрия избыток реагента определяют по количеству водорода, выделяющегося при pH 1 [204]. Другой метод включает отделение и количественное определение ДНФ-гексозаминитов, которые могут быть получены из аминосахаров (см. гл. 8). [c.189]

Проблемы, возникающие при количественном определении моносахаридов в присутствии большого количества аминокислот, обсуждаются в гл. 8 (том 1). В табл. приведены результаты определения содержания углеводных компонентов в препаратах а -кислого гликопротеипа, полученных из одного и того же источника разными методами. Обнаруженные расхождения, возможно, отчасти обусловлены истинными различиями между препаратами, однако, более вероятно, что они объясняются отличиями в использованных методах исследования. При изучении химической структуры -кислого гликопротеипа особый интерес представляет определение количественного соотношения маннозы и галактозы. Это соотношение варьирует от 1 1 до 1 2. Неопубликованные результаты опытов, проведенных в лаборатории автора доктором А. М. Клоссом, показали, что эти расхождения зависят только от применяемых методов. Сравнивались два метода разделение на смоле дауэкс-1 [311 и хроматография на бумаге с последующим окрашиванием фосфатом анилина и элюированием пятен. Оба метода дали правильные результаты при проверке их на стандартной смеси, но при изучении одного и того же гидролизата -кислого гликоиротеина было получено отношение маннозы к галактозе, равное 1 1 и 1 2. [c.80]

Для разделения и определения моносахаридов по этому методу анионообменную смолу (Т.5.В) в сульфатной форме фракционируют для получения частичек размером 10—15 мк (размер частичек имеет большое значение для количественного разделения моносахаридов). Применяют колонки размером 2x 650жл [c.76]

Для количественного определения углеводов, разделенных хроматографией на бумаге, используют различные методы. Количество моносахарида можно определить непосредственно на хроматограммах измерением денситометром [53] интенсивности окраски пятен, полученных при проявлении, например, анилинфталатом [54] или азотнокислым серебром [55]. Ошибка прямого измерения интенсивности окраски пятен достигает Ю—15%, поскольку окраска часто бывает нестабильной и в сильной степени зависит от условий обработки хроматограмм перед измерением. Однако из-за быстроты определения этот метод находит применение. [c.76]

Более достоверные данные количественного определения углеводов получают элюированием из хроматограмм окрашенных пятен растворителями с последующим колориметрированием окрашенного раствора. Окрашенные пятна моносахаридов на хроматограмме получают обработкой ее анилинфталатом или антроновым реагентом [56]. Ошибка колориметрических определений в отдельных случаях достигает 10%. [c.76]

Синтез 0-триметилсилиловых эфиров проводят следующим образом [90]. Раствор, доведенный до pH 4 при помощи ионообменной смолы типа амберлит IR-45, концентрируют до небольшого объема. В круглодонную колбу емкостью 50 мл вносят 0,5 мл гидролизата, содержащего 10—15 мг углеводов, и 0,5 мл 0,2%-ного раствора эритрита, смесь перемешивают, выпаривают досуха н выдерживают на водяной бане 30 мин при 50° С под вакуумом. Остаток в колбе растворяют в сухом пиридине. К раствору добавляют 0,4 мл гексаметилдиси-лазана, 0,2 мл триметилхлорсилана и энергично встряхивают в течение 30 сек. Приготовленный раствор вводят в колонку хроматографа при помощи микрошприца. Для количественного определения строят стандартные графики для каждого сахара. Для этого хроматографируют смесь, содержащую исследуемый моносахарид и эритрит в различных соотношениях. Измеряют площади соответствующих пиков, отношения площадей пиков моносахарида и эритрита выражают в виде функций отношений соответствующих весовых количеств. [c.82]

Полностью метилированные моносахариды, не содержащие в пиранозной или фуранозной форме свободных гидроксильных групп, могут образоваться при гидролизе только из концевых моносахаридных звеньев. Количественное определение их в гидролизате позволяет установить число концевых невосстанавливающих групп [c.88]

Среди метилированных моносахаридов, полученных после метилирования и гидролиза полисахарида, могут быть а) полностью метилированные производные со свободным гликозидным гидроксилом, образующиеся из концевых невссстанавливающих моносахаридных звеньев полисахаридных цепей б) производные с одним свободным спиртовым гидроксилом, соответствующие моносахаридам линейных цепей полисахарида в) производные с двумя спиртовыми гидроксилами, соответствующие точкам разветвлений полисахаридных цепей, и т. д.. Соотношение между Этими типами производных служит мерой разветвленнссти полисахаридной молекулы, а в частном случае линейного полисахарида количественное определение полностью метилированного моносахарида позволяет найти среднечисловой молекулярный вес (см. стр. 513). Уста- [c.496]

