Анализ количественный биологических препаратов

Техника количественного анализа биологических препаратов 29 [c.29]

Среди лабораторных методов очистки, фракционирования и анализа структуры белков, нуклеиновых кислот и их компонентов совокупность различных хроматографических методов занимает центральное место. Ни один другой метод не может сравниться с хроматографией по широте количественного диапазона. Начиная от препаративных колонок объемом в несколько литров, на которых можно вести фракционирование граммовых количеств препарата на первых этапах выделения фермента, через разделение близких по своей природе компонентов очищенной смеси веществ, количество которых измеряется миллиграммами или долями миллиграмма, этот диапазон простирается до микроанализа аминокислотного состава белка, когда на колонку вносят сотые доли микрограмма исходного гидролизата. Вне конкуренции остается и разнообразие физико-химических параметров, по которым может осуществляться хроматографическое фракционирование молекулярные размеры, вторичная или третичная структура биополимеров, растворимость, адсорбционные характеристики молекул, степень их гидрофоб-ности, электрический заряд и, наконец, биологическое сродство к другим молекулам. [c.3]

В плане практического применения эти методы, совершенствуясь, приобретают все большее значение благодаря их избирательности, чувствительности, быстроте выполнения процедур в стандартизованных условиях, пригодности для обработки большого числа образцов. Эти методы постепенно заменяют некоторые традиционные биохимические способы количественного определения содержания веществ. В течение уже почти двух десятилетий при анализе белков для контроля качества пищевых продуктов очень серьезно рассматриваются возможности иммунохимических методов. Если значимость этих методов в данной области и не была так велика, как в клиническом анализе, то это объясняется трудностями анализа, изначально присущими исследуемому растительному материалу. В самом деле, клинический анализ чаще всего применяется к биологическим жидкостям или тканевым препаратам, которые минимально подвергаются денатурирующим воздействиям. В противоположность этой ситуации пищевые продукты, подвергаемые анализу, нередко имеют твердую форму, и из них надо извлекать белки. Кроме того, и в этом состоит принципиальная трудность, натуральные компоненты, используемые в этих продуктах питания, как твердых, так и жидких, могут испытывать резкие физико-химические [c.116]

Основными и принципиальными достоинствами метода масс-фрагментографии являются его исключительно высокая чувствительность и селективность. Это обусловливает его широкое использование при анализе неразрешенных хроматографических зон. Однако этот метод основное применение находит для обнаружения и количественного определения следовых количеств веществ в больших объемах растворителей и биологических жидкостей. Поэтому основными сферами приложения масс-фрагментографии являются анализ пестицидов, определение лекарственных препаратов и продуктов их метаболизма в биологических жидкостях, решение биохимических задач, допинг-контроль, охрана окружающей среды и др. [c.196]

Фармацевтическая химия — наука, изучающая способы получения лекарственных препаратов (средств), их физические, химические свойства, условия хранения, методы исследования качественного и количественного состава. Важнейшими задачами современной фармацевтической химии являются целенаправленный поиск новых лекарственных веществ, выявление закономерностей взаимосвязи структура — биологическая активность , совершенствование существующих методов анализа лекарственных веществ. [c.320]

Инфракрасная спектроскопия с успехом применяется в фармакологических исследованиях, производстве и для контроля качества продукции, так как является прекрасным методом идентификации соединений, качественного и количественного анализа. Цель настоящего обзора — дать описание более или менее типичных применений ИК-спектроскопии в фармакологии и обобщить основные направления фармакологической литературы. Сюда могут быть, очевидно, включены работы по исследованию чистых лекарственных веществ в том виде, в котором они применяются в практической медицине, работы по изучению родственных соединений биологического происхождения и исследованию таких сложных систем, как микроорганизмы или животные ткани, на которые воздействуют лекарственные препараты. [c.105]

Реакции нейтрализации лежат в основе метода нейтрализации. Этот метод используют в клинических лабораториях для определения кислотности желудочного сока, буферной емкости плазмы крови. В фармации его применяют для количественного анализа неорганических кислот — соляной, серной, борной и органических кислот — уксусной, бензойной, винной, лимонной, салициловой. В биофармацевтических исследованиях методом нейтрализации определяют рКв кислот и рКь оснований, так как по значению этих величин можно прогнозировать способность лекарственных препаратов проходить через биологические мембраны. [c.120]

Титр вируса в культуральной среде инфицированных клеток можно определить с помощью целого ряда методик, в основе которых лежат физические, биохимические или биологические методы анализа. Наибольшее распространение получил способ, заключающийся в количественном определении вирусной геномной РНК в культуральной среде с помощью гибридизации с меченным ДНК-зондом. Эту стандартную процедуру дот-блот-гибридизационного анализа проводят после концентрирования препарата вируса, как описано в табл. 9.4. Количественное определение достигается путем сравнения интенсивности полученного гибридизационного сигнала с интенсивностью контрольных сигналов гибридизации точно титрованного вируса (разд. 9.6.1.3) или известных количеств РНК, или ДНК, нанесенных на фильтр. Используя разные ДНК-зонды, можно оценить концентрацию индивидуальых компонентов в вирусном препарате и непосредственно определить, содержит ли вирус интересующие нас последовательности. [c.297]

Метод хроматографии в тонком слое, которую, в принципе, можно рассматривать как открытую колонку , был открыт в 1938 г. (М. С. Шрайбер, Н. А. Измайлов) [7] и благодаря работам Э. Шталя по его стандартизации [14, 344, 345] занял одно из ведущих мест в качественном и количественном анализе сложных смесей химических соединений, фармацевтических препаратов, биологических жидкостей и природных объектов [26-30, 346-356]. В 1964 г. вариант хроматографии в тонком слое признан в качестве официального стандартного метода в фармакопеи. [c.376]

Молекулярная гетерогенность стандартов. ВОЗ установлены международные стандарты, контрольные препараты или контрольные реагенты для двух групп сложных биологических соединений 1) соединений (например, пептидных гормонов), которые можно очистить и определить количественно с помощью биологических анализов 2) веществ (например, ферритина или субъединиц гликопротеиновых гормонов), которые в настоящее время можно определить только по их иммунологической активности. [c.27]

В 1973 г. Перейра и др. [300] описали методику определения аминокислот в экстрактах почв методом хроматомасс-спектрометрии. Этим же авторам удалось провести количественный анализ 12 аминокислот в биологических жидкостях 301], используя соответствующие внутренние стандарты обнаружение аминокислот проводилось по определенным пикам в масс-спект-ре. Впоследствии было показано, что для обнаружения и количественной оценки аминокислот в биологических препаратах можно использовать их триметилсилильные производные [302—304]. Опубликовано также сообщение о применении выщеуказанного метода обнаружения для одновременного определения триптофана, триптамина, индолил-З-уксусной кислоты, серотонина и [c.85]

Благодаря чувствительности, воспроизводимости и простоте, спектроскопия в УФ/вид.-области применяется для количественного определения микроколичеств металлов, в анализе лекарственных препаратов, биологических жидкостей и пищевых продуктов. Пределы обнаружения обычно лежат в диапазоне 10 -10 моль/л (при использовании экстракщгонного концентрирования), погрешность воспроизводимости метода в обычных случаях не превышает несколько десятых процента. Подробнее см. разд. 9.1.6 (определение микроколичеств металлов, холестерина, ферментов, ВИЧ и др.). [c.156]

Каковы же ближайшие перспективы Можно ли, продолжая изучение Met- и Ьеи-энкефалинов и других пептидных гормонов в том же плане, получить со временем полную и объективную количественную информацию об их структурной организации и зависимости между структурой и функцией Чтобы ответить на этот вопрос, предположим, что такой информацией мы уже располагаем, и попытаемся представить, что она могла бы дать для понимания структурно-функциональной организации энкефалинов и описания механизмов их многочисленных функций. Как можно было бы логически связать данные, например, о 10 низкоэнергетических конформациях каждого нейропептида с приблизительно таким же количеством его функций Очевидно, установить прямую связь при неизвестных пространственных структурах рецепторов не представляется возможным. Число возможных комбинаций, особенно если учесть существование нескольких рецепторов (ц, а,5) для осуществления только одной опиатной функции энкефалина, слишком велико, чтобы надеяться даже в гипотетическом идеальном случае найти искомые соотношения интуитивным путем. Многие полагают, что к достижению цели ведет косвенный путь, заключающийся в привлечении синтетических аналогов, изучении их структуры и биологической активности. В принципе подобный подход вот уже не одно столетие применяется в поиске фармацевтических препаратов. Однако такой путь в его сегодняшнем состоянии не только длителен, сложен и дорогостоящ, но, главное, он не может привести к окончательному решению проблемы. Замена аминокислот в природной последовательности, укорочение цепи или добавление новых остатков, иными словами, любая модификация химического строения природного пептида, неизбежно сопровождается изменением конформационных возможностей молекулы и одновременно затрагивает склонные к специфическому взаимодействию с рецептором остатки, что сказывается на характере внутри- и межмолекулярных взаимодействий, в том числе на устойчивости аналогов к действию протеиназ. Для учета последствий химической модификации на характер внутримолекулярных взаимодействий можно использовать теоретический конформационный анализ и методы кванто- [c.352]

Для количественного определения витаминов в готовых препаратах, в растительных и животных источниках, в продуктах питания, в кормах, а также в биохимических системах разработаны химические, физические, микробиааогические и биологические методы анализа [22, 231. [c.17]

Полярографические методы также успешно применяются при анализе 1,4-бенздиазепинов в биологических средах и лекарственных формах (табл. 27) [265]. Лекарственные формы хлордиазепоксида в буферных растворах Бриттона—Робинсона с pH 1—4 могут быть определены количественно, так как высота первой волны восстановления и сумма высот первой и второй волн находятся в линейной зависимости от концентрации препарата [298]. Этот препарат исследован методами циклической вольтамперометрии и кулонометрии при контролируемом потенциале. Хлордиазепоксид прочно адсорбируется на электроде, поэтому его можно определить в биологических [c.229]

Количественное определение следов компонентов в биологических образцах с помощью ГХ — МС — задача достаточно сложная Вероятно, для количественного определения одиночного соединения наилучшим является метод изотопного разбав ления, при этом исследователь должен иметь в своем распоря женин дейтерированные лекарственные препараты и (или) их метаболиты с достаточно высокой изотопной чистотой Следует отметить что дейтерированные анаболические препараты недоступны и, с другой стороны метод изотопного разбавления не всегда применим для анализа большого числа следовых компо иентов В этих случаях имеет смысл выбирать в качестве внут реннего стандарта соединения, характеризующиеся хорошими масс спектральными характеристиками и удобным для анализа временем удерживания В работе [84] в качестве внутреннего [c.139]

Эта группа объектов наиболее многочисленна и разнообразна новые органические и элемвнторганические соединения, биологически активные и фармацевтические препараты, полимеры и материалы на их основе, продукты нефтеперерабатывающей и газоперерабатывающей щюмыш-ленности, пищевые продукты, корма дпя животных, просто растения и животные ткани, объекты медицины и криминалистики. Вот далеко не полный перечень объектов этой группы. Химический анализ этих объектов необходим для решения экономических, технологических, социальных и научных задач. Основной задачей аналитической химии является здесь идентификация веществ, присутствующих в анализируемой пробе в чистом виде или в смеси, и их количественное определение. [c.474]

Количественный анализ лекарственных веществ — определение массовой доли действующего вещества (или действующих веществ) в анализируемом образце лекарственного препарата. Для К. А. используют физические (см., например, Спвктрофотомвтрия) химические (см. Иодометрия, Перманганатометрия), биологические методы анализа. См. таюке Анализ. [c.152]

В предьщущем изложении в качестве объектов анализа методом газовой хроматографии рассматривались лищь жидкие материалы с применением жидкостной или газовой экстракции материала. Однако из представленных результатов легко сделать вьшод, что методы жидкостной экстракции и анализа равновесной газовой фазы должны также быть пригодными для анализа различных твердых, квазижид-ких и гетерогенных материалов. Например, количественному газохроматографическому анализу, включающему экстракцию или анализ равновесной газовой фазы, могут подвергаться пятна, выделенные из тонкослойных хроматограмм, пишевые продукты, лекарственные препараты, биологические ткани, вещества, представляющие интерес для судебной экспертизы, растения и т.д. [c.127]

Методика определения лекарственных препаратов в выделениях человека и физиологических жидкостях [182] позволяет проследить за процессом лечения. С другой стороны, анализ выделений важен при определении критической дозы лекарственных препаратов при терапии, поскольку может существовать узкая граница между терапевтическими и токсическими дозами лекарств, назначаемых пациенту. Метод ПГХ можно применить в этом случае как для контроля содержания лекарственных компонентов в физиологических жидкостях, так и в исходных лекарственных препаратах. В этом отношении представляет интерес применение метода для прямого дифференцирования и определения карденолидов в лекарственных препаратах и биологических жидкостях [193]. Особый интерес среди стероидных препаратов, провоцирующих сердечно-сосу-дистые заболевания, представляют препараты, содержащие ди-гоксин. Особенности лечения этими препаратами как раз связаны с узкими концентрационными пределами применения (от 0,8 до 1,6 нг/мл, концентрация 2,4 нг/мл является уже вредной для здоровья). Изучали возможность применения ПГХ для идентификации дигоксинов (дигитоксигенина и дигоксигенина), различающихся лишь содержанием еще одной гидроксильной группы в дигоксигенине. На пирограммах этих стероидов обнаружены пики соединений, содержащихся в тяжелой фракции продуктов пиролиза в разном количественном отношении. [c.225]

Независимо разработано несколько способов определения остатков симазина в почве. Гаст [32] в качестве индикаторов применял растения горчицы или овса, в то время как Цвип [5] установил, что растением, наиболее чувствительным к симазину, является ячмень, а Слайф [85] использовал при биоанализе сеянцы овса. Все эти методы позволяют найти остатки симазина, но не дают возможности их количественно оценить. Для этого необходимо проводить сравнительные опыты с образцами почв, содержащих известные количества триазинового гербицида. Так как степень адсорбции изменяется в зависимости от вида почвы, лучще для проверки биологического метода параллельно проводить химический анализ препарата. Для оценки устойчивости различных культур к остаткам триазина в почве биологические методы анализа играют больщую роль. [c.185]

Определение содержания морфина в опии. Проблема определения процентного содержания морфина в опии с приемлемой точностью очень важна для стандартизации медицинского опия, а также для установления цены на сырой опий и для контроля процесса извлечения опийных алкалоидов. Она представляет особый интерес в связи с попытками пресечь незаконную торговлю опием и его алкалоидами. Все это привело к появлению обширной литературы по анализу опия, начало которой было положено в 1828 г. . За истекший период были разработаны два основных метода Дитриха-Гельфенберга и Дебурдо (известковый способ) . Большая часть статей посвящена видоизменениям и усовершенствованиям этих способов однако были разработаны также и принципиально новые методы, например метод Манниха . Гриффитс и Уолли опубликовали краткий критический обзор современных методов анализа. Для обычных целей достаточны методы испытаний, описанные в фармакопеях, а также комиссией экспертов, назначенной организацией здравоохранения Лиги Наций . В списке литературы даны ссылки на работы по количественному определению морфина, опубликованные за последние двадцать лет.Эти ссылки разбиты на следующие разделы опий ч опийные галеновые препараты , маковые растения (солома и маковые головки) , препараты морфина , биологические материалы -. Эти пять разделов до некоторой степени перекрывают друг друга. Приведенные ссылки не претендуют на исчерпывающий охват всех работ, но в них включены статьи, содержащие библиографические перечни, критические обзо- [c.200]

С открытием мутагенного действия излучений многие радиобиологи перешли, к изучению единичной реакции дискретных биологических структур (генов, хромосом) на радиационное воздействие. В это же время значительно совершенствуются методы дозиметрии излучений, вводится и онизационая единица дозы — рентген. Появляется возможность количественного анализа биологического действия излучений, основанного на выяснении зависимости между наблюдаемым биологическим эффектом и дозой радиации, поглощенной изучаемой системой. Такие эксперименты проводились не только на ядерных наследственных структурах, но и на клонах клеток, вирусных частицах, препаратах ферментов. Результаты, полученные в точных количественных опытах, свидетельствовали о вероятностном характере проявления единичной реакции объекта в ответ на облучение в данной дозе радиации. Иначе говоря, при облучении однородных объектов (клетки одного клона, молекулы одного типа и т. д.) наблюдали, что при любой малой дозе радиации некоторое число объектов оказывается пораженным, а другие сохраняют исходные свойства при самой большой дозе радиации небольшая доля объектов все еще остается непораженной. Кривые доза — эффект в этих случаях имели экспоненциальный характер и надежно экстраполировались к нулевой точке. Обнаруженный эффект нельзя было объяснить ес-. тественной вариабельностью речь шла о генетически однородных клетках и вирусных частицах или молекулах одного типа. Его трактовка потребовала привлечения фундаментальных физических концепций, прежде всего представлений о вероятностном характере поглощения энергии излучений, о дискретной природе частиц, составляющих ионизирующие излучения, о физически микро-гетерогенной организации биологических структур. [c.9]

В этой главе мы рассмотрим способы характеристики с помощью ВЖХ пикомольных количеств биологически активных белков, получаемых с колонок для микроанализа, и обсудим аналитические и полупрепаративные варианты ВЖХ, используемые при очистке веществ. Мы остановимся также на примерах использования ВЖХ для сравнительного биохимического анализа небольших количеств практически неочищенного исходного материала и для получения нанограммовых количеств биологически активных белков при четырех вариантах разделения. Будут сопоставлены методы количественного определения белков при ВЖХ с помощью прямых измерений оптической плотности и другие стандартные методы. Особое внимание мы уделим вопросам чувствительности ВЖХ, специальным приемам, предназначенным для приготовления растворителей н образцов, и мерам, необходимым для сохранения биологической активности разделяемых веществ. На одном из примеров мы увидим, как высокоочищенный препарат получают при использовании нескольких последовательных этапов ВЖХ. Будут рассмотрены также некоторые неверные концепции, касающиеся перспектив применения ВЖХ для получения ряда биологически активных веществ. [c.105]

Количественный спектрофотометрический анализ. Ряд важных биологических соединений можно полуколичественно изучать с помощью спектрофотометрии в видимой и ультрафиолетовой областях, например, измеряя поглощение белков при 280 нм, а нуклеиновых кислот при 260 нм — длинах волн, соответствующих максимуму поглощения этих соединений. Экстинкция белка при 280 нм зависит от содержания в нем ароматических аминокислот — тирозина и триптофана, поэтому значения молярной экстинкции при 280 нм для всех белков различны, и для определения содержания каждого из них требуется индивидуальная калибровочная кривая. Как правило, биохимики работают со смесью белков, и тогда можно пользоваться градуировочной кривой, полученной для белка или смеси белков со средним содержанием тирозина и триптофана. Это может быть, например, сывороточный альбумин или смесь сывороточных белков. Таким образом, для контрольных измерений надо выбирать соответствующий белок. Проводя измерения при длинах волн, где примесь поглощает больше исследуемого вещества, можно с помощью соответствующих формул оценить количество примеси в образце. Так, пользуясь методом Мортона и Стубса, определяют содержание витамина А в омыленных экстрактах природных масел, а по соотношению экстинкций при 260 и 280 нм (Еш/хо) находят содержание белка в препарате нуклеиновых кислот. [c.155]