Хроматографические методы расщепления

Важным преимуществом хроматографических методов расщепления рацематов (по сравнению с ферментативными и кристаллизационными) является принципиальная возможность [2] выделения обоих антиподов с количественным выходом и 100%-ной оптической чистотой, даже в том случае, когда оптическая чистота расщепляющего диссимметрического сорбента ниже 100%. [c.47]

Многие современные исследования направлены на развитие хроматографических методов расщепления. Для разделения диастереомеров можно, конечно, использовать ахиральные адсорбенты и таким образом получить тот же результат, что и при кристаллизации. [c.12]

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ РАСЩЕПЛЕНИЯ [c.61]

Идентификация индивидуальных компонентов дубильных веществ основана на хроматографических методах (хроматография на бумаге и тонкослойная), спектральных исследованиях, качественных реакциях и изучении продуктов расщепления. [c.117]

Разработан комплексный спектрально-хроматографический метод анализа высокомолекулярных сукцинимидных присадок, включающий ряд последовательных стадий отделение масла от присадки (экстракция метил-этилкетоном или изопропиловым спиртом), изучение инфракрасного спектра чистой присадки и идентификация углеводородных и функциональных групп, расщепление макромолекул присадки [c.44]

Со времени первого расщепления рацемического соединения на энантиомеры, осуществленного Пастером, и до момента создания современных скоростных хроматографических методов наши знания в области стереохимии неизмеримо углубились (рис. 1.1). Тем не менее большинство современных методов разделения оптических изомеров базируется на эмпирических результатах. [c.11]

Описанные экспериментальные методы пассивного переноса могут быть эффективно использованы для оценки КРЭ и коэффициента разделения а при хроматографическом расщеплении на оптические изомеры, особенно в случае, когда Од и 0 оба малы. Более того, оптически избирательный перенос, основанный на методе хирального комплексообразования, создает важный путь для биофизических исследований и может служить моделью переноса веществ в биологических системах. Кроме того, он может найти применение в медицине, например для создания искусственной мембраны. Помимо этого метод расщепления на оптические изомеры, разработанный Крамом, в ближайшем будущем будет усовершенствован для пра тического применения как важный инструмент для расщепления различных энантиомеров, включая аминокислоты [71]. Крам и его коллеги продолжают работы по расщеплению на оптические изомеры и оптически избирательному переносу. [c.304]

В настоящее время разделение рацематов а-аминокислот осуществляют в промышленном масштабе. Для этого широко используют хроматографическое разделение на носителях с хи-ральными группами с помощью закрепленных (обычно говорят иммобилизованных) на носителях ферментов, а также методы селективной кристаллизации. Помимо этого достаточно часто применяют химические методы расщепления рацематов (см. разд. 8.1.2). [c.453]

Для установления структуры полисахаридов ГМЦ применяются в комплексе химические, биохимические, хроматографические и спектроскопические методы. Исторически первыми среди них получили развитие химические методы деструкции (кислотный гидролиз, окисление моносахаридов с расщеплением гликольных группировок) или модификации полисахаридов с последующей деградацией (метилирование). Для определения продуктов деградации широко используются хроматографические методы (бумажная, тонкослойная, газожидкостная хроматография) большую роль в последние годы играет масс-спектроскопия, которая применяется не только для идентификации производных, полученных при анализе полисахаридов методом метилирования, но и для анализа олигосахаридов непосредственно после нх перевода в летучие производные. И, наконец, в арсенал современных методов прочно вошла спектроскопия С-ЯМР — недеструктивный метод анализа структуры, позволяющий решить задачу установления строения полисахарида с минимальным использованием традиционных химических методов либо без них. Рассмотрим кратко характеристику этих методов. [c.58]

Для расщепления рацематов щ)именяются также хроматографические методы. Обычный способ разделения состоит в пропускании раствора рацемического соединения через оптически активный адсорбент, в результате один из энантиомеров адсорбируется более эффективно, чем другой. Этот метод приводит к частичному или даже полному разделению. [c.445]

Таковы основные методы расщепления. Другие методы — хроматографическое расщепление, расщепление кристаллизацией из оптически активных растворителей, асимметрические превращения или асимметрические синтезы (в отсутствие ферментов) и т. п. — представляют только теоретический интерес. [c.32]

Недавно был описан новый хроматографический способ расщепления рацематов — лигандная хроматография [1], базирующаяся на стереоселективных эффектах в процессах комплексообразоваиия. Относительно высокая степень стереоселективности этих процессов находит свое отражение в эффективности деления антиподов лигандной хроматографией на диссимметрических комплексообразующих сорбентах. Этот метод имеет несомненное препаративное значение. [c.46]

Химический метод идентификации остатков, несущих а-карбоксильные группы, основан на реакции белка (или пептида) с гидразином в безводной среде при 100°С. При расщеплении пептидной связи с помощью гидразинолиза в гидразиды аминокислот превращаются все аминокислотные остатки, кроме СООН-концевого, который остается в виде свободной аминокислоты и может быть выделен и идентифицирован с помощью хроматографических методов [c.177]

Строение азокрасителей всегда определяют путем их восстановительного расщепления до аминов (например, с помошью гидросульфита натрия или хлористого олова и соляной кислоты). Образующуюся при этом смесь мопоаминов, диаминов и оксиаминов тщательно разделяют на компоненты для выяснения строения последних в настоящее время с успехом применяют спектроскопические и хроматографические методы. [c.596]

При исследовании структуры белков используются эти и другие методы расщепления. Предложен ряд технических приемов для идентификации конечных аминокислот. Один из них широко применяется для идентификации аминокислот, содержащих концевую аминогруппу. Согласно этому методу, проводят реакцию полипептида с 2,4-динитрофторбензолом, при этом свободная аминогруппа превращается в 2,4-динитрофенил-производное (разд. 4.2.2). Последовательный гидролиз полипептидов дает обычные аминокислоты, за исключением конечной N-apилaмииoки лoты, которую можно отделить и идентифицировать хроматографически. [c.297]

Эти примеси могут возникнуть в результате хроматографической очистки. Свободную кислоту можно выделить из концентрированного водного раствора ее хлористоводородной соли выдерживанием в течение 24 час. в смеси с рассчитанным количеством пиридина, растворенного в 957о-ном спирте. Растворимость -аспарагиновой кислоты составляет 0,267 г в 100 мл воды при температуре 0,2°. Аспарагиновая кислота плавится при 225—248° (разл.). При нагревании в запаянном капилляре на предварительно нагретой бане т. пл. 278—280° (разл.). Солянокислая соль аспарагиновой кислоты разлагается при 180—185° ее N-бензоильное производное плавится при 160—162° [1]. Методы расщепления описаны в работах Эренсверда [2] и Мосбаха [3]. [c.274]

Хроматографический метод также имеет высокую чувствительность, но он пригоден только для определения двойных связей винильного типа, стоящих у атома кремния. Он основан на расщеплении химических связей в полимере реагентом, спещ1фическим для связи 81-С. При этом винильная группа превращается в этилен и определяется затем методом газовой хроматографии. [c.41]

Частичный гидролиз полисахаридов позволяет выделить фрагменты с промежуточной молекулярной массой и разделить их с помощью таких хроматографических методов, как гель-фильтрация, ионообменная или распределительная хроматография. Строение этих более простых олигосахаридов установить легче, чем строение исходного полисахарида. Если все гликозидные связи в полисахариде гидролизуются с одной и той же скоростью (как, например, в линейных гомополисахаридах), то, например, в случае-амилозы продукт частичного гидролиза будет состоять из глюко.чы и ряда олигосахаридов — мальтозы, мальтотриозы и мальтотетра-озы. В гетерополисахаридах присутствуют гликозидные связи разных типов, и скорости гидролиза их различны. Фуранозиды обычно гидролизуются быстрее пиранозидов в 10—1000 раз, что приводит например, к удалению остатков арабинофуранозы, связанных с остатками ксилопиранозы в арабиноксиланах. Условия гидролиза влияют также на специфичность расщепления полисахарида. (1- 6)-Связи более устойчивы к действию минеральных кислот чем (1- 4)-связи, однако если гидролиз проводился в уксусном ангидриде, содержащем около 5 % серной кислоты, менее устойчивы (1-)-б)-связи. Параллельное использование этих двух методов гидролиза, приводящих к образованию фрагментов разного состава, позволит лучше воспроизвести строение полисахарида. Концентрация углеводов в реакционной смеси должна быть ниже [c.219]

Блазиус с сотр. [ 5ft] описал расщепление на оптические изомеры аминокислот хроматографическим методом. Колонка заполнялась порошком полимера, полученного при поликонденсации дибензо-18-краун-6 с формальдеги- [c.300]

Расщепление полипептидной цепи на фрагменты проводят обычно при помощи протеолитических ферментов, таких, как трипсин, химотрипсин или пепсин. Эти ферменты действуют на различные участки полипептидной цепи, так как имеют повышенное сродство к различным аминокислотным остаткам. Необходимо учитывать также соседние аминокислотные остатки, т. е. пространственное окружение атакуемой пептидной связи. Оказалось, что трипсин гидролизует только те пептидные связи, в образовании которых участвует карбоксильная группа лизина или аргинина, а химотрипсин гидролизует связи по фенилаланину, триптофану и тирозину Обычно протеолитические ферменты, гидролизующие полипептидные цепи, предварительно иммобилизуют на нерастворимых матрицах для более легкого отделения их от продуктов гидролиза. Далее определяют аминокислотные последовательности каждого полипептидного фрагмента. Для этого чаще всего используют метод Эдмана, заключающийся в анализе полипептида только с Ж-конца. Концевая аминокислота при взаимодействии с фенилизотиоцианатом в щелочной среде образует стойкое соединение, которое можно отщепить от полипептида без его деградации. Фенилтиогидантоиновое (ФТГ) производное аминокислоты идентифицируется хроматографическим методом. После идентификации концевого Ж-амино-кислотного остатка метка вводится в следующий аминокислотный остаток, [c.41]

Из описанных в данном разделе методов химических превращений наиболее полную информацию о составе продуктов оксиэтилирования дает метод р 1сщепления реактивом уксусный ангидрид — п-толуолсульфокислота в сочетании с анализом полученных продуктов расщепления методом газо-жидкостной хроматографии. По сравнению с методом расщепления фосфорной кислотой (см. разд. II.2.1.5.2.) этот метод характеризуется более направленным расщеплением (только по месту эфирных связей) и образованием незначительного количества побочных продуктов. Кроме того, продукты расщепления (за исключением алкилфенолов) образуются в ацетатной форме, что улучшает возможности их газо-жидкостного хроматографического разделения. [c.246]

В некоторых исследованиях используют одновременно два метода проведения эксперимента. В качестве примера можно привести работы Панкова с сотр. [И], посвященные идентификации высших пиридиновых оснований в продуктах промышленного синтеза ряда пи-ридинов. Гидрирование двойных связей в боковых углеводородных радикалах проводят в растворителе этаноле при комнатной температуре в атмосфере водорода на палладиевом (2%) катализаторе, осажденном на активном угле. О наличии и числе двойных связей судят на основании изменения времени удерживания компонентов после гидрирования. Для определения углеродного скелета анализируемые компоненты после разделения на хроматографической колонке и детектирования направляют в помещенный в печь при 250 °С реактор, заполненный катализатором (5% платины на пористом стекле). В реакторе происходит гидрирование пиридинового кольца и расщепление его до соответствующего углеводорода. Продукты гидрогенолиза собирают в ловушку с этанолом и анализируют на капиллярной колонке со скваланом. Наряду с основным продуктом при гидрогенолизе образуются также и побочные продукты, которые дают дополнительную информацию о структуре анализируемого вещества. Идентификацию продуктов гидрогенолиза проводят на основании опубликованных в литературе данных по удерживанию. Следует отметить, что в работах Панкова с сотр. наряду с реакционно-хроматографическим методом используют методы УФ-спектроскопии и ПМР. [c.122]

Важным ключом к пониманию механизма фиксации СО2 у фотосинтезирующих организмов послужили работы Мелвила Кальвина и его сотрудников в Калифорнийском университете в Беркли, вьшолненные в конце 40-х годов. Исследователи освещали суспензию зеленых водорослей в течение всего нескольких секунд в присутствии радиоактивной двуокиси углерода ( СОг), а затем быстро убивали клетки, экстрагировали их и хроматографическими методами определяли, в каких метаболитах радиоактивный углерод появлялся раньше всего. Первым соединением, включившим Метку, оказался 3-фосфоглицерат, один из промежуточных продуктов гликолиза (разд. 15.76). Расщепление этого соединения показало, что радиоактивный углерод сосредоточен главным образом в карбоксильной группе. Это бьшо очень важным открытием, потому что в животных тканях в присутствии радиоактивной СО2 не наблюдается быстрого включения метки в углерод карбоксильной группы. Полученные результаты, следовательно, давали все основания считать, что 3-фосфоглицерат является одним из первых промежуточных продуктов фотосинтеза. В пользу этого говорил и тот факт, что 3-фосфоглицерат быстро превращается в глюкозу в растительных экстрактах. [c.701]

Чрезвычайно интересной является возможность выделить и изучить фрагмент, т. е. часть молекулы фермента, сравнительно небольшую, но включающую активный центр, точнее — группировку, выполняющую каталитический акт. Большие трудности в этой работе возникают потому, что при расщеплении (гидролизе) молекулы фермента образуется не однородное вещество, а очень сложная смесь разнообразных пептидов. При этом активностью обладают не все, а лишь немногие. Их трудно выделить и не так просто расшифровать их структуру. Однако современная химия белка располагает исключительно тонкими (главным образом, хроматографическими) методами разделения пептидов. Эти методы очень чувствительны и при их помощи можно отобрать из гидролизата практически любые структуры. Р1меются химические способы и для выявления всех деталей состава активных осколков белка. Поэтому можно ожидать, что этим путем будут получены важные сведения о природе активных центров ферментов. [c.328]

При гидролизе крахмала слабой кислотой и гидролитическими ферментами образуются большие количества соответственно глюкозы и мальтозы. Это указывает на то, что крахмал представляет собой полимер глюкозы, что и было подтверждено результатами элементарного анализа, согласно которым структурная формула крахмала следующая СвНюОд. О сложности структуры крахмала говорит обнаружение Мейером и сотр. [119] в крахмале кукурузы двух фракций — амилозы и амилопектина. Мейер и сотр. доказали присутствие в крахмале этих двух химически, физически и энзимологически различающихся между собой молекул. С развитием таких хроматографических методов, как распределительная хроматография на бумаге, а также адсорбционная и ионообменная хроматография, появилась возможность фракционировать продукты гидролиза и расщепления крахмала и других полисахаридов [29, 143, 172]. Особенно полезными [c.140]

Проводить в очень мягких,условиях или использовать индивидуальный 1,3,5- sHio,. а не смесь изомеров [157, 318, 324, 341]. Разделение соединений I и II — трудная задача, которая может быть решена неоднократным применением хроматографического метода. Соединение II менее устойчиво, чем I оно легко окисляется на воздухе и превращается в I при нагревании с Ре (СО) 5 [318]. Изучение реакции расщепления, а также спектроскопическое исследование показали, что соединение II представляет собой трикарбонилциклооктатриен-1,3, 5-железо. Гидрирование в автоклаве в присутствии никеля Ренея приводит к образованию индивидуального циклооктана, тогда как термическое разложение приводит преимущественно к образованию циклоокта-триена-1,3,5 [157]. ЯМР-спектры содержат четыре группы резонансных сигналов с отношением интенсивностей 4(Hi,2,4,5) 1 (Не) 1 (На) 4(H7,s) обозначения даны в соответствии с рис. 73 [157, 324]. Существенно то обстоятельство, что химические сдвиги протонов свободной двойной связи слегка отличаются это показывает, что свободные двойные связи расположены несимметрично в координированном цикле. ИК-спектры соединения II содержат полосу поглощения при 1640 см [157, 318, 324]. Опыты по гидрированию пока не дали однознач- [c.156]

Огромные успехи, достигнутые в области хроматографического расщепления рацематов в самые последние годы, позволяют (Надеяться, чтО хроматография в ближайшее время станет одним из самых эффективных методов расщепления рацематов как в аналитическом, так и в препа-ративном масштабах. [c.80]

Биохимики разработали некоторые микрохимические методы анализа этих простых продуктов периодатного окисления. Они особенно ценны при использовании вместе с хроматографическими методами разделения природных полимеров, а также для расщепления веществ, которые синтезированы in vivo пз соединений, меченных С. Этим путем был выяснен механизм фотосинтеза углеводов. Кроме того, йодную кислоту можно использовать для исследования микроскопической структуры клеточной ткани. Например, в тонком срезе дерева можно разрушить целлюлозу, в то время как места, занимаемые лигнином, останутся нетронутыми. [c.94]

Определение чистоты красителей и разделение их смесей тесно связано с историей хроматографии и развитием ее техники. Впервые БХ была использована в пищевой, фармацевтической и косметической промышленности для контроля чистоты применявшихся нетоксичных красителей. В судебной химии хроматографический анализ стал важным средством идентификации чернил подписей и печатей. Хроматографические методы тщательно разработаны практически для всех групп текстильных красителей, для определения их чистоты, идентификации различных торговых марок и составов смесовых красителей. Имеются также методы идентификации красителей, извлеченных с текстильных волокон. БХ используется для изучения некоторых свойств красителей (субстантивность, эгализация, реакционная способность активных красителей и т. д.) и их деградации или изменений в ходе производства (гидролиз, восстановительное расщепление, термическая деструкция, стереоизомеризация) или после нанесения на тек-стильный субстрат (влияние света, дымов, окончательной отделки текстильного материала). В сочетании со спектроскопическими и другими физико-химическими методами хроматография [c.69]

Поскольку вследствие простоты работы за краткое время может быть получено большое количество данных, для их регистрации требуется применение безошибочной системы. Так, в результате восстановительного расщепления азокрасителей можно ожидать образования множества различных первичных ароматических аминов. Поэтому высокоэффективные хроматографические методы их разделения должны сочетаться с надежной регистрацией их хроматографического поведения (значение окраска). Следует широко использовать таблицы, специальные перфокарты, атласы и любые другие удобные системы. [c.296]

Хотя процесс деструкции красителей сам по себе очень прост и малотрудоемок, он требует высококачественной микропрепара-тивной и аналитической работы вследствие высокой чувствительности хроматографических методов. Поскольку продукты расщепления примесей могут явиться причиной получения искаженной информации, Б первую очередь, следует убедиться в чистоте анализируемого образца. Кроме того, должны быть проведены все необходимые холостые опыты. Многие из часто используемых реакций, например восстановление азокрасителей хлоридом олова (II), цинком и уксусной кислотой, или цинком и водным аммиаком, протекающих достаточно быстро при комнатной или слегка повышенной температуре, можно проводить в пробирках, а реакционную смесь непосредственно наносить на хроматограмму. Если реакция требует более или менее продолжительного кипячения, следует