Белки растворимые, внутриклеточная

К сожалению, сорбционная теория, разработка которой осуществлена известным цитологом Д. Н. Насоновым, содержит ряд неизвестных или трудно определяемых параметров, например, упорядоченность воды как функция состояния белка, растворимость тех или иных веществ как функция упорядоченности воды и т. д. Поэтому в настоящее время всеобщее признание получила мембранная теория , согласно которой транспорт обменных веществ в клетку и из клетки осуществляется особыми мембранными насосами , причем внутриклеточная вода в мембранной теории играет роль растворителя со свойствами обычной воды. Отсюда видно, что модель диффузии воды в коллагене согласуется с представлениями мембранной теории о роли воды, в то время как теория анизотропного вращения молекул воды согласуется с адсорбционной теорией. На основе сказанного экспериментальное доказательство справедливости диффузионной модели имеет принципиальное значение. [c.138]

Известны два общих способа создания внутриклеточного сигнала поверхностными рецепторами. Один из них состоит в активации или инактивации фермента, связанного с плазматической мембраной. В некоторых случаях указанный фермент катализирует образование растворимого внутриклеточного медиатора, изменение концентрации которого служит сигналом. Важное место среди таких ферментов занимает аденилатциклаза, катализирующая синтез циклического АМР (сАМР) из АТР на внутренней стороне плазматической мембраны (рис. 2.2). В других случаях активируемый внеклеточным лигандом фермент прямо фосфорилирует клеточные белки [c.55]

Переводом в полимерное состояние обычных лекарственных веществ можно добиться существенного изменения ряда их свойств 1) увеличить длительность действия (эффект пролонгирования, создания депо ), что обусловлено замедленным поглощением лекарства из места введения и замедленным выведением его из организма 2) расширить диапазон допустимой дозы (уменьшение токсичности) и улучшить растворимость 3) изменить фармакокинетику (зависит от скорости освобождения активного компонента из полимерной структуры, мол. массы, структуры полимера и свойств включенных в него сомономеров, путей метаболизма) 4) изменить распределение в организме, что определяется связыванием с белками, всасыванием, взаимодействием с клеточными мембранами и внутриклеточными элемен- [c.371]

Внутриклеточная концентрация ферментов. Чтобы оценить в первом приближении фактическую концентрацию ферментов в бактериальной клетке, предположим, что она содержит 1000 разных ферментов, растворенных в цитозоле. Мы можем сильно упростить задачу, предположив далее, что молекулярная масса каждого из них составляет 100000, и что все 1000 ферментов присутствуют в одинаковой концентрации. Рассчитайте среднюю молярную концентрацию ферментов в такой гипотетической клетке, исходя из следующих условий в бактериальной клетке (которая представляет собой цилиндр диаметром 1 мкм и высотой 2 мкм) цитозоль (удельный вес 1,20) содержит 20% (по весу) растворимого белка и весь этот растворимый белок полностью состоит из различных ферментов. [c.269]

Как известно из курса коллоидной химии, соли оказывают очень сильное влияние на белки тканей тела, находящиеся в коллоидном состоянии. От. присутствия в клетках и тканях в известных концентрациях тех или иных ионов зависит степень дисперсности, гидратации и растворимости многих внутриклеточных и внеклеточных белковых веществ. Большое значение при этом имеют валентность и химическая природа ионов. Именно специфическими особенностями в действии различных катионов и анионов на физикохимическое состояние коллоидов клетки в значительной мере и определяется своеобразие физиологического действия отдельных ионов. [c.394]

Рис. 12-7. Внеклеточные сигнальные молекулы в зависимости от своей растворимости связываются с поверхностными или внутриклеточными рецепторами Гидрофильные молекулы не способны прямо проходить через плазматическую мембрану, поэтому они связываются с рецепторами на поверхности клетки-мишени. Многие гидрофобные молекулы могут диффундировать через плазматическую мембрану и связываться с рецепторами внутри клетки. Будучи нерастворимы в водных средах, гидрофобные сигнальные молекулы транспортируются кровью в виде комплексов со специальными белками-переносчиками, от которых они отделяются, перед тем как проникнуть в

В течение первой фазы закаливания (озимые злаки проходят первую фазу на свету при 0,5 —2°С за 6 — 9 дней древесные — за 30 дней) при пониженных положительных температурах (до 0°С) останавливается рост (если растения не находятся в состоянии покоя), в клетках накапливаются соединения, выполняющие защитную функцию (сахара, растворимые белки и др.), в мембранах возрастает содержание ненасыщенных жирных кислот, снижается точка замерзания цитоплазмы, отмечается некоторое уменьшение внутриклеточной воды, что тормозит образование внутриклеточного льда, [c.427]

Известны два общих способа создания внутриклеточного сигнала поверхностными рецепторами. Один из них состоит в активации или инактивации фермента, связанного с плазматической мембраной. В некоторых случаях этот фермент катализирует образование растворимого внутриклеточного медиатора, изменение концентрации которого служит сигналом. Важное место среди таких ферментов занимает аденилатциклаза, катализирующая синтез циклического АМР (сАМР) из АТР на внутренней стороне плазматической мембраны (рис. 13-19). В других случаях активируемый внеклеточньил лигандом фермент прямо фосфорилирует клеточные белки. Например, фактор роста эпидермиса ФРЭ) стимулирует деление эпидермальных и многих других клеток, присоединяясь к рецепторному белку клеточной поверхности. Рецепторами здесь служат протеинкиназы (или тесно ассоциированные с ними белки) фермент, активируясь при связывании с ФРЭ, переносит фосфат с АТР на тирозильные остатки определенных клеточных белков, в том числе на сам ре- [c.262]

Высокую активность ззз гистоауторадиографически установили р1гке1 и соавт. (1963) в ЖКТ, легких, надпочечниках и коже крыс в период от 5 до 30 мин после внутрибрюшинного введения меченого цистамина в дозе 100 мг/кг. Моп(1оу1 и соавт. (1962) определяли 8-цистамин в растворимых белках и субклеточных структурах большинства органов крыс после внутривенного введения протектора. Высказано предположение, что степень защиты отдельных тканей связана с концентрацией цистамина в их субклеточных структурах. Уже через 5 мин после внутривенного введения цистамина и АЭТ Владимиров (1967) обнаруживал их присутствие в митохондриях клеток селезенки и печени мышей. Тотальное гамма-облучение мышей (6 Гр) не влияло на распределение цистамина в субклеточных структурах. Через 30 мин после внутрибрюшинного введения цистамина мышам и крысам его внутриклеточное распределение у этих видов животных существенно не отличалось. Увеличение дозы цистамина у мышей приводит к повышению его содержания во всех субклеточных фракциях селезенки и печени, особенно в ядрах клеток [Владимиров, 1968]. Довольно быстро, в течение 5 мин, [c.45]

По первому принципу все белки разделяются на растворимые — глобулярные и нерастворимые — фибриллярные белки. К глобулярным относятся внутриклеточные белки, к фибриллярным — белки внешних покровов (шерсти, волос и др.). Далее белки разделяются на протеины (простые белки), в состав которых входят только остатки аминокислот, и сложные белки, или-яротеыды. -Шследние дают при гидролизе аминокислоты и какие-либо другие вацества, например фосфорную кислоту, глюкозу, гетероциклические соединения и т. д. [c.296]

Второй путь использования ферментов для кормления — это предварительное облагораживание различных кормов. Любой растительный корм содержит много клетчатки, нерастворимой и практически не усваиваемой организмом. Само по себе это вещество проходит организм, почти не изменяясь. Но этот полимер, как мы знаем, состоит из ценных, высококалорийных сахаров. Целый ряд микроорганизмов, грибов и растений содержит фермент целлюлазу, гидролизующий клетчатку. Если препаратом этого фермента обрабатывают грубый, содержащий много клетчатки, корм, то его калорийность повышается вследствие перевода неусваиваемого полисахарида в растворимые, хорошо усваиваемые сахара. Коэффициент использования кормов возрастает и после предварительной обработки их другими ферментами (амилазами, протеазамн), которые гидролизуют крахмал и белки. Ценным является также и то, что ферменты целлюлолитического действия расщепляют оболочки растительных клеток и этим способствуют более полному использованию внутриклеточных питательных компонентов, в частности протеинов. [c.301]

Вопрос о справедливости той или иной модели движения воды в коллагене имеет принципиальное значение, поскольку его решение связано с важными особенностями биологической роли воды, как отмечено в предисловии к настоящей главе. В частности, основные функции живого — мембранная проницаемость, молекулярная и ионная селективность клеток, мускульная активность, проводимость нервных импульсов и другие — по одной из гипотез ( адсорбционная теория ) определяются наличием особого, упорядоченного или структурированного состояния во всей гидратной оболочке белка. Согласно этой теории, вся или почти вся внутриклеточная вода связана или структурирована и растворимость данного вещества в ней является функцией степени структурной организации гидратной оболочки белка. В свою очередь, степень структурной организации водпо11 оболочки зависит от состояния самой белковой молекулы. Изменение состояния белка иод влиянием внешнего воздействия (например, нервного импульса) приводит в описываемой модели к очень сложной последовательности химических ре- [c.137]

Способность к автолизу определяется количеством растворимого азота, высвобождаемым известной массой дрожжей в течение 48 ч в водно-спиртовой раствор со значением pH 3,5 и температурой 37 °С. Автолиз представляет собой потерю сухой массы дрожжей с уменьшением содержания в этой сухой массе белков и нуклеиновых кислот при наличии внутриклеточной протеолитической активности [31]. Уменьшение содержания аминокислот в клеточных стенках связано с потерей глюкозамина и фосфата под воздействием глюканазы снижается и содержание глюканов в клеточной стенке, но толщина клеточных стенок остается той же, только они становятся более пористыми и рыхлыми [12]. При нагревании до 42 °С в течение 3-72 ч в винах, изготовляемых промышленным способом, возрастает содержание пептидов и аминокислот. Это явление связано с экскрецией и отличается от такого же явления вследствие выдерживания вина на дрожжевом осадке [13]. В ходе вторичного брожения или непосредственно после его завершения содержание растворимого азота (в частности, аминокислот) существенно возрастает и не может служить надежным индикатором автолитической активности. В фазе реактивации, соответствующей перестройке внутриклеточной структуры, происходит высвобождение (особенно из вакуолей) лити-ческих ферментов [31], и при этом из дрожжей высвобождается 30% азота, четверть которого представлена глутаминовой кислотой и аланином [36]. [c.193]

Наши первые исследования белкового состава миелина были посвящены изучению микрогетерогенности белков, извлеченных последовательно неионным детергентом — тритоном Х-100 и анионным детергентом — додецилсульфатом натрия. Приступая к выполнению этих исследований, мы руководствовались следующими соображениями. До последнего времени нейрохимики изучали преимущественно растворимые белки нервной ткани. Очень мало работ было посвящено нерастворимым белкам различных структур нервной ткани, в том числе и такой специфической мембранной структуре, какой является миелин. Между тем роль нерастворимых белков в процессах внутриклеточного обмена веществ и в транспорте ионов и метаболитов через мембраны не менее важна для функций клетки, чем роль растворимых белков гиалоплазмы. [c.24]

Внутриклеточные компартменты, общие для всех эукариотических клеток, показаны на рис. 8-1. Ддро содержит основную часть генома и является главным местом синтеза ДНК и РНК. Окружающая ядро цитоплазма состоит из цитозоля и расположенных в нем цитоплазматических органелл. Объем цитозоля составляет чуть больше половины от общего объема клетки. Именно в нем синтезируется белок и протекает большинство реакций так называемого промежуточного обмена - т. е. реакций, в которых одни малые молекулы разрушаются, а другие образуются, обеспечивая необходимые строительные блоки для синтеза макромолекул. Около половины всех мембран клетки ограничивают похожие на лабиринт полости эидоплазматического ретикулума (ЭР). На обращенной к цитозолю стороне ЭР находится множество рибосом. Эти рибосомы заняты синтезом интегральных мембранных белков и растворимых белков, предназначенных для секреции или для других органелл. В ЭР также синтезируются липиды для всей остальной клетки. Аппарат Гольджи состоит из правильных стопок уплощенных мембранных мешочков, называемых цистернами Гольджи он получает из ЭР белки и липиды и отправляет эти молекулы в различные пункты внутри клетки, попутно подвергая их ковалентным модификациям. Митохондрии и хлоропласти растительных клеток производят большую часть АТР. используемого в реакциях биосинтеза, требующих поступления свободной энергии. Лизосомы содержат пищеварительные ферменты, которые разрушают отработанные органеллы, а также частицы и молекулы, поглощенные клеткой извне путем эндоцитоза. На пути к лизосомам поглощенные молекулы и частицы должны пройти серию органелл, называемых эндосомами. Наконец, пероксисомы ( известные также [c.6]

Схему, показанную на рис. 5.1, можно использовать для определения внутриклеточной локализации какого-либо фермента или белка, принадлежащего Е. oli или другим кишечным бактериям. Преимущество этой схемы заключается в том, что при низких концентрациях Mg + (в данном случае источником Mg + служат как сами клетки, так и буфер для разрушения) наружная мембрана нерастворима в тритоне Х-100, в то время как цитоплазматическая мембрана полностью растворима. [c.159]

Альтернативные методы скрининга космидных библиотек, описанные в гл. 3, предполагают селекцию космидных клонов с использованием феномена гомологичной рекомбинации in vivo. Остальные главы книги посвящены вопросам, связанным с экспрессией клонированных генов. Для многих белков млекопитающих удалось осуществить высокопродуктивную внутриклеточную экспрессию в Е. oli. Однако гетерологические белки, локализующиеся в цитоплазме, часто образуют трудно растворимые агрегаты, что значительно осложняет получение нативного продукта. В гл. 4 описаны эффективные способы выделения активных растворимых продуктов из нерастворимых белков цитоплазмы Е. соИ. Вероятность деградации специфическими бактериальными протеиназами многих эукариотических белков, синтезируемых в Е. oli, может быть существенно снижена, если их экспрессировать в виде гибридных белков. Такие составные белки, в которых бактериальный компонент обычно представлен -галактозидазой, можно использовать в качестве иммуногенов для получения антисыворотки и моноклональных антител к клонированному эукариотическому белковому домену. Эти вопросы >ассматриваются в двух главах — одна посвящена получению поликлональной антисыворотки, а другая — методам гибридной технологии. В последующих главах книги описаны современные эукариотические экспрессирующие системы в гл. 7 — дрожжевая, далее в трех главах — системы на основе культивируемых клеток млекопитающих и трансгенные животные. В частности, описана система экспрессии с использованием векторов, которые несут гены, обеспечивающие возможность их индуцибельной амплификации это позволяет снимать токсическое действие антибиотиков, введенных в культуральную среду. Клонированные в таком векторе гены также [c.8]

Модулируют физико-химические свойства, такие, как растворимость, вязкость, заряд и денатурируемость Осуществляют защиту от протеолиза внутри клетки и во внеклеточном пространстве Влияют на протеолитический процессинг белков-предшественников до продуктов меньщего размера Участвуют в биологической активности, например, хорионического гонадотропина Влияют на проникновение в мембраны, внутриклеточную миграцию, сортировку и секрецию Влияют на эмбриональное развитие и дифференцировку Могут влиять на выбор мест метастазирования раковых клеток [c.300]

Внешний сигнальный агент, называемый первичным мессенджером, как правило, не проникает внутрь клетки, а специфически взаимодействует с рецепторами наружной клеточной мембраны. В качестве первичных мессенджеров выступают различные химические соединения (гормоны, нейромедиаторы) или физические факторы (квант света). Однако гидрофобные стероидные и тиреоидные гормоны способны диффундировать через липидный бислой внутрь клетки и связываться с растворимыми рецепторными белками. Если внешняя сигнальная молекула воздействует на рецепторы клеточной мембраны и активирует их, то последние передают полученную информацию на систему белковых компонентов мембраны, называемую каскадом передачи сигнала. Мембранные белки каскада передачи сигнала подразделяют на белки-преобразователи, связанные с рецепторами, и ферменты-усилители, связанные с белками-преобразователями и активирующие вторичные внутриклеточные мессенджеры, перено- [c.64]

Эндоплазматическая сеть заполнена бесцветной электроннопрозрачной жидкостью, коэффициент преломления которой очень близок к коэффициенту преломления гиалоплазмы. Жидкое содержимое, заключенное в компонентах эндоплазматической сети, включает соли и растворимые белки. С помощью электронной микроскопии была выявлена сложная система внутриклеточных трехмерных мембран цитоплазмы. Было обнаружено, что [c.34]

К первому типу относятся такие явления, как 1) чрезмерное осмотическое обезвоживание клеток, в результате которого уве-ллчивается концентрация внутриклеточных веществ, приводящая к высаливанию и необратимой денатурации растворимых белков или к повреждению мембранных структур из-за потери обеспечивающей их нормальное состояние доли воды 2) разрушение клетки за счет контакта с омывающей кристаллы льда средсгй., концентрация растворенных веществ в которой из-за превраще -ния части растворителя в лед непрерывно увеличивается вплоть до эвтектической области 3) резкое изменение кислотности иг ионной силы растворов вне и внутри клеток в процессе замораживания 4) повреждение клеточной мембраны вследствие до<-стижения клеткой минимального объема. [c.57]

Рис. 27. Удельная радиоактивность полисом, общего клеточного белка, белков ядер и щиоплазмы (Л) в сопоставлении с внутриклеточным содержанием лейцина (Б) в различные периоды клеточного цикла HeLa [64], На графике Л радиоактивность отражает включение Н-лейцина в полисомы и белки (за 3 мин). На графике Б представлена радиоактивность НС1-дансила, связанного с лейцином, как показатель концентрации последнего в пуле растворимых аминокислот.

В некоторых железистых клетках (поджелудочная, молочная и околоушная железы) одетые везикулы, образованные в аппарате Гольджи, вовлекаются далее в процесс экзоцитоза гормонов. Предполагают участие одетых везикул в секреции растворимых липопротеинов в гепатоцитах. Одетые везикулы способны также участвовать в трансэпителиальном транспорте иммуноглобулинов. Так, обнаружена ассоциация казеинсодержащих одетых везикул с микротрубочками в системе молочные железы — эпителий. Для обеспечения внутриклеточного транспорта одетых везикул служат белки цитоскелета, способные ассоциироваться с одетыми везикулами. В составе одетых везикул мозга и печени выявлены минорные компоненты а- и р-тубулин (54—56 кД), а также т-белок микротрубочек (50 кД), который способен фосфо-лироваться эндогенной цАМФ-зависимой протеинкиназой. Считают, что эти белки связывают трискелион с мембраной одетых везикул. Сам клатрин и одетые везикулы связываются с ручками микротрубочек—периодическими ответвлениями от продольной оси, содержащими динеиновую АТФазу. Клатрин также способен связываться с фибриллярным актином — Ф-актином и а-актинином. Таким образом, одетые везикулы совершают челночные рейсы от центра клетки к периферии и обратно, осуществляя как контейнеровозы внутриклеточный транспорт макромолекул. [c.54]