Химические методы определения молекулярных весов полисахаридов, заключающиеся главным образом в определении процентного, содержания восстанавливающих концевых моносахаридов, основаны на реакциях альдегидной группы и дают среднечисловые значения молекулярного веса. Обычными реагентами для количественного определения альдегидных групп служат окислители, такие как гипоиодит натрия, , соли меди , феррицианид калия . Реакции окисления в случае полисахаридов могут протекать нестехиометрически, так что они мало пригодны для вычисления абсолютных значений молекулярных весов, но очень удобны для сравнения по молекулярному весу различных фракций полисахарида . Весьма чувствительным методом анализа концевых восстанавливающих групп является реакция полисахаридов с меченым цианидом натрия в щелочной среде с последующим определением радиоактивности полимера этот метод неприменим, однако, к полисахаридам, разрушающимся щелочами. В тех случаях, когда полисахарид при периодатном окислении не дает формальдегида, его молекулярный вес может быть вычислен по образованию формальдегида после боргидридного восстановления альдегидных групп и последующего периодатного окисле-ния остаток полиола, получающийся из восстанавливающего моносахарида под действием боргидрида, может образовывать при окислении 1 или [c.514]

Отношение содержания невосстанавливающих концевых групп к содержанию восстанавливающих групп в полисахаридах показывает степень разветвления полисахаридной молекулы . В частном случае линейных полисахаридов, когда это отношение равно единице, определение невосстанавливающих групп также дает среднечисловой молекулярный вес. Анализ концевых невосстанавливающих групп может быть выполнен либо методом метилирования с количественным определением полностью метилированных моносахаридов, либо методом периодатного окисления, при условии, что при расщеплении по Смиту концевые и неконцевые остатки-моносахаридов образуют разные продукты реакции (см. ). [c.514]

К моносахаридам относятся гексозы (глюкоза, фруктоза, манноза i галактоза) и пентозы (ксилоза, арабиноза, рибоза, дезоксирибоза i рамноза). Моносахариды благодаря свободной кетонной или альдегид ной группировке способны окисляться до соответствующих кислот Таким образом, они обладают редуцирующими свойствами, которы используются для качественных и количественных определений моно сахаридов. Редуцируют не только моносахариды, но и некоторые ди сахариды, имеющие в своей структуре полуацетальный (глюкозидный гидроксил. [c.148]

По второму методу количественное определение массовой доли конкретного моносахарида в смеси производят по площади пика одного из его таутомеров, исходя из условия, что при синтезе ТМС-производных в строго постоянных условиях соотношение таутомеров сохраняется постоянным. Это позволяет для расчета выбрать наиболее разрешенный пик, называемый характеристическим. В качестве таких пиков обычно используют пики ТМС-производных Р-/,-арабинопиранозы, [3- )-кси-лопиранозы, а- )-маннопиранозы, а- )-галактопиранозы и -О-глюкопиранозы. Площади пиков остальных таутомеров непосредственно не измеряют, а находят расчетом. С учетом доли характеристического пика вычисляют общую площадь пиков всех таутомеров данного моносахарида. Количественное соотношение таутомерных форм необходимо устанавливать для данных условий хроматографирования и при их изменении определение следуют проводить вновь. Долю конкретного моносахарида находят отнесением площади всех пиков данного моносахарида к общей площади всех пиков. [c.140]

При нагревании моносахаридов с фелинговой жидкостью окисная медь восстанавливается до закисной, а альдегидная группа моносахарида окисляется до карбоксильной. Красная закись меди выпадает в осадок. Реакцию используют для количественного определения сахаров. [c.233]

При окислении моносахаридов в щелочной среде они расщепляются с образованием ряда продуктов, в том числе очень легкоокисляющихся. Поэто.му в щелочной среде моносахариды являются сильными восстановителями. Подобно альдегидам, они восстанавливают аммиачную окись серебра с образованием металлического зеркала, а также феллингову жидкость. В результате последней реакции получается закись меди. На этом свойстве основано их количественное определение. [c.106]