Буферы влияние температуры

Скорость ферментативной реакции зависит от концентрации субстрата (субстратов), pH, температуры, присутствия активаторов или ингибиторов, природы буфера, его ионной силы и др. Ряд факторов оказывает влияние на стабильность фермента, вызывая необратимые-изменения его нативной конформации. Это необходимо учитывать, подбирая условия измерения активности (pH, температура, время инкубации). Подробное исследование стабильности ферментов описано, ниже. [c.206]

Живые организмы успешно приспособились к водной среде и даже приобрели способность использовать необычные свойства воды. Благодаря высокой удельной теплоемкости воды она действует в клетках как тепловой буфер , позволяющий поддерживать в организме относительно постоянную температуру при колебаниях температуры воздуха. Высокая теплота испарения воды используется некоторыми позвоночными для защиты организма от перегревания с помощью механизма теплоотдачи путем испарения пота. Сильно выраженное сцепление молекул в жидкой воде, обусловленное влиянием межмолекулярных водородных связей, обеспечивает эффективный перенос в растениях растворенных питательных веществ от корней к листьям в процессе транспирации. Даже то, что лед имеет более низкую плотность по сравнению с жидкой водой и поэтому всплывает в ней, приводит к важным биологическим последствиям в жизненных циклах водных организмов. Однако наиболее существенным для живых организмов является тот факт, что многие важные биологические свойства макромолекул, в частности белков и нуклеиновых кислот, обусловлены их [c.102]

Рис. 8. Влияние температуры на элюцию инсулина с колонки ДЭАЭ-целлюлозы 0,005 М трис-НС1 буфером (pH 8,0), содержащим 0,3 М КС1 [32].

При обсуждении указанного явления необходимо прежде всего установить термодинамические условия концентрационной буфер-ности поверхностного натяжения. Затем мы рассмотрим влияние температуры и поверхностной активности компонентов на положение буферных точек в треугольнике составов. [c.131]

Здесь важно понять, что температурная зависимость не является той зависимостью, которая вызывает изменения pH буфера с температурой — этот эффект является результатом зависимости от температуры константы диссоциации кислоты, тогда как данная зависимость отражает влияние температуры на потенциал. [c.91]

Разработан целый ряд приемов для повышения точности анализа при испарении пробы из отверстия графитового электрода. Часто применяют полное испарение пробы, что обеспечивает поступление в разряд всех элементов независимо от летучести их соединений. Число атомов данного элемента, попавших в разряд за все время испарения, зависит в этом случае только от его концентрации в анализируемой пробе. Этим частично удается устранить влияние летучести соединения на интенсивность линий. Но совершенно освободиться от влияния состава пробы при этом нельзя, так как из-за фракционного поступления отдельных соединений они возбуждаются при разной температуре дуги, находятся в разряде разное время и испытывают разное самопоглощение в зависимости от скорости и момента испарения. Трудно также добиться одновременного испарения анализируемого элемента и внутреннего стандарта и равномерного поступления буфера. [c.249]

Кроме силы электрического поля, на движение ионов решаюш,ее влияние оказывают сопротивление среды, форма самих ионов и их гидратация. Количественная оценка этих факторов не входит в рамки этой главы. Однако необходимо иметь в виду, что воспроизведение электрофоретического разделения возможно лишь в тех случаях, когда строго соблюдаются все условия опыта (сила тока, напряжение, среда, в которой проходит разделение, концентрация веш,ества, температура, продолжительность опыта, ионная сила, качество применяемого буфера и т. д.). [c.529]

Разница в температуре между серединой капилляра и стенками в цилиндрической трубке возрастает пропорционально квадрату диаметра капилляра. Поэтому в КЭ применяют очень тонкие капилляры (диаметром от 50 до 100 мкм). Сам градиент температуры не может быть измерен из-за очень малых размеров капилляра. При уменьшении диаметра оптическая плотность слоя и, вместе с тем, чувствительность обнаружения уменьшаются (закон Ламберта-Бера). Другая возможность уменьшения влияния джоулева тепла состоит в снижении концентрации буфера и/или применении буфера с низкой ионной электропроводностью. [c.18]

На форму пика оказывает большое влияние концентрация буфера с ростом концентрации пики становятся более симметричными. Например, интенсивность пика калия при повышении концентрации буфера от 0.5 до 12 мМ возрастает в 4 раза. Однако такой способ оптимизации имеет определенные четкие границы, т.к. при концентрации буфера больше 8 мМ резко возрастают шумовые помехи сигналов. Этот рост связан с градиентами плотности, возникающими из-за разности температур вследствие выделения джоулева тепла в электрическом поле. В капилляре с внутренним диаметром 100 мкм, применяемом в этих опытах, можно использовать имидазольный буфер с концентрациями вплоть до 5 мМ. В обычно используемых капиллярах с внутренним диаметром 75 мкм можно работать с концентрациями до 10 мМ при величинах pH от 4 до 6. В капиллярах с внутренним диаметром 50 мкм можно [c.59]

Для устранения влияния третьих элементов вводят в качестве буфера 3%-ный раствор, содержащий литий. Эталоны готовят разбавлением присадки. Нагретые угольные электроды пропитывают образцами масла и сушат в течение 1,5—2 час. при температуре 400—450° С. Внутренний стандарт (кобальт) вводят в масло в виде двухпроцентного раствора нафтената кобальта в количестве одной трети от общего объема образца. Угольный стержень с пробой используют в качестве верхнего электрода, нижний — угольный электрод, заточенный на полусферу. Аналитический промежуток 3 мм. Аналитические пары линий Р 253,56 — Со 228,62 (или 237,36) нм. Интервал определяемых концентраций 5-10 —1,5-10 % Р. Средняя квадратичная ошибка определения фосфора 6 отн.%. [c.161]

Физико-химические помехи в ААС имеют ту же природу, что и в АЭС. Основными мешающими эффектами здесь также являются неполнота атомизации и ионизация. Сходны и способы борьбы с этими помехами — регулирование температурного режима атомизации и применение спектроскопических буферов (модификаторов матрицы). Кроме того, в ААС с электротермической атомизацией очень эффективным способом борьбы с физико-химическими помехами (межэлементными влияниями) и тем самым повышения селективности определений служит программирование температуры атомизатора. На рис. 11.27 приведен типичный вид такой программы. Как правило, она состоит из минимум четырех [c.246]

Влияние различий в составе основы можно иногда компенсировать, добавляя к анализируемым материалам вещество, называемое буфером. Действие буфера заключается главным образом в том, что в его присутствии температура источника поддерживается постоянной с высокой точностью. Наиболее эффективными для этой цели являются соли щелочных металлов калия, рубидия и цезия, поскольку их потенциалы ионизации меньше, чем у всех других элементов. Для многих веществ эффективным буфером является также кальций. [c.99]

Рис. 5.13. Влияние температуры на связываемость р алкогольдегидрогеназы 1) и фосфофруктокиназы 2) на N -(6-аминогексил)-5 -АМР—сефарозе [2]. Проводился диализ экстракта фермента (0,5 мл), содержащего 81 Е фосфофруктокиназы, 20 Е или 18,7 мг/мл алкогольдегидрогеназы, против 10 мМ К-фосфатиого буферного раствора (pH 6,8) затем раствор пропускался через колонку с замещенной АМР—сефарозой. Элюирование осуществлялось в линейном градиенте концентрации (0—1 моль/л) КС1 (общий объем элюата 40 мл) в 10 мМ К-фосфатном буфере скорость потока 0,4 мл/мин.

Влияние состава уменьшают одним из следующих методов озолением химической обработкой пробы перед анализом применением буфера с целью разбавления пробы, использования химических реакций во время испарения пробы или стабилизации температуры разряда подбором внутреннего стандарта подбором состава эталонов работой в подходящей атмосфере выбором способа введения пробы в зону разряда выбором источника света внесением в результаты анализа поправок, учитывающих состав пробы переводом пробы в раствор и анализом раствора. [c.86]

При введении в пробу 10% буфера испарение примесей происходит более равномерно. Дуга горит стабильнее (см. рис. 49, б). Падение почернения между 40 и 80 сек экспозиции значительно Меньше, однако все еще ясно выражено. Влияние буфера сказывается не только на испарении примесей, но и на температуре дуги. Об этом можно судить по кривым почернения линии углерода, для возбуждения которой требуется горячая дуга (потенциал возбуждения линии 7,69 эв). Почернение линии углерода в течение всей экспозиции находится в обратной зависимости от почернения линии лития. [c.101]

Цинк — сравнительно трудновозбудимый элемент (энергия ионизации 9,39 эв, энергия возбуждения наиболее интенсивной линии 5,80 эв). Поэтому для достижения высокой чувствительности его определения нужен сравнительно высокотемпературный источник света. Хорошие результаты можно получить при работе в атмосфере аргона, который обеспечивает низкую температуру электродов и высокую температуру дуговой плазмы. При добавлении в пробу большого количества вещества с низким потенциалом ионизации с целью подавления влияния состава температура дуги падает, что влечет за собой снижение чувствительности определения цинка (см. рис. 47). Небольшое количество буфера обеспечивает хорошее возбуждение линий цинка, но не подавляет влияние третьих элементов. В качестве внутреннего стандарта для определения цинка желательно использовать кадмий и сурьму. Удовлетворительные результаты получают также с висмутом и свинцом. [c.278]

При работе с отечественным рН-метром ЛП-5 легко удается измерять скорости реакций, соответствующие 0,2—0,3 мкмолям субстрата, распадающегося на 1 мин. Потенциометр ЛПУ-1 позволяет увеличить чувствительность метода в 5—6 раз. Наличие температурной компенсации в обоих приборах дает возможность измерять скорости реакций при температурах от 5 до 50°. Приборы позволяют проводить реакции при любых значениях pH, однако необходимо иметь в виду, что чувствительность метода снижается в сильно кислой среде (при pH 5) вследствие подавления диссоциации слабых карбоновых кислот, образующихся при гидролизе в щелочной же среде (при pH >8,5) существенное значение приобретает спонтанный (неферментативный) гидролиз субстрата. На чувствительность метода оказывает значительное влияние буферная емкость раствора — чем выше буферная емкость, тем, естественно, меньше чувствительность метода. По этой причине предпочтительнее работать в солевых средах в отсутствие буферных растворов. Однако для улучшения стабильности работы в реакционную среду можно добавлять небольшое количество буферного раствора (обычно мы использовали 0,002—0,003 М фосфатный буфер при работе в области pH 7,0 — 8,5). [c.149]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола иЯ-ЗО, литий-цитратные буферы. При постоянных значениях pH буфера (2,80), температуры колонки (38,8 °С) и скорости течения буфера (70 мл/ч) изменение концентрации цитрата с 0,033 до 0,166 М оказывает такое же общее влияние, что и увеличение pH буфера. При концентрации цитрата 0,033 М оксипролин и аспарагиновая кислота не разделяются, но по мере увеличения концентрации цитрата аспарагиновая кислота элюируется, опережая оксипролин. При концентрации цитрата 0,166 М цистатионин и метионин не разделяются. [c.45]

Значения Со оригинального метода Харвея сильно зависят от мат--рицы и мешающих влияний. Эти влияния можно уменьшить двумя способами [3] увеличением в десять раз количества графитового порошка, обычно добавляемого к пробе в соотношении 1 1, и использованием возбуждения при регулируемой температуре. Последнее можно достигнуть применением подходящего буфера и стабилизацией интенсивности дуги. [c.57]

Однако при проведении таких экспериментов в трактовке получаемых результатов следует соблюдать известную осторожность. Необходимо исключить температурный сдвиг pH буфера, влияние температуры на величины констант диссоциации комплексов субстрата с ионами-активаторами (например, Мд-АТФ) или комплексона с ионом, концентрацию которого он должен стабилизировать (оксалат Са или М -ЦДТА и т. д.), и, наконец, наличие критических температур для физико-химического состояния бислоя, его гидрофобный объем, легкость образования мицелл (например, в присутствии детергентов) и тем самым доступность субстрата или ионов-активаторов гидролитическим и эффектор-ным центрам в белково-липидных комплексах мембранных ферментов (Блюменфельд, 1977). [c.95]

В 0,5 М ацетатном буфере было исследовано влияние температуры на скорость сочетания в оба положения и найдено, что для ор/по-сочетания энтропия активации на 28 8 кал/°С более положительна, чем для сочетания в пара-положение. Возможно, что это различие объясняется неодинаковым составом эффективных переходных состояний обеих реакций. Для ор/по-сочетания наблюдаемая удельная скорость по существу равна и поэтому определяется изменением стандартного потенциала при переходе от растворенных ионов диазония и нафтолята к переходному состоянию лимитирующей первой стадии. Для пара-сочетания при высоких коцентрациях катализатора удельная скорость определяется главным образом стандартным потенциалом второго переходного состояния, которое образуется из трех растворенных веществ — ионов диазония, нафтолята и ацетата. Это может привести к понижению энтропии активации пара-сочетания по сравнению с ор/по-сочетанием, даже если картина осложнена сольватацнонными влияниями. [c.236]

Для обычных карбонатных вод с не слишком большой величиной солевого состава нормальность сум мы электролитов может быть приравнена к щелочности воды, выраженной в грамм-эквивалентах (величина щелочности, деленная на 1000). Для обычных определений, не преследующих особой точности, допустимо пользование средней солевой поправкой +0,20 pH. Заметное влияние на получаемый результат, хотя и меньше, чем солевой состав, оказывает в отдельных случаях разница температур испытуемой воды и буфера. Отклонение температуры воды от ее температуры в водоеме и температуры буфера от 18°С вызывает изменение константы диссоциации индикатора. Стандартными условиями являются приведение pH воды к температуре ее в водоеме и приведение pH буфера к 18°С. Введение поправки делается, согласно С. В. Бруевичу и Б. А. Скопинцеву, по формуле [c.47]

Рис, 40, Влияние температуры на скорость разложения КМпОл в ацетатном буфере пра загрузке окислителя [c.108]

Рис, 41, Влияние начальной концентрации КМпОл на скорость его разложения в ацетатном буфере прИд температуре 98 [c.108]

Различные буферы, используемые для ионного обмена, приведены в табл. 4.6. Концентрация ионной и нейтральной форм буфера должна составлять по меньшей мере 5 мМ. Таким o6tpa-зом, при использовании трис-С на ДЭАЭ-целлюлозе буфер должен соде ржать не менее 40 мМ триса, pH которого доведен до значения его р7(а с помощью НС1. Удобнее всего готовить буфер из 10 мМ НС1, доводя его pH до нужного значения незаряженным основанием (в данном случае трисом) преимущество этого способа состоит в том, что ионная сила точно известна (0,01 Н-трис+-С1 ). При работе с катионообменниками делают наобо рот, а именно 10 мМ КОН т1итруют до нужного значения pH с помощью МЭС. Следует помнить о влиянии температуры на величины р/Са (разд. 6.1), особенно если буфер готовят при комнатной температуре, а используют на холоде. К сожалению, при воспроизведении опубликованных методик редко бывает ясно, в каких условиях доводили pH до нужной величины — на холоде или при комнатной температуре. [c.121]

Ниже приведены важные факторы, влияющие на новый спектрофотометрический метод химического анализа и требующие специального изучения выбор растворителя, спектральные характеристики комплекса, выбор pH и изучение рк любых использованных буферов, влияние концентрации реагента, про верка подчинения закону Беера и установление оптимального диапазона концентрации, устойчивость окраски раствора, влияние температуры, точность и чувствительность метода, наложения (проверка для 40—50 элементов и анионов, которые, вероятно, присутствуют, обычно в 100-кратном избытке анализируемого вещества), маскировка и разделение, проверка со стандартами или стандартными материалами. Более подробно о таких проверках сказано в работе Киркбрайта [23]. [c.588]

Адсорбция молекул детергента на стенках капилляра приводит к обращению направления ЭОП уже при концентрациях несколько ниже ККМ. Вследствие этого анализируемые вещества движутся к аноду. Электрическое поле в данном случае должно налагаться таким образом, чтобы анод находился со стороны детектора. Противоион ионного детергента при данной температуре оказывает определенное влияние на ККМ. Например, ДДСН более растворим в воде, чем додецилсульфат калия. Если в буфере присутствуют ионы калия, это может привести к обмену противоионов, в результате чего растворимость детергента может уменьшиться настолько, что ККМ не будет достигаться. [c.82]

На рис. 21 показана заводская схема установки для дегидрирования борнеола. В стальной аппарат 1 с горизоитальнон мешалкой емкостью около 10 м обогреваемый посредством паровой рубашки, загружают 5—6 т борнеола или изоборнеола через загрузочное приспособление 13 и около 1 т растворителя из мерника 8. В качестве растворителя обычно применяют ароматические углеводороды (толуол, ксилол). После того как содержимое аппарата под влиянием разогрева примет полужидкую консистенцию, пускают в ход мешалку. Содержащаяся в борнеолах вода отгоняется в виде азеотроп-нон смеси с растворителем через полую колонну 2 высотой около 7 м и диаметром 800 мм и холодильник 3 в сборник 4 и далее во флорентийский сосуд 5, откуда вода выводится из системы, а растворитель возвращается в колонну. В колонне пары борнеолов, до поступления в холодильник, несколько обогащаются растворителем. Кроме того, колонна служит буфером, предохраняющим от перебросов плава и катализатора при последующей перегонке. После того как содержащаяся в борнеолах вода удалена, в аппарат постепенно вводят катализатор н одновременно отгоняют часть растворителя в сборник J0 с таким расчетом, чтобы температура кипения плава поднялась до 180—190°С. Выделяющийся при реакции водород выводят из системы через буферный сосуд (промывалку) 7 и газовый счетчик 14. Контроль за ходом реакции осуществляют путем > чета выделяющегося водорода и анализом плава на содержание борнеолов. [c.113]

Например, в работе [3], посвященной исследованию кинетики фумаразной реакции при различных значениях pH и температуры, показано, что на величину термодинамических и кинетических констант оказывают влияние природа буфера и другие факторы. Полученные авторами результаты отличаются от ранее найденных Мэсси [2], а также Хейманом и Альберти [4]. [c.134]

Основные аминокислоты, смола UR-40. При постоянных температуре колонки, концентрации и скорости течения буфера уменьшение pH с 4,148 (0,40 н. раствор) до 4,080 (0,40 н. раствор) оказывает следующее влияние уамино-н-масляная кислота задерживается примерно на 3 мин, улучшается разделение этаноламина и аммиака приблизительно до 0,09 (соотношение высот впадины и пика), а разделение лизина и 1-метилгистидина ухудшается до 0,50. Подвижность гистидина сильно зависит от величины pH буфера он элюируется позже, когда pH буфера понижается. [c.42]

При изучении влияния pH на активность ферментов опыт закладывают при различных значениях pH (4,5 5,0 5,6 6,2 7,0 8,0 и 9,2), для чего добавляют фосфатный буфер с соответствующими значениями pH. Колбы выдерживают в термостате в течение 24 или 48 часов (в зависимости от предполагаемой активности ферментов). При изучении активности ферментов в зависимости от температуры колбы с буфером (pH 5,5) выдерживают при различных температурэ1Х (8—12° 16—18° 24—26° 50° и 70°) в течение 48 часов. При изучении действия ферментов во времени колбы с автолитически-ми смесями выдерживают при pH 5,6 и температуре 35° в течение 3 6 12—14 24 48 и 72 часов, получая кривую активности ферментов во времени. Во всех случаях ставят контрольные колбы с инактивированными ферментами. Инактивацию проводят кипячением содержимого колбы в течение 3—5 минут. [c.147]

TOB (фториды, хлориды), с этой же целью используют реакции, протекающие в канале электродов при добавлении соответствующих реагентов к испаряемым порошкам [3, 4]. Известно, что устранение возникающих при испарении порошков из канала электрода систематических погрешностей определения э.лементов, в том числе малолетучих, достигается при вдувании тонкоистертых порошков проб в смеси с порошками буферов в плазму горизонтальной однофазной и трехфазной угольной дуг [5—7]. Однако ее температура (6000— 6500 К) не всегда обеспечивает полноту испарения трудполетучих оксидов определяемых элементов из частиц порошка, содержащих одновременно достаточно большие количества посторонних труднолетучих оксидов (рис. 2). Замена угольной дуги двухструйным дуговым плазмотроном, генерирующим высокотемпературную плазму (7000—7800 К),, снимает взаимное влияние труднолетучих элементов и минералогического состава проб при их определении в тонкоистертых, полностью испаряющихся порошковых пробах [8]. [c.139]

Для устранения или учета этих влияний разработан ряд методов, которые в первую очередь касаются подготовки пробы. Одним нз широко распространенных приемов является добавление к анализируемому порошку так называемого спектроскопического буфера , т. е. вещества, подавляющего влияние состава пробы на интенсивность линий определяемых элементов. Буфер (обычно солц натрия или калия) вводят в пробу в большой концентрации. Легко-ионизующиеся атомы щелочных металлов снижают температуру [c.196]

Рис. IV. 12. Влияние pH среды на продолжительность эмульсионной полимеризации винилхлорида в присутствии перекиси водорода . Температура реакции 53 °С. Эмульгатор — смесь натриевых солей алкилсульфоновых кислот с длиной цепи 12—С,g 3%. Концентрация инициатора 0,4%. Буфер — смесь NajHPOi и NaHaPO 0,25%.

Развертывание спирали РНК в растворах низкой ионной силы ведет к ликвидации гинохромного эффекта и к уменьшению константы седиментации в 8 раз (Беткер). Однако полного расщепления водородных связей при комнатной температуре не происходит. Около 20% связей остается. Другой аспект полиэлектролитного поведения РНК виден из рис. 93, где приведены кривые изменения удельной вязкости как функции температуры. Растворителем служил 6М раствор мочевины для того, чтобы понизить температурный интервал перехода спираль—клубок. Из верхней части рисунка (А и Б) видно, что интервал перехода у РНК зависит от концентрации полимера. Причина этого эффекта — влияние ионной силы, которая создается не только буфером с ионной [c.275]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология