Эффективность гель-хроматографии

В конце этого раздела, посвященного исключительной эффективности гель-хроматографии как таковой, на фиг. 33 приведен пример разделения вирусных [c.157]

Эффективность гель-хроматографии исследовали на примере разделения фосфорорганических инсектицидов на сефадексе LH-20 в ацетоне, тетрагидрофуране и этаноле [43]. [c.248]

Эффективность гель-хроматографии [c.109]

Как и в других рассмотренных выше видах хроматографического разделения, на эффективность процесса в гель-хроматографии оказывает влияние размывание зоны вещества и связанное с этим увеличение ВЭТТ. Существенным отличием гель-хроматографии, однако, является то обстоятельство, что в процессе участвует весьма незначительная доля объема геля, вследствие чего продвижение [c.228]

В отличие от адсорбционной и распределительной хроматографии в гель-хроматографии применяют колонки диаметром не меньше 8—10 мм. Увеличение диаметра колонки до 50 мм вызывает увеличение эффективности колонки, а не уменьшение, как это наблюдается в адсорбционной и распределительной хроматографии. [c.233]

Центральной задачей при получении олигосахаридов почти из любого источника является выделение индивидуальных соединений из смеси моно- и олигосахаридов. Для этой цели разработано несколько методов, основанных на хроматографии . Наиболее старым из них является распределительная хроматография на целлюлозе . Для элюирования обычно используют системы растворителей, аналогичные тем, которые применяются для бумажной хроматографии сахаров (см, гл, 14), Этот метод позволяет осуществлять вполне удовлетворительное разделение, однако характеризуется малой емкостью колонок и требует довольно много времени. Более эффективна адсорбционная хроматография на смеси угля и целита (см., например, " ). С таких колонок моносахариды обычно элюируются водой, а олигосахариды элюируются в порядке возрастания степени полимеризации водно-спиртовыми смесями с увеличивающейся концентрацией спирта. В последние годы такой метод стал основным способом разделения смесей олигосахаридов. Смеси высших олигосахаридов хорошо разделяются гель-фильтрацией на сефадексе Г-25 . Однако для низших олигосахаридов (степень полимеризации 2—4) этот способ мало эффективен . [c.425]

Хроматограмма на рис. 17-21 свидетельствует об очень высокой эффективности этой хроматографии. Рассчитанное число теоретических тарелок равно около ЮООО, а полученная высота, эквивалентна теоретической тарелке,—200 мкм. Средний диаметр частиц набухшего геля равен 74 мкм таким образом, приведенная высота тарелки составляет около 2—3 диаметров частиц, и ее практически невозможна уменьшить. [c.601]

Применение иных принципов разделения чаще всего также делает анализ очень громоздким и мало эффективным. Сюда можно отнести такие методы, как молекулярная перегонка [21] или термодиффузия [1, 22, 23]. Более перспективным, очевидно, является метод разделения с помощью гель-хроматографии [И, 193], позволяющий фракционировать такие сложные смеси, как битумы, по величине молекул, входящих в их состав. [c.6]

Для отделения летучих примесей от полимеров наиболее часто используются следующие методы экстракция, растворение с последующим осаждением полимера, термическая десорбция в потоке газа-носителя и т. п. Несомненно целесообразно использовать для отделения летучих компонентов и другие эффективные, в первую очередь хроматографические, методы разделения гель-хроматографию, тонкослойную и колоночную хроматографию. В связи с большой трудоемкостью и слон ностью многостадийных методов их целесообразно использовать в тех случаях, когда более простые методы не эффективны (например, вследствие термической нестабильности полимера), или для разовых, единичных определений, когда специальная разработка простого метода не оправдана. Исключение составляют, по-видимому, только методы, в которых предварительной стадией является не процесс разделения, а разбавление анализируемого раствора полимера или растворение твердого полимера. Этот простой прием позволяет свести более сложную задачу — определение летучих компонентов в твердом полимере или [c.123]

Что касается влияния условий проведения процесса на эффективность гель-проникающей хроматографии, то здесь нет серьезных отклонений от обычной методики (см. гл. 6) рекомендуются гели с частицами малого диаметра и определенным размером пор, а также длинные колонки с маленьким внутренним диаметром и очень низкие скорости подвижной фазы. Наиболее подходящими подвижными фазами для гель-проникающей хроматографии сахаров являются вода, водные растворы хлорида натрия и различные буферные растворы. [c.68]

В отличие от гель-хроматографии полимеров при фракционировании олигомеров очень важно работать с колонкой, обладающей высокой эффективностью и хорошим разрешением, так, чтобы минимумы между отдельными пиками достигали базовой линии. Это позволяет выделять и идентифицировать отдельные олигомеры независимыми методами. Экспериментально было показано, что при элюировании олигомерных соединений влияние концевых и боковых групп проявляется сильнее, нежели при элюировании полимеров. По сравнению с высокомолекулярными соединениями в образовании усредненной конфигурации молекул олигомеров значительно более важную роль [c.298]

Отдавая должное гель-хроматографии, необходимо предостеречь читателя от ее переоценки. Следует иметь в виду, что этот метод иногда оказывается недостаточно эффективным например, разделить вещества с довольно большими различиями в молекулярном весе удается не всегда. В некоторых случаях наблюдается взаимодействие геля с разделяемыми веществами, что приводит к изменению порядка выхода веществ с колонки. [c.6]

Согласно теоретическим представлениям (см. гл. И1), при гель-хроматографии эффективность разделения не должна зависеть от концентрации [c.91]

В биохимических исследованиях используются все методы колоночной хроматографии, однако чаще — ионообменная и гель-хроматография. Обзор периодической литературы показывает, что для измерения радиоактивности обычно применяют сбор элюата по фракциям с последующим жидкостным сцинтилляционным счетом. Основная причина этого, вероятно, заключается в том, что при использовании указанных хроматографических методов, дающих невысокую эффективность разделения, собирают сравнительно большие фракции (часто 10— [c.192]

Принципы газовой хроматографии оказались приемлемыми для большинства разновидностей жидкостной хроматографии жидко-стно-адсорбционной, жидкостно-жидкостной, гель-хроматографии и ионообменной хроматографии. Анализ загрязнения воздуха ПАУ методом ГХ невозможен из-за термической нестабильности этого класса соединений. С этой точки зрения представляет интерес использование высокоскоростной ЖХ. Проверку эффективности разделения я скорости анализа проводили, вводя в хроматограф все имеющиеся ПАУ сразу, без предварительного фракционирования. Однако, следует заметить, что испытываемые смеси не содержали ни БаП, ни БкФ, разделение и определение которых затруднительно методом колоночной ЖХ (см. разд. 3.4.12). [c.171]

Вопрос. Применение ацилированных препаратов хитозана в качестве полимерного носителя для гель-хроматографии позволяет добиться высокой селективности разделения органических соединений. Например, представляется возможным эффективное разделение различных аминокилот, красителей и даже рацемических смесей органических соединений. Какими физикохимическими факторами может быть обусловлено это свойство набухших гелей ацилхитозанов [c.334]

В последние годы в связи с разработкой сорбентов особо высокой эффективности эксклюзионную хроматографию все чаще используют для разделения низкомолекулярных соединений. На рис. 2.20 показана хроматограмма образца полиэтиленгликоля (М=200), а на рис. 2.21 — хроматограмма смеси фталатов и алкилбензолов (см. также рис. 5.9). Исключительно высокая инертность поверхности полужестких гелей позволяет разделять на них высоколабильные вещества, которые не удается анализировать на других сорбентах. [c.57]

Бернс и Чилтон [163] получили патент на способ, основанный на гель-хроматографии. Декстрановый гель с размером пор 40—120 мкм использовался для заполнения колонок. Кремнезем со средней молекулярной массой 6 млн. (т. е. со средним размером частиц 20 нм) разделялся по размерам во всей области молекулярных масс. Другие авторы [164] использовали шарики из пористого стекла для заполнения колонок с целью их применения в эксклюзионной хроматографии коллоидов. Применительно к условиям разделения коллоидного кремнезема толщина двойного слоя на поверхности частиц при pH 9,5 составляла 6 нм. Поэтому эффективный диаметр частиц оказался на 12 нм больше, чем истинный, а эффективный диа- [c.475]

Все применяемые в гель-хроматографии наполнители колонок традиционно делят на мягкие, полужесткие и жесткие гели [101]. Емкость геля может быть охарактеризована отношением У /У , которое лежит в диапазоне от 0,5 для жестких гелей до 2-3 для мягких гелей. Для мягких гелей характерна, с одной стороны, высокая эффективность и емкость при низких скоростях потока, с другой — высокая степень набухаемости в водных средах и увеличение объема пор при набухании. Соответственно повышение скорости подвижной фазы вызывает деформацию мяг-Ю1Х гелей. Они сжимаются, снижается их емкость. Из коммерческих мягких гелей для гель-фильтрации чаще всего применяют декстрановые гели, названные сефадек-сами. Сефадексы — гранулированные поперечно-сшитые декстраны (полисахариды), имеющие в набухшем состоянии гелевую структуру, обладают сильными гидрофильными свойствами. Неионообменные сефадексы содержат все же небольшое количество гидроксильных групп, определяющих адсорбционную емкость сефадексов порядка [c.209]

НОВ в соответствующие ртутные аддукты. Хроматография аддуктов оказалась возможной или на кремневой кислоте [38], или на дезактивированном флорисиле [39]. Последний метод был особенно пригоден для определения тринасыщенных ацилглицери-нов. В работе [40] описано разделение насыщенных триацилглицеринов на колонке 48,8x9,5 мм, заполненной стирагелем, сшитым полистиролом. В качестве подвижной фазы использовали тетрагидрофуран со скоростью элюирования 0,4 мл/мин. Несмотря на чрезвычайную эффективность колонки, ширина пика была того же порядка, что и разница между временами удерживания триацилглицеринов, отличающихся шестью атомами углерода. На этом примере можно видеть, насколько трудно разделять триацилглицерины природных эфиров. Гель-хроматография, по-видимому, является перспективным методом для анализов смешанных триацилглицеринов [41]. [c.203]

При систематическом изучении гель-хроматографии олигомеров в качестве стандартов для калибровки колонок использовали соединения ряда олигофениленов [131]. Вследствие жесткой структуры отдельных гомологов их можно использовать при изучении свойств системы в зависимости от условий эксперимента [132]. На модельных систем.ах было показано, что для оптимизации условий разделения олигомеров необходимо подбирать гели с соответствующим распределением пор. Эффективность разделения на гомогенных гелях зависит не только от степени сшитости, но в определенной степени и от отношения объема пор к размерам молекул разделяемых соединений. Качество разделения резко падает, если эффективный объем анализируемого вещества близок к объему доступных пор геля. Для разделения смесей олигомеров в препаративных масштабах (на уровне нескольких граммов) с успехом использовали циркуляционную хроматографию [134]. Оптимальное разрешение достигалось за три цикла. По эффективности разделения этот прием не уступает лучшим аналитическим методам. Осуществив подбор оптимальных условий препаративной гель-хроматографии, на сополимере стирола с 2% дивинилбен-зола удалось осуществить полное разделение первых 15 членов гомологического ряда олигомерных стиролов (рис. 49.6), олигомеров метилметакрилата (рис. 49.7), полигликолей и нескольких детергентов. [c.299]

Для анализа продуктов реакции Дильса—Альдера с участием хлоропрена использовали высокоразрешающую гель-хроматографию [148]. Три изомерных димера хлоропрена, являющиеся примесями к полимеру, разделяли на сополимерах стирола с дивинилбензолом с низкой величиной эксклюзии. Исследование кинетики химического превращения хлоропрена в присутствии ингибиторов свободных радикалов дало несколько большую информацию, чем рассмотрение предложенного механизма реакции [149]. Аналогичные гели оказались эффективными при анализе гомологов, образующихся в результате взаимодействия перекисей диацилов с третичными ароматическими аминами, что позволило уточнить механизм образования олигомеров [150]. [c.304]

ПЫТКИ Вогана [30] и Кортис-Джонса [31] использовать этот полимер для гель-хроматографии оказались не очень успешными. При фракционировании полистирола [30] на этом хорошо набухающем геле оказалось, что он обладает низкой пористостью при фракционировании на нем низкомолекулярных соединений различного строения преобладали процессы адсорбции и распределения [31]. Тем не менее вскоре было установлено, что на содержащем 2% дивинилбензола полистироле, заполимеризованном в виде сферических гранул, удобно разделять по молекулярному весу некоторые липиды [32]. Он оказался также эффективнее многих носителей при разделении олиго-фениленов [26]. [c.43]

Ранее уже отмечалось, что применение гель-хроматографии в тонком слое до сих пор ограничивалось разделением белков в водных буферных растворах. Исключение составляют отдельные эксперименты с пептидами [86, 87] и мукополисахаридами 93], а также попытки предварительной очистки рибонуклеоти-дов [94]. Однако есть все основания считать, что наряду с разделением на хроматографических колонках гель-хроматография в тонком слое найдет широкое применение в качестве микрометода и в этих областях. Количества образца, требующиеся для тонкослойной хроматографии, сравнительно малы, оборудование несложно. Метод позволяет за сравнительно короткий срок провести одновременно большое число опытов. Поэтому гель-хроматография в тонком слое особенно эффективна для определения молекулярного веса белков (см. стр. 153). Несколько меньшую (по сравнению с анализом на колонках) точность этого метода можно компенсировать статистической обра- [c.90]

Наконец, следует отметить, что эффективность различных колонок с гелем можно оценить, сравнивая значения ВЭТТ- для одного и того же контрольного вещества. Зная ВЭТТ, можно по Флодину [13] рассчитать размеры колонки, необходимой для решения конкретной задачи (когда Kav известны). Т. Лорент и Э. Лорент [14] построили электрическую модель (аналоговую машину) процесса гель-хроматографии, с помощью которой можно воспроизвести кривую элюирования, если известны значения Kav и время достижения равновесия между стационарной и подвижной фазами. Таким образом можно изучать влияние изменения скорости элюента на форму (ширину) кривой [c.113]

Два интересных эксперимента по разделению на сефадексе G-25 заимствованы из области препаративной органической химии многие ароматические сульфокислоты [178], а также смесь таутомеров фе нилпировиноградной кислоты [179] удается эффективно разделить благодаря тому, что компоненты этих смесей имеют различное сродство к гелю. (О разделении низкомолекулярных соединений различных классов с помощью гель-хроматографии см. литературу, приложение VI.) Более того, пожалуй, не будет ошибкой считать, что сродство к фазе геля играло [c.192]

Сефадекс 0-25 весьма эффективно применяется в клинической химии для выделения и очистки конъюгированных эстрогенов из мочи беременных женщин. После того как Белинг [126] впервые применил гель-хроматографию для этих целей, по этому вопросу появилось большое число публикаций, которые приводятся в гл. V. Например, сумму эстрогенов из 10 мл мочи можно получить в очищенном состоянии в объеме 3 мл, если образец элюировать дистиллированной водой с колонки, наполненной сефадексом (1X50 см). В принципе этот метод основан на том, что стероидные гормоны, которые ассоциированы с кислыми олигосахаридами, сначала сильно задерживаются на колонке благодаря сродству последних к гелю. Тем самым они отделяются не только от высокомолекулярных соединений, присутствующих в моче, но и от солей, попадая в зону чистой дистиллированной воды. Но здесь благодаря слабому отрицательному заряду сефадекса сказывается ионная эксклю-зия конъюгированные эстрогены мигрируют теперь особенно быстро и вновь догоняют зону солей. Это явление повторяется постоянно, причем зона обостряется. Наконец, гормоны покидают колонку в виде двух чрезвычайно узких фракций. [c.193]

В последние годы с помощью гель-хроматографии было очищено или выделено в чистом состоянии большое число ферментов. Конечно, этот новый метод ни в коей мере не может заменить традиционных методов очистки белков (например, осаждение растворителями или сульфатом аммония, а также ионообменную хроматографию). Однако гель-хроматография эффективно дополняет эти методы. Гели применяются главным образом для следующих целей I) удаление яизкомолекулярных примесей (гель-фильтрация, см. гл. IV) 2) отделение чужеродных белков на гелях соответствующей пористости (гель-хроматография) 3) определение молекулярных весов (см. табл. 26). В конце главы приведены работы (см. литературу, приложения I—III), в которых гель-хроматография явилась важным этапом при выделении фосфоэстераз и ряда других эстераз, а также дегидрогеназ, трансфераз и других ферментов. [c.212]

Полимеры сетчатой структуры в набухшем состоянии можно рассматривать как своеобразный набор сит с диаметром каналов (микропор) от 3—5 А до 45—50 А [1—3]. Проницаемость набухшего геля для молекул различного размера можно регулировать, изменяя строение полимерной сетки и условия ее набухания. Продвижение в фазе геля находящихся в растворе молекул, для которых его микропоры проницаемы, носит преимущественно диффузионный характер, причем скорость диффузии обратно пропорциональна молекулярному весу растворенного вещества. Эта особенность набухших полимерных сеток использована в новом и весьма эффективном способе разделения сложных смесей (белков, полимерго-мологов, микровирусов, энзимов и других трудно разделяемых смесей), получившем название гель-хроматография [4-7]. [c.489]

В разд. 6.3.4 указывалось, что при неполном разделении двух соединений посредством гель-хроматографии можно улучшить степень разделения, увеличив длину колонки. Однако работа с длинными колонками связана с рядом неудобств их сложно заполнять и элюирование приходится вести с очень малыми скоростями, особенно если колонка заполнена мягкими гелями. Однако последовательно соединяя две и большее число колонок, можно добиться увеличения эффективной длины колонки и тем самым лучшего разрешения. С этой целью выбирают несколько одинаковых плунжерных колонок, каждую из которых заполняют гелем независимо от других. После заполнения колонок гелем и фиксации заполняющих слоев плунжерами вывод из одной колонки соединяют с вводом в другук возможно более короткой и тонкой трубкой. Хроматографирование на такой составной колонке ведут восходящим методом (разд. 6.3.6). В такой составной колонке допустимы большие скорости потока, чем в одной колонке, высота которой равна сумме высот соединенных колонок. [c.377]

Ф ракционирование смесей представляет собой более сложный пример применения гель-хроматографии, особенно при небольших различиях в молекулярных массах. Для эффективного разделения необходимо подобрать такой гель, чтобы все разделяемые соединения попали в интервал фракционирования. [c.383]

Другой областью применения гель-хроматографии в биохимии является отделение белков от низкомолекулярных мешающих анализу примесей, например аминокислот, сахаров, стероидов или реагентов, используемых для химической модификации белка. Методом гель-хроматографии чаще всего удаляют реагенты, предназначенные для введения в белок радиоактивной и флуоресцентной меток. Гель-хроматография позволяет также быстрее и эффективнее, чем диализ, осуществить обессолива-ние или смену буфера, требуемые в определенных схемах фракционирования, а также удаление кофакторов и ингибиторов, используемых при изучении кинетики ферментативных реакций. Кроме того, с помощью этого метода можно изучать связывание белков с низкомолекулярными соединениями, например лекарственными веществами, ионами металлов и красителями [10]. Коэффициент распределения Ка некоего стандартного белка с из- [c.106]

Гель-хроматография на сефадексе LH-20 в системе хлороформ— метанол — гексан оказалась особенно эффективным методом выделения каротиноидов из их смеси со стероидами [365, 366]. Для отделения каротинов от растительных белков и от других пигментов можно использовать ионообменную хроматографию на DEAE-целлюлозе в 0,5 М растворе хлорида натрия [367]. В работе [368] описан модифицированный вариант обычного метода анализа каротинов и ксантофиллов, предусматривающий периодическое обновление смеси силикагеля 60 и хайфлосуперцела [368]. Время разделения на новой колонке составляет 30 мин, причем ее можно использовать четырежды. [c.249]

Смолу амберлит ХАВ-2, не содержащую ионогенных групп, широко используют для выделения стероидных гормонов и их конъюгатов [221]. Липофильная гель-хроматография позволяет провести эффективное фракционирование конъюгатов нейтральных стероидов перед их анализом с помощью хроматомасс-спектрометрии [9, 222, 223]. Связь между структурой стероидов и их поведением в условиях гель-хроматографии изучена Воу-зом и др. [224]. Описано применение сефадекса ЬН-20 [225, 226] и липидекса 5000 [227, 228] для анализа стероидных гормонов. [c.308]