Концентрация кальция в крови (10 мг%, или 2,5 мМ) меняется не более чем на 3% и поддерживается в основном с помощью паратгормона, витамина Е) и тирокальцитонина, которые обеспечивают адсорбцию этого катиона кишечником, выведение из организма или отложение в костях. Основная масса кальция сосредоточена в костном скелете, который служит как бы буфером для ионов, циркулирующих в кровотоке. По крайней мере половина кальция в крови связана с белками плазмы, главным образом с альбумином. Общее содержание Са + в клетках тканей может достигать 10 ммоль/кг, т. е. уровня, превышающего его концентрацию во внеклеточной жидкости. Большая его часть связана внутри клеток с растворимыми лигандами (нуклеотидами, неорганическим фосфатом, цитратом, белками, например кальмодулином) и клеточными мембранами или аккумулирована во внутриклеточных депо. [c.8]

Как правило, мишени для кальция внутри клеток — это белки, способные активироваться при изменениях его концентрации в диапазоне от 0,1 до 10 мкмоль/л. В настоящее время выявлено по меньшей мере 100 кальцийсвязывающих белков, и список их, по-видимому, далеко не полон. В их числе такие хорошо изученные растворимые белки, как широко распространенный кальмодулин, парвальбумин (мышцы и нервная ткань), кальцинейрин (мозг), тропонин С (поперечно-полосатые мышцы), миозин. Естественно, что высоким сродством к кальцию обладают и ферменты биомембран, обеспечивающие удаление этого катиона из внутриклеточного пространства. [c.9]

Мишенями для Са + в клетке являются как растворимые , так и интегральные мембранные белки. Взаимодействие Са + с первыми, как правило, обеспечивает регуляцию различных метаболических процессов в клетке. Мембранные каль-цийселективные каналы и Са-насосы предназначены для регуляции внутриклеточной концентрации этого катиона. [c.112]

Увеличение концентрации ионизированного Са + в клетке от 0,01—0,1 до 1—5 мкмоль/л, т. е. до порога чувствительности растворимых белков (кальмодулина, легких цепей миозина, тропонина С), обеспечивает реализацию специфической функции клетки. Ответ клетки на сигнал проявляется до тех пор, пока не снизится внутриклеточная концентрация Са +. Существуют три универсальных пути удаления Са -ь из цитоплазмы клеток поглощение сетью эндоплазматического ретикулума, АТФ-зависимый и потенциалзависимый перенос через плазматическую мембрану. Первые два процесса осуществляют каль-цийпереносящие белки (Са-насосы], близкие по ряду функциональных свойств, но принципиально отличающиеся структурно. Третий процесс, обеспечиваемый электрогенным Ыа/Са-пере-носчиком, в явном виде не зависит от источника энергии (АТФ), однако он реализуется за счет энергии, запасенной в неравновесном распределении ионов по обе стороны плазмалеммы. В зависимости от знака потенциала и соотношения трансмембранных градиентов Ыа+ и Са + обмен этих ионов может осуществляться в обоих направлениях. [c.114]

Феномен внутриклеточной агрегации рекомбинантных белков еще плохо понят, по структуре генно-инженерного белка нельзя предсказать, как он себя поведет. Например, более 90 % фактора некроза опухолей человека с высоким уровнем эксл-рессии (20 % от общего белка) в клетках Е. соН НВ101 находится в растворимой форме, В то же время синтезированный с того же вектора и до того же уровня человеческий лейкоцитар- [c.324]

Пля практических целей явление внутриклеточной агрегации рекомбинантных белков носит двойственный характер С одной стороны, оно полезно, ибо позволяет селективно отделять их от растворимых белков. С другой стороны, почти каждый из таких агрегатов требует разработки индивидуального метода растворения (подбора солюбилизирующего агента, условий ренатура-ции и т а ) Такие методы обычно являются дорогостоящими [c.326]

С помощью красителей удается определить внутриклеточную локализацию и активность какого-либо фермента на специально приготовленных тканевых срезах (гистохимическое окрашивание). Чаще всего применяют различного рода соли тетразолия, так как продукт восстановления (формазан) представляет собой нераство-. римое ярко окрашенное соединение и местоположение осадка указывает на участок ферментативной активности. Ферменты, прочно связанные с мембранами (такие, как сукцинатдегидрогеназа), обнаружить легко, но растворимые ферменты могут диффундировать из тканевых срезов, если не предпринять специальных мер. Для предотвращения диффузии срезы предварительно обрабатывают поливиниловым спиртом, что удерживает ферменты внутри ткани. Количественные данные по ферментативной активности можно получить с помощью микроденситометрии или элюировав формазан и определив его количество спектроскопически. Ферментативную активность рассчитывают по отношеншо к объему среза или, лучше, к азоту белка. [c.233]

Наконец, последний тип внутриклеточного движения — это перемещение самих цитоскелетных элементов. В нейронах цитоскелет представляет собой вытянутую, линейную структуру, что делает возможным определение скорости его движения. В этих клетках наблюдаются две волны компонентов цитоскелета, мигрирующих по направлению от тела клетки эти две волны xopoшoJ различимы и носят название медленного компонента а и медленного компонента Ь . С медленным компонентом а транспортируются микротрубочки и нейрофил а-менты, а с компонентом Ь — актин и другие белки. Оба компонента транспортируют и белки, являющиеся, вероятно, цитоскелетными, и белки, которые считаются растворимыми, например енолазу и креатинкиназу [22]. Тот факт, что указанные ферменты переносятся той же транспортной системой, что и цитоскелет, указывает на возможность связи ферментов с элементами цитоскелета [22]. [c.94]

Форма клетки зависит от находящихся в данный момент в полимеризованном состоянии элементов цитоскелета. Существуют два экспериментальных подхода к исследованию сборки интерфазного цитоскелета, но каждый из них имеет свои ограничения. Один состоит в том, что в клетки вводится путем микроинъекции флуоресцентно меченный белок, способный участвовать в сборке цитоскелетных структур in vitro [182—186]. Внутриклеточная локализация этого белка изучается затем с помощью световой микроскопии. Структуры, идентифицированные таким образом, почти никогда не бывают артефактом, поскольку они выявляются также методом иммунофлуоресценции. Метод микроинъекций страдает некоторыми недостатками. С его помощью можно идентифицировать только такие цитоскелетные структуры, у которых происходит обмен мономерами с растворимой фазой. Стабильные структуры, у которых не происходит заметного обмена в течение нескольких часов, таким методом выявить нельзя. Метод микроинъекций не позволяет также различить процессы сборки и обмена. После инъекции сначала видна диффузная флуоресценция, которая затем локализуется в определенных точках такая картина равно согласуется и с предположением о том, что происходит сборка структур, способных к обмену, и с предположением о том, что инъецированный белок связывается с ограниченным числом связывающих участков. Различать эти возможности позволяет изучение кинетики процесса. Еще один недостаток рассматриваемого метода состоит в том, что на флуоресцентной картине размеры структур кажутся увеличенными по сравнению с действительными. Относительно результатов, получаемых данным методом, заметим также следующее 1) выявляемые им структуры, как правило, не являются артефактом 2) скорость, с которой выявляются структуры в опыте, отличается от скорости их формирования в клетке 3) в некоторых случаях наблюдаемая картина зависит от типа клеток [184] 4) определенное для микротрубочек направление сборки согласуется с тем фактом, что их быстро растущий конец является дистальным 5) наиболее подвижная форма актина, которую можно обнаружить в клетках [c.99]

При исследовании внутриклеточной локализации ферментов в клетках мезофилла ферментативное разрушение клеток дает ряд преимуществ. Во-первых, устраняются митохондрии, микротельца и такие потенциальные источники посторонних ферментов, как проводящие и эппдермальиая ткани. Во-вто-рых, можно получить высокое процентное содержание иитакт-ных органелл. А это несомненное преимущество, когда надо выяснить внутриклеточную компартментацию ферментов. Прп механическом разрушении более вероятны такие явления, как агрегация органелл, неспецифическое связывание растворимых ферментов с органеллами и формирование комплексов между белками и таннинами. Вероятность такого рода событий намного уменьш ается, если используют готовые протопласты. [c.556]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология