Сахара, хроматографическое определение

Для определения сахаров хроматографическим методом лучше брать свежий растительный материал. В навеске материала для анализа должно содержаться около 100 мг сахаров. Таким образом, для листьев многих растений навеска будет составлять 10 г, а для плодов, овощей и ягод 1—5 г. Для фиксации материала используют спирт. [c.75]

Сорбенты с небольшим (но превышающим емкость монослоя) количеством жидкой фазы на носителях с малой удельной поверхностью (сорбенты малой емкости) получили очень широкое распространение. Большинство хроматографических анализов в биохимии, медицине, пищевой промышленности, в контроле загрязнений окружающей среды выполняют на таких сорбентах малой емкости. Метод ГААХ стал стандартным для анализа аминокислот, жирных кислот, стероидов, сахаров, для определения пестицидов в почве, воде и кормах и др. [c.162]

Определение состава смеси сахаров. Исследованию подвергают одну из следующих смесей 1 %-ных растворов сахаров в 15%-ном спирте глюкоза — лактоза ксилоза — лактоза смесь всех трех сахаров. Растворы сахаров наносят, как описано в предыдущей работе, на хроматографическую пластинку размером 25 х75 мм или 45 х 120 мм с закрепленным слоем силикагеля. В качестве элюента используют смесь этилацетата и 65 %-ного водного раствора 2-пропанола 1 1. После хроматографирования высушенную пластинку опрыскивают раствором, приготовленным из 0,93 г анилина, 1,66 г фталевой кислоты и 100 мл насыщенного водой 1-бутанола, затем пластинку нагревают так же, как в предыдущей работе. В тех местах, где находятся сахара, появляются коричневые пятна. Находят значения R , сравнивают их между собой и определяют состав исследуемой смеси. [c.270]

Практически в любом биохимическом исследовании очень важно уметь обнаруживать и точно определять ничтожные количества специфических соединений. Чаще всего для этого используют особые реагенты— индикаторы, которые при взаимодействии со специфическими соединениями определенным образом окрашиваются. Например, для выявления на хроматограмме аминокислот или пептидов, присутствующих в очень малых количествах (доли микромоля), хроматограмму опрыскивают нингидрином (дополнение 8-Е). Если выявляемое соединение находится в растворе, то по интенсивности окрашивания можно определить его количество. Фенолы и концентрированная серная кислота окрашивают сахара (в растворе или на хроматографической бумаге) в красный цвет. Эта реакция лежит в основе колориметрического анализа углеводов. Восстанавливающие сахара выявляют на хроматограммах, опрыскивая последние раствором нитрата серебра. [c.179]

Широкое распространение получила тонкослойная хроматография (ТСХ), причем в качестве сорбента предпочитают использовать силикагель с размером зерен 0,2 мм (рис. 25). Разбавленные растворы исследуемых веществ (или реакционных смесей) и растворы веществ сравнения при помощи капилляра (как, например, для определения температуры плавления или пипетка для определения сахара в крови) наносят в виде точек на линию старта (нижний край пластинки) и проявляют в хроматографической камере восходящим методом. [c.47]

Преимуществом колоночной хроматографии является возможность количественного фракционирования больших количеств веществ без превращения их в какие-либо производные. Однако хорошее разделение часто возможно лишь при малых скоростях элюирования, поэтому были разработаны новые виды колоночной хроматографии. Методы аффинной и адсорбционной хроматографии основаны на избирательной адсорбции молекул на нерастворимом адсорбенте, который содержит группы (молекулы), специфически взаимодействующие с молекулами подлежащих очистке соединений, например ингибиторы (для очистки ферментов) или антитела (для очистки антигенов) в настоящее время эти методы нашли широкое применение и для разделения углеводов. Невзаимодействующие с адсорбентом примеси удаляются, а связанный с адсорбентом сахар затем десорбируют способом, не приводящим к его разрушению. Десорбцию можно осуществить, изменяя pH, ионную силу среды или применяя соответствующий ингибитор взаимодействия, удерживающего вещество на адсорбенте. Для разделения ряда полисахаридов были использованы иммобилизованные формы (см. разд. 26.3.7.6) конканавалина А [40], являющегося фитогемагглютинином (лектином), который специфически взаимодействует с разветвленными полисахаридами определенного строения в настоящее время применяют и другие иммобилизованные фитогемагглютинины. Колоночная хроматография на носителях, покрытых полиароматическими соединениями [41], также находит применение для разделения полисахаридов. Благодаря достижениям в производстве носителей для жидкостной хроматографии под высоким давлением можно осуществить хроматографическое разделение быстро и избирательно описаны методы фракционирования небольших олигосахаридов, продолжающегося менее 1 ч [42]. [c.224]

Разделение смесей моносахаридов на компоненты представляет весьма сложную задачу вследствие близости многих свойств этих соединений, в первую очередь растворимости. Отдельные успехи были ранее достигнуты главным образом при выделении ряда моносахаридов в виде характерных производных, получение которых одновременно использовалось и для полуколичественного определения (см., например, ). В настоящее время проблема разделения моносахаридов в значительной степени решена благодаря широкому внедрению хроматографических методов, позволяющих быстро и эффективно анализировать сложные смеси сахаров, располагая микроколичествами вещества, и при необходимости проводить препаративное разделение смесей в крупном масштабе. [c.410]

В основу количественного определения сахаров положены те же реакции, что и для их качественного обнаружения . Классические методы анализа использовали, главным образом, восстанавливающие свойства моносахаридов и сводились к весовому или объемному определению продуктов реакции, тогда как новейшие методы являются в большинстве случаев колориметрическими. Для определения содержания данного моносахарида в смеси с другими сахарами используют, как правило, предварительное хроматографическое разделение ряд методов количественного анализа может быть с известной осторожностью применен для определения суммы сахаров в исследуемой смеси. [c.414]

Степень метилирования изучаемого метилированного сахара определяется на основании хроматографических и аналитических данных. Дальнейшее определение строения сводится к установлению положения метоксильных групп в молекуле. Выбор между несколькими возможны.ии структурами может быть сделан путем прямой идентификации с заведу [c.438]

При проведении серии хроматографических разделений рекомендуют в качестве веш еств сравнения использовать эталонные вещества для определения положения пятна — метод, который уже известен в хроматографии на бумаге сахаров. При этом пользуются величиной Rst, определяемой следующим образом [c.48]

Полный гидролиз полисахарида проводят для установления природы и соотношения составляющих его моносахаридных остатков. Качественный анализ гидролизата в настоящее время неизменно выполняют с помощью распределительной хроматографии на бумаге, что требует лишь микроколичеств сахаров и вместе с тем дает возможность идентифицировать присутствующие нейтральные, основные и кислые моносахариды. По хроматографии углеводов существует обширная литература [91, 97, 127, 131, 162]. Было испытано множество систем растворителей и много обнаруживающих реагентов как специфических, так и неспецифических, и составлены таблицы относительных скоростей движения сахаров на бумажных хроматограммах [131]. Для окончательной идентификации определенного сахара не достаточно одного только хроматографического анализа. [c.303]

В. Н. Богдановой была испытана методика определения сахара в крови с применением желтой кровяной соли в хроматографическом варианте на колонках, на порошках окиси алюминия и силикагеля, распределенных тонким слоем на стекле, а также па хроматографической и фильтровальной бумагах. [c.344]

Очищенный раствор количественно наносили на полосы бумаги быстрая хроматографическая (по 0,005—0,01 лл на пятно) и разделяли сахара с применением смеси н. бутанол — уксусная кислота— вода (4 1.-5) в течение 72 час. при 22—23° в нисходящем потоке. За это время было достигнуто четкое разделение всех присутствующих в листьях сахаров, что является необходимым условием для их последующего определения. [c.427]

Книга представляет собой руководство к практическим работам по органической химии для студентов биологического профиля. В I главе изложены важнейшие методы и приемы работы с органическими веш,ествами. И глава посвящена аналитической органической химии. В ней приведены современные хроматографические методы разделения, определения констант, идентификация, качественные реакции на функциональные группы. Детально описана задача на определение строения неизвестного органического вещества. В П1 главе описаны синтетические задачи по основным для биологов разделам органической химии сахарам, аминокислотам, жирам, гетероциклам. Рассмотрено выделение веществ из природных объектов. IV глава содержит условия задач для решения на семинарах. В большом приложении даны примерные планы коллоквиумов и семинаров, основы техники безопасности, организация работы со справочной и реферативной литературой, номенклатура ЮПАК, возможности ИК и УФ спектроскопии для определения строения неизвестного вещества. В книге много разнообразных справочных данных. [c.2]

При определениях сахаров проводят нисходящую хроматографию. Бумагу укрепляют в ванночке хроматографической камеры, в которую наливают растворитель, и плотно закрывают камеру. [c.78]

Все методы анализа сырья с целью установления состава, строения и свойств полисахаридов основаны на определении отдельных компонентов, содержащихся в гидролизатах полисахаридов, полученных при различных условиях гидролиза. Наиболее полную информацию о составе моносахаридов, олигосахаридов и уроновых кислот, присутствующих в гидролизатах, получают тогда, когда делают анализ хроматографическим методом на бумаге. Этим методом сахара и другие вещества разделяют и выделяют из смеси с различными веществами в том виде в каком они присутствуют в гидролизатах без изменений, а затем определяют их количество. При анализе смесей углеводов ч помощью газожидкостной хроматографии сахара необходимо сначала превратить в летучие производные, а затем провести их разделение и определение. Без потерь перевести сахара в летучие производные невозможно, поэтому результаты анализов менее точны, но время, затрачиваемое на анализ этим методом, значительно меньше [14]. [c.24]

Мешающие вещества. При анализе растворов, не прошедших хроматографического разделения, определению суммы редуцирующих сахаров мешает разнообразие их редуцирующих способностей и присутствие посторонних редуцирующих веществ — уроновых кислот, фурфурола и т. д. При анализе элюатов из хроматограмм этих помех нет. [c.85]

Подготовка проб. Непроявленные хроматограммы, предназначенные для определения отдельных сахаров, хорошо просушивают до полного удаления запаха растворителя, а затем, сравнивая с хроматограммой-свидетелем, разрезают на кусочки, каждый из которых должен содержать одно пятно. Вследствие неравномерной плотности хроматографической бумаги расположение сахаров на разных хроматограммах одной и той же серии не совпадает. Для уточнения расположения пятен на непро-явленных хроматограммах пользуются дополнительными свидетелями, которыми являются кусочки хроматограммы, прилегающие к вырезанному пятну. На рис. 31 показаны две параллельные хроматограммы. Хроматограмма I полностью проявлена, она является главным свидетелем. На ней имеется четыре пятна, соответствующие расположению разделенных сахаров — а, б, в, г. Хроматограмма II проявлена частично. Заштрихованная часть хроматограммы состоит из проявленных кусочков, которые [c.88]

Определение сахаров экспрессным хроматографическим методом [c.161]

Определение содержания легко- и трудногидролизуемых полисахаридов в древесине основано на реакциях их гидролитического распада до моносахаридов. Легкогидролизуемые и трудногидролизуемые полисахариды разделяют, применяя различные условия гидролиза. Количество образовавшихся моносахаридов определяют по их редуцирующей (восстанавливающей) способности методом Бертрана или эбулиостатическим методом. Полученные результаты пересчитывают в количество полисахаридов и выражают в процентах от абсолютно сухой древесины. Иногда гидролизаты анализируют на содержание отдельных сахаров хроматографическим методом. [c.133]

Высокомолекулярный характер целлюлозы доказан вискозиметрическим определением ее степени полимеризации, а также методами ультрацентрифугирования и осмометрии. Макромолекулы чистой целлюлозы состоят исключительно из звеньев D-глюкозы, поскольку в гидролизатах такой целлюлозы хроматографическим анализом не обнаружили других сахаров. В природной целлюлозе все гликозидные связи между звеньями считаются равноценными. Однако некоторые исследователи допускают существование в цепях древесной целлюлозы слабых связей между звеньями, появление которых обусловлено частичным окислением глю-козных звеньев с образованием карбонильных групп, ослабляющих обычные -гликозидные связи по отношению к гидролизу. Повышенное содержание карбоксильных и карбонильных групп наблюдается в технических древесных целлюлозах, особенно беленых. Возможно, что ослабляющее влияние оказывают и конформационные превращения в звеньях -D-глю-копиранозы. [c.228]

Первую информацию о наличии высших сахаров, а также обш,ее представление о природе высшего сахара дают качественные цветные реакции в сочетании с данными о хроматографическом поведении. В основе-цветных реакций на высшие моносахариды лежит взаимодействие с минеральными кислотами, которое приводит к образованию производных фурфурола, даюш,их окрашенные соединения с орцином, карбазолом, цистеином, дифениламином. Эти окрашенные соединения имеют максимум погло-ш,ения в ультрафиолетовой части спектра при определенных длинах волн, характерных для данного типа высшего сахара Так, например,, при реакции Дише на гептозы (серная кислота — цистеин) максимум поглош,ения возникаюш,его хромофора находится при 505 ммк, тогда как октулозы образуют хромофор с максимумом поглош,ения при 480 ммк. Высшие кетозы значительно легче, чем альдозы, превраш,аются в производные фурфурола, что используется для идентификации кетоз. Так, при реакции с орцином в присутствии соляной кислоты высшие кетозы дают более интенсивную окраску, чем альдозы, а если соляную кислоту заменить трихлоруксусной, то высшие альдозы не реагируют вообш,е [c.319]

В химии моносахаридов благодаря широкому развитию хроматографических методов многие вопросы выделения свелись в сущности лишь к. техническим задачам той или иной степени сложности, хотя в отдельных, случаях решение этих задач вызывает определенные трудности. Так, например, недостаточно эффективны имеющиеся в настоящее время методьс разделения таких соединений, как изомерные метилированные сахара. С широким введением в практику химии углеводов аналитической и препаративной газо-жидкостной хроматографии большинство стоящих сейчас проблем такого рода, по-видимому, найдет удовлетворительное разрешение для соединений небольшого молекулярного веса. [c.626]

Идентификацию и количественное определение сахаров можно осуществить различными хроматографическими методами хроматографией на бумаге [202, 204, 213, стандарт TAPPI Т 250 рт-7Ъ тонкослойной хроматографией [235] газовой хроматографией частично в комбинации с масс-спектроскопией [18, 102, 204, 244, стандарт TAPPI Т 249 ргп-75]. Позднее для определения полисахаридного состава древесины и технических целлюлоз применили автоматизированный анализ сахаров методом ионообменной хроматографии через боратные комплексы [73, 75, 76, 200]. Описан быстрый спектроскопический метод определения сахаров [192, 193, 194], основанный на измерении поглощения при 322 и 380 нм продуктов дегидратации сахаров (производных фурана), образовавшихся после полного гидролиза древесины или технической целлюлозы. [c.30]

Пастуска [4] приводит пропись для титрометрического определения сахаров в хроматографических зонах, соскобленных с пластинки. Метод основан на принципе мокрого сжигания смесью бжхромат калия — серная кислота и обратного титрования неиспользованного бжхромата калия. Количество сахара должно составлять около 0,5 мг. [c.460]

Хроматографические разделения основаны на селективной адсорбции и дифференциальной диффузии. Во многих случаях успешное разделение достигается обменом ионов, как, например, замена Са + на 2Ка ири умягчении воды. В других случаях искомые вещества адсорбируются из раствора и удерживаются адсорбентом, так что раствор непрерывно от них освобождается. Это имеет место, например, при удалении окрашенных веществ из растворов сахара твердыми адсорбентами. До настоящего времени хроматографический метод остается в значительнбй степени эмпирическим, т. е. нет определенных принципов, на которых можно основываться при выборе адсорбента, растворителя и элюента когда требуется провести разделение какой-либо смеси. Выбор этот следует делать, основываясь на накопленном опыте. В последнее время, однако, эмпирические сведения накапливаются быстро, и уже сделано достаточно обобщений, чтобы дать некоторые теоретические основы, которыми можно руководствоваться при выборе методов для осуществления требуемых разделений. [c.183]

Сахар Определение по Бертрану Хроматографическое разделение и определение с антроном [c.429]

Как уже упоминалось выше, при определении с антроном сахаров, элюируемых с хроматограмм, всегда необходимо вводить поправку на бумагу. Это вызывается следующими причинами. Было замечено, что если участок чистой хроматографической бумаги, через которую был пропущен растворитель, экстрагировать теплой водой, экстракты сгустить и нагреть с антроновым реактивом, то раствор окрасится в зеленый цвет. Это окрашивание наблюдалось при использовании различных сортов бумаги быстрой хроматографической, бумаги фабрики [c.430]

Учитывая это обстоятельство, определение сахаров с антроном производили следующим образом измеряли площадь или вес бумаги, с которой элюировали сахар после этого брали образец чистой хроматографической бумаги, равный по площади или по весу опытному образцу, и производили экстракцию и дальнейшую обработку обоих образцов одинаковым способом. Экстракты сгущали до равных объемов, на определение брали по 1 мл. [c.431]

Для определения сахаров водный остаток после экстракции этилацетатом объединяли с промывными водами и пропускали последовательно через колонки с катионитом КУ-2 (в Н -фо,рме) и анионитом ПЭ-9 (в ОН -форме). Элюат,имевший обычно нейтральную реакцию, упаривали в вакууме до малого объема и использовали для хроматографического разделения на бумаге (растворитель к-бутанол -(-СНдСООН + Н2О 40 10 50 проявители мочевина, нафторезорцин, ка/ а-анизидин). Размеченные по проявленным контрольным полосам зоны хроматограммы вырезали и элюировали водой. В аликвотах элюатов определяли радиоактивность сахаров и их содержание с антроном (Павлинова, 1957). Радиоактивность измеряли в бесконечно тонком слое, пользуясь торцовым счетчиком и установкой тина Б. [c.95]

Через несколько часов, когда можно ожидать разделения аминокислот, бумагу вынимают из ванночки и растворитель удаляют высуи иванием. После этого для лучшего разделения аминокислот лист бумаги поворачивают на 90° и снова помещают в ванночку и по бумаге пропускают другой растворитель. После вторичного пропускания растворителя бумагу обрабатывают каким-либо реактивом, дающим окрашивание при взаимодействии с аминокислотами, чаще всего нингидрином или изатином. На бумаге появляются окрашенные пятна, соответствующие отдельным аминокислотам. По месту положения пятен и интенсивности их окраски судят о наличии и содержании в гидролизате белка тех или иных аминокислот. Фотография хроматограммы показана на рисунке 21. Метод распределительной хроматографии на бумаге позволяет быстро и точно определить содержание аминокислот. В последние годы хроматографические методы успешно применяются для разделения и определения сахаров, органических кислот и ряда других соединений. [c.218]

Когда углеводы облучают ионизируюш,им излучением в водном растворе, происходит значительное разрушение и образуются разнообразные продукты [1, 2]. Чтобы выяснить схему этих процессов, необходимо идентифицировать и точно оценить образуюш,иеся продукты. Обычные аналитические методы оказываются непригодными для этой цели из-за сложности реакционных смесей и малых количеств образуюш ихся индивидуальных комнонентов. В этой статье описывается применение сахаров, меченных С , в соединении со стандартными хроматографическими методами для разделения и идентификации продуктов реакции. Описаны методы изотопного разбавления для количественных определений. Методы иллюстрируются па примере облучения у-лучами Со" водных растворов -сорбита и -маннозы в присутствии кислорода. [c.201]

Из реактивов, которые используются для получения стабильных и летучих производных альдегидов и кетонов, наиболее популярны О-алкилгидроксила-мины (табл. УП.б) и 2,4-динитрофенилгидразин (см. раздел 5.2). Для проведения реакции карбонильных соединений с гидроксиламином, метоксиламином и бензилоксиамином обычно используют пиридиновый раствор [ 14]. Для ускорения реакции реакционную смесь нагревают при 60—100°С. Растворитель (пиридин) удаляют испарением в потоке азота, затем анализируемый образец растворяют в этилацетате и аликвотную часть полученного раствора хроматографируют. Иногда (например, в случае идентификации стероидов и сахаров) реакцию образования оксимов проводят перед реакцией силилирования. Следует отметить, что оксимы (в определенных условиях) в хроматографической колонке количественно превращаются в соответствующие нитрилы. [c.300]

О содержании отдельных пентозанов в растительном материале судят по сахарам, получающимся при гидролизе. Сахара определяют хроматографически. Чаще определяют суммарное содержание пентозанов. Это определение основано на гидролизе пентозанов до пентоз с последующим образованием из пентоз.фурфурола при перегонке с 12 %-ной соляной кислотой. [c.141]

Качественные методы, предназначенные для определения наличия интересующих веществ в пробе с помощью хроматографии на бумаге, являются не только экспрессными, но и массовыми, позволяющими анализировать одновременно много проб. При анализе проб, отобранных на различных стадиях технологического процесса, качественный анализ становится полуколичест-венным. Сравнение интенсивностей окрасок пятен на хроматограммах проб, отобранных в различное время, дает возможность судить о скорости увеличения (при гидролизе) или уменьшения (при биохимических процессах) концентрации тех или иных сахаров. В зависимости от содержания редуцирующих веществ в пробе применяют хроматографирование на лопатках из хроматографической бумаги пли на полосках. [c.82]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология