Очистка методом противоточного распределения

Очистка методом противоточного распределения [c.114]

При очистке окситоцина использовали двухфазную систему, подобную той, которую применяли при разделении окситоцина и вазопрессина методом противоточного распределения [57]. Колонку заполняли сефадексом 0-25 в 0,2 н. уксусной кислоте для работы использовали системы растворителей, приведенные в табл. 34.2. Свободный объем определяли на второй стадии (после выхода из колонки органической фазы). Распределительную хроматографию проводили в системах, указанных в табл. 34.3. [c.418]

Метод противоточного распределения (ПТР) применялся для очистки многих пептидов, синтезированных твердофазным методом. Хотя для очень хорошего разделения смеси требуется много переносов, большинство пептидов, полученных твердофазным методом, особенно пептидов с молекулами средней длины, довольно чистые после отщепления от полимера-носителя, и для их очистки достаточно небольшого количества переносов, обычно от 100 до 300 переносов. Преимущество противоточного распределения состоит в том, что с помощью этого метода можно обрабатывать довольно большие количества вещества с гораздо большей легкостью, чем в случае использования колоночной хроматографии. Кроме того, очистка методом ПТР обычно занимает меньше времени (о деталях метода см. [20, 21, 34]). [c.114]

Извлечение вещества из смеси растворителем применяют либо с целью концентрирования и очистки одного вещества, либо для разделения и очистки всех компонентов данной смеси. При этом возможно решение как чисто аналитических задач, так и задач препаративного выделения. В промышленности экстракцию применяют в крупнотоннажном производстве. В лаборатории противоточное распределение стало одним из наиболее чувствительных методов определения чистоты миллиграммовых количеств природных и синтетических органических веществ. [c.379]

Другим методом очистки белков, основанным на различии в растворимости, является противоточное распределение по Крейгу [29, 30]. Сегодня оно осуществляется с помощью полностью автоматических установок, позволяющих проводить распределение разделяемых компонентов при многих тысячах ступеней переноса. Состояние равновесия при каждом распределении между двумя фазами описывается законом распределения Нернста. При разделении двух веществ эффект разделения будет тем выше, чем больше фактор переноса 0, равный соотношению коэффициентов распределения к К2. [c.347]

Перекристаллизация до достижения постоянной температуры плавления — вероятно, самая простая методика очистки и характеристики чистоты твердых кристаллических веществ. Обычно этого бывает вполне достаточно, но в ряде случаев применение этой или какой-нибудь другой характеристики гомогенности вещества но одному единственному критерию может привести к серьезным ошибкам. Так, например, образование смешанных кристаллов может сильно затруднить разделение двух веществ, в то же время четкая температура плавления, не меняющаяся при перекристаллизации, будет создавать видимость чистоты вещества. Необходимо использовать, по крайней мере, два метода очистки, например хроматографию и кристаллизацию, при этом в первом случае можно менять адсорбенты, а во втором — растворители для перекристаллизации. Чтобы выявить скрытые смеси, проводят операции до тех пор, пока не перестанут изменяться все физические свойства, которые могут быть определены. Практически обычно добиваются постоянства температуры плавления и оптического вращения (для жидкостей — температуры кипения и показателя преломления), а также прекращения изменений тонкой структуры ИК-спектра. Если это возможно, то дополнительно проводят хроматографирование на бумаге (до получения одного пятна в разных системах растворителей) и сравнение экспериментальных и расчетных данных при противоточном распределении. [c.29]

Опробовав различные приемы очистки, мы нашли тот, который полностью соответствовал поставленной выше задаче. Метод состоит в противоточном распределении с использованием определенной, специально подобранной системы растворителей и 5 делительных сосудов. Метод оригинальный, защищен авторским свидетельством [6]. [c.280]

Для глубокой очистки газов и жидкостей в лабораторной практике в последнее время, наряду с такими известными физико-химическими методами, как четкая ректификация, противоточное распределение и экстракция, с успехом начинает применяться и так называемая препаративная хроматография [1—3], в основном ее проявительный вариант, существенным недостатком которого, как известно, является малая производительность и разбавление конечных продуктов инертным газом-носителем. Применение проявляющего газа при разделении выдвигает также весьма сложную проблему глубокой очистки больших количеств этого газа для предотвращения попадания посторонних примесей в конечные выделенные фракции чистого мономера. [c.198]

Метод противоточной кристаллизации из расплава может быть использован для глубокой очистки некоторых летучих хлоридов (бор, титан, германий и галлий). Эффективность процесса разделения характеризуется определенными значениями коэффициентов распределения для равновесия твердое тело — жидкость, имеющими интервал значений от 1,5 до 10 для различных систем. Установлено, что коэффициент распределения в тех же системах для случая равновесия жидкость — пар не превышает значения 2,5. [c.110]

Один из новых приемов, который только начинает развиваться, — многократная многоступенчатая экстракция, так называемое противоточное распределение белков. Оно основано на различии распределения растворенного вещества (в данном случае — различных белков) между двумя несмешивающимися жидкими фазами. Этот метод применен был Крэгом и другими с большим успехом для очистки множества пизкомолекулярных веществ — коферментов, витаминов, антибиотиков, алкалоидов и др. Применительно к белкам вначале казалось, что невозможно будет подобрать пары жидкостей, несмешивающихся друг с другом и вместе с тем хорошо растворяющих белки. Чтобы метод экстракции был эффективен, необходимо коэффициент распределения растворенного вещества между /кидкими фазами иметь порядка единицы. [c.133]

Наши современные знания в области химии лишайниковых красителей обязаны работам Муссо (1955—1961). Методы, применявшиеся раньше для очистки орсеина, оказались недостаточно эффективными. Применяя распределительную хроматографию на порошкообразной целлюлозе или на кремнеземе, удалось выделить более 12 компонентов. Метод противоточного распределения Крэйга менее пригоден для препаративного разделения, но очень ценен для установления однородности препаратов, полученных после хроматографической очистки. Спектрографическое сравнение с модельными соединениями в сочетании с изучением продуктов разложения и синтетическими экспериментами привело к заключению, что эти пигменты являются производными феноксазона-2. Строение некоторых из них показано на схеме [c.312]

Антибиотический комплекс выделяют экстракцией мицелия 10-кратным объемом метанола с последующим упариванием экстракта в вакууме до образования осадка. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, промывают ацетоном, серным эфиром и сушат в вакууме. Дальнейшую очистку сырца и разделение его на компоненты проводят методом противоточного распределения в системе метанол—хлороформ—боратный буфер pH 8,3 при 250 переносах. Антибиотический комплекс, по данным противоточного распределения, представляет собой смесь двух компонентов (А и В) с коэффициентами распределения соответственно 2,0 и 3,14 содержание j<0Mn0HeHTa В в смесях не превышает 10%. [c.90]

Метод противоточного распределения, разработанный Крейгом [36], был применен для разделения смесей аминокислот и очистки белков [187]. Так как полярные группы, определяющие растворимость аминокислот, одинаковы для различных аминокислот, коэффициенты распределения аминокислот различаются незначительно, и, следовательно, их разделение становится трудной задачей. При ацетилировании [172] или образовании нипсиль-ных производных (/г-иодфенилсульфонилпроизводные) [94] фракционирование облегчается за счет уменьшения влияния полярных групп. Хроматографические методы значительно более эффективны по разрешающей способности, но они ограничены возможностью выделений сравнительно небольших количеств веществ. Успешное применение метода противоточного распределения зависит в значительной степени от подходящего выбора двухфазной системы растворителей. Кроме того, применение этого метода ограничивается возможностью разделения веществ низкого молекулярного веса 10 ООО), за исключением тех случаев, когда пептиды обладают большой устойчивостью к денатураций. В присутствии большинства двухфазных систем растворителей, как правило, легко происходит денатурация белков. Однако при нахождении благоприятных условий противоточное распределение-имеет преимущество по сравнению с другими методами, так как при этом возможно рассчитать коэффициенты распределения компонентов, которые могут быть установлены с большой точностью. Профиль кривой распределения дает хороший критерий чистоты вещества. [c.397]

Разделение нативной и денатурированной ДНК осуществляется также при помощи метода противоточного распределения [8, 17] и при помощи нитроцеллюдозных мембран [18, 31]. Очистка и выделение ДНК с применением градиентного центрифугирования описаны ниже (стр. 6-5). [c.64]

Белки в пробе можно коагулировать, например нагреванием. Липиды, воски, парафины и другие липофильные соединения удается отделить от гидрофильных компонентов методом экстракционного разделения между фазами петролейного эфира и водных спиртов (например, 60- и 95%-ного метанола в зависимости от природы веществ) в одной делительной воронке или в нескольких, применяя метод противоточного распределения. Различные виды аминокислот (основные, кислые и нейтральные) можно предварительно разделить посредством электрофореза на бумаге или в геле. Для отделения различных органических кислот и ряда соединений типа фенолов от сахароподобных веществ пригодны даже такие старые методы, как осаждение ацетатом свинца, основным ацетатом свинца и т. п. Некоторые группы алкалоидов можно высадить из экстрактов с помощью специфических реагентов, а затем выделить их. В тех случаях, когда представляют интерес органические вещества средней полярности, можно иногда очистить пробу непосредственно на бумаге, на которой должен проводиться хроматографический анализ. Неочищенную пробу хроматографируют сначала чистым петролейным эфиром (иногда несколько раз), липиды при этом перемещаются вместе с фронтом растворителя. Далее хроматограмму сущат, после этого можно хроматографировать пробу еще раз чистой водой, если целевое вещество полностью нерастворимо в ней. Вода вымывает из пробы соли, сахара, аминокислоты и т. д., которые перемещаются вместе с фронтом элюента или вблизи него. В заключение пробу хроматографируют специально подобранным элюентом, следя при этом, чтобы фронт растворителя не продвинулся на такое же расстояние, как при предыдущих операциях по очистке. [c.88]

Во многих случаях эффективным оказалось применение метода -противоточного распределения [107, 108]. Именно этот метод в сочетании с хроматографией позволил Бу-Локку и Джонсу с сотрудниками осуществить препаративное разделение, выделение и очистку специфической группы природных нолиинов, содержащих в молекуле концевую этинильную группу в сочетании с различным числом гидроксильных и карбоксильных групп. Общая методика выделения состоит в предварительном разделении смеси на нейтральную и кислую фракции. Последнюю затем метилируют и отдельно разделяют путем многократной хроматографии на окиси алюминия компоненты смеси элюируются обычно в следующем порядке [c.21]

Используя аппарат с ручным управлением, Бишоп с соавторами (Bishop et al., 1959) провели серию исследований, пытаясь при помощи метода противоточного распределения провести дальнейшую очистку полученного ими в результате процедуры, экстракции и диализа препарата токсина, выделенного из клеток М. aeruginosa. [c.157]

Группы тирозина (D 1—5). После щелочного гидролиза (Е I—5), превращения продукта гидролиза в соответствующий нитрофе-ниловый эфир (F 1—5), отщепления обеих тритильных групп под действием трифторуксусной кислоты при температуре от —5 до —10° (G I—5) и циклизации был получен цикло-[ь-Уа1-ь-Туг-L-Leu-D-Phe-L-Pro]2 2НгО. Для его очистки использовали метод противоточного распределения (24 переноса четыреххлористый углерод/хлороформ/метанол/вода, 7 3 7 3) Туг -Туг -грамицидин С был выделен в кристаллическом виде. [c.537]

Второй компонент тироцидиновой фракции — тироцидин В — получен в чистом виде Кингом и Крэйгом [1244] очистку проводили методом противоточного распределения. Антибиотик охарактеризован аминокислотным анализом и величиной молекулярного веса,- полученной путем определения содержания динитрофенильных групп в молекулах его моно- и быс-М-ОНР-произ-водных. Изучение продуктов частичного гидролиза тироцидина В привело к идентификации 12 ди-, три- и тетрапептидов, в результате чего авторы пришли к выводу, что тироцидин В представляет собой гомодетный циклический декапептид (50) [1245] [c.549]

В классический период развития органической химии, длившийся почти столетие, экспериментатор обходился, как правило, небольшим числом сравнительно простых типовых методов. Для овладения экспериментальной техникой тех лет достаточно было научиться осуществлять синтез нескольких десятков соединений, так как основные операции выделения и очистки веществ часто повторялись и мало отличались друг от друга. За последние десятилетия арсенал методов и приемов, применяемых в органической лаборатории, неимоверно вырос. Особенно много принципиально нового введено в методы выделения веществ, эффективность которых неизмеримо возросла благодаря внедрению различных видов хроматографии, противоточного распределения, электрофореза и т. д. Появился целый набор специальных приемов для работы в микро- и полу-ми кромасштабах. Такие методы, как хроматография в тонких слоях и на бумаге, в сочетании с физическими методами идентификации и контроля позволили органикам непрерывно следить за ходом химических реакций или процессов разделения веществ. [c.5]

Частичная очистка белков и полипептидов может быть достигнута осаждением концентрированными растворами солей, органическими растворителями или путем образования определенных соединений [31, 175]. Для очистки применяются также физические методы ультрацентрифугирование [175], электрофорез [179] и противоточное распределение [36, 187]. При любом методе очистки необходимо иметь критерий гомогенности белка или пептида. Даже кристаллическое состояние не может служить однозначным критерием чистоты [166]. В литературе имеются данные, которые дают возможность предположить, что многие высокоочищенные белки микрогетерогенны [32]. Тесты на гомогенность обычно включают иммунологические испытания, ультрацентрифугирование, электрофорез, диффузию, хроматографию и определение ферментативной или биологической активности [32]. [c.387]

Хебулаговая кислота и корилагин являются первыми таннинами, полученными в чистом кристаллическом состоянии они были выделены из миробалана и диви-диви (О. Т. Шмидт, 1948 г.). Для очистки этих соединений применялись современные хроматографические методы — хроматография на бумаге и противоточное распределение. [c.189]

Экстракционный метод нашел свое развитие в особом способе экстракции жидкости жидкостью, так называемой противоточной экстракции. Основан он на законе Нернста для идеальных растворов, согласно которому при одних и тех же условиях растворенное вещество распределяется между двумя несмешивающимися растворителями в постоянном, не зависящем от концентрации и воспроизводимом отношении. Если же в системе имеется два или больше веществ, то каждое из них подчиняется тому же правилу. Метод противоточной экстракции был предложен Мартином и Сингом в 1941 г. Синг обнаружил (1938) значительное различие в коэффициентах распределения ацилированных аминокислот между хлороформом и водой, а Мартин разработал перед этим противоточный экстрактор для очистки витаминов. Б конечном итоге их совмеот-ная работа привела к аппарату, в котором водная фаза адсорбировалась на силикагеле, а противоток создавался хлороформом. Этот метод был автоматизирован Крейгом в 1944 г. В 1948 г. Рэмси и Паттерсон применили неводные системы растворителей, в частности для разделения жирных кислот С5—С д. Конечно, революционизирующее значение в области выделения и очистки органических веществ принадлежит хроматографии, основанной на избирательной адсорбции растворенных веществ многими твердыми материалами. [c.304]

Для выделения циклического пептида из реакционной смеси раствор последней в воде или водном спирте пропускают последовательно через кислую и основную ионообменные смолы, которые абсорбируют все полярные побочные продукты. Очистку циклопептидов проводили также с помощью противоточного распределения [1215] и колоночной хроматографии на целлюлозе [1285]. Одним из самых существенных этапов идентификации продукта циклизации является определение его молекулярного веса. Для этого применяют метод изотермической перегонки в трифторуксусной [1285, 2018, 2533] или в муравьиной кислоте [2545], а также криоскопический метод. В последнем случае, кроме обычно используемых фенола и камфоры, предложено также применять диметилсульфоксид [2031, 2035] и ге-аминогек-сагидробензойную кислоту [1865, 1868]. [c.348]

Экстракцию, т. е. извлечение вещества из смеси растворителем, применяют с целью концентрирования и очистки одного вещества, либо для разделения и очистки всех компонентов данной смеси. Простейший вид экстракции заключается во встряхивании раствора, взвеси или. эмульсии (чаще всего в воде) с другим растворителем, несмешивающим-ся с первым. В зависимости от особенностей проведения процесса различают следующие его разновидности мацерация (твердое вещество экстрагируют многократно отдельными порциями растворителя при комнатной температуре) дигерирование (твердое вещество экстрагируют отдельными порциями растворителя при нагревании) перколя-ция (твердое вещество экстрагируют растворителем при комнатной температуре противоточным методом) перфорация (вещество экстрагируют из раствора непрерывно растворителем при использовании противотока процесс носит название противоточной перфорации) противоточное распределение (вещество экстрагируют противоточным методом периодически между двумя жидкими фазами). [c.37]

В наших опытах по очистке бензола от тиофена методом противоточной кристаллизации замечено, что распределение примеси по высоте колонны существенно отличается от экспоненциального, а средни размер кристаллов увеличивается при их прохождении сверху вниз по колонне. Аналотичные явления имели место и при разделении смеси стильбен — азобензол. Обе указанные системы образуют непрерывный ряд твердых растворов [13, 14] и весьма удобны в качестве модельных. Опыты прово.цили на двух колоннах типа Шилдкнех-та. Помимо небольшого различия в размерах они отличались, ввиду специфичности использованных модельных смесей в основном, лишь устройствами зон охлаждения, плавления и теп-изоляцией. Контроль процесса и эффекта разделения осуществляли с помощью газо-хроматографического анализа проб, отбираемых из различных точек по высоте колонны после достижения ею стационарного состояния. Считали, что стационарное состояние достигнуто, если содержание примесного компонента в ряде последовательно отбираемых проб из одной и той же точки не изменялось. [c.78]

Рассмотрены вопросы нрименимости метода противоточной кристаллизации из расплава для глубокой очистки хлоридов бора, титана, германия, галлия от некоторых примесей. Определены равновесные значения коэффициентов распределения в системах хлорид элемента — примесь и обсуждены возможности применения колонн двух типов перемещения кристаллов для процессов очистки. Рис. 2, библ. 10 назв. [c.232]

Быстро развивающаяся автоматизация предприятий химической, нефтяной, фармацевтической и пищевой промышленности требует разработки и усовершенствования методов непрерывного контроля состава сырья, полупродуктов и целевых продуктов, процессов пх очисткп и разделения, контроля п регулирования смешения реагентов, а также контроля основных химических процессов. Из многих средств автоматического контроля и управления технологическими процессами рефрактометрия привлекает своей универсальностью, высокой чувствительностью и простотой измерений при сравнительной легкости их автоматизации. Другой, не менее важной областью приложения автоматической рефрактометрии является контроль современных высокоэффективных лабораторных физико-химических процессов разделения, очистки и анализа — жидкостной хроматографии, противоточного распределения и ректификации. Обе эти сферы применения автоматической рефрактометрии выдвигают специфические метрологические и технические проблемы [1, 6—8]. Отчасти это общие и для промышленных и для лабораторных приложений проблемы, связанные с особыми условиями точного измерения меняющихся во времени показателей преломления потоков жидкостей или газов и техникой непрерывной регистрации оптических измерений. При этом, однако, требования, предъявляемые к автоматической регистрации показателей преломления в промышленных и лабораторных условиях столь существенно различаются, что целесообразно выделить и рассматривать отдельно два типа автоматических.регистрирующих рефрактометров — промышленные и лабораторные. [c.245]

Существуют различные методы выделения брадикинина из продуктов расщепления белков плазмы трипсином или змеиным ядом и его очистки, разработанные в различных лабораториях. Методика, применявшаяся Эллиоттом и сотр. [661, 666, 668, 669], заключалась в обработке фракционированной смеси белков из сыворотки быка 0,1 и. соляной кислотой при 37° (для инактивации ферментов, разрушающих брадикинин) и в последующей их инкубации с трипсином в течение 6 час. Полученную смесь осаждали спиртом, а из фракции, растворимой в 74%-ном спирте, чистый брадикинин удалось выделить с помощью противоточного распределения, хроматографии на, карбоксиметилцеллюлозе (ацетатно-аммониевый буферный раствор pH 6,5 и 5) и электрофореза. Сначала на основании неточных данных аминокислотного анализа считали, что брадикинин имеет следующий аминокислотный состав Ser Gly Pro Phe Arg= 1 1 2 2 2. Результаты кислотного гидролиза, расщепления химотрипсином и разложения по методу Эдмана позволили приписать бради-кинину следующую структуру [c.105]

Францу и сотр. [764] удалось выделить высокоочищенное вещество Р, обладавшее активностью 30 ООО—35 000 ВР-единиц мг. Для этой цели сырое вещество Р, выделенное из кишечника лошади, экстрагировали ледяной уксусной кислотой, осаждали эфиром и петролейным эфиром и хроматографировали на амберлите 1Р-45 и ШС-50, окиси алюминия и карбоксиметилцеллюлозе (КМЦ). При противоточном распределении в системе бгор-бутанол/трифторуксусная кислота/вода (120 1 160) поведение вещества Р напоминает поведение каллидина (/(=0,73) в этих же условиях брадикинин (Д =0,91) движется быстрее [287]. Зубер и Жак [2681] выделили, по-видимому, чистое вещество Р (150 000—300 000 ВР-единиц мг) из бычьего мозга. В этом случае среди прочих методов очистки применяли хроматографию на сефадексе 0-25 и карбоксиметилсефадексе, а также высоковольтный электрофорез. Фоглеру и сотр. [2385] из кишечника лошади удалось выделить препарат с удельной активностью 120 000 ВР-единиц мг, который, очевидно, не является совершенно чистым веществом Р. Эти исследователи использовали противоточное распределение в двух системах н-бутанол/пири-дин/ледяная уксусная кислота/вода (600 150 75 675, К= = 0,62 0,2) и н-бутанол/ледяная уксусная кислота/вода (4 1 5). Трудность выделения вещества Р в чистом состоянии обусловливается его неустойчивостью в водных растворах [499, 2385]. [c.180]

Синтез С-концевого пентапептида (G 7—II) был осуществлен взаимодействием BO -Phe-Tyr-Gly-OH (Е 7—9) с H-Leu-Met-NH2 (Е 10—11) и последующим удалением N-защитной группы хлористым водородом в ледяной уксусной кислоте. Конденсация фрагментов (G 1—6) и (G 7—11) карбодиимидным методом привела к защищенному ундекапептиду, блокирующие группы которого снимали обработкой трифторуксусной кислотой. Трифторацетат амида свободного пептида обладал растворимостью, достаточной для очистки противоточным распределением. [c.220]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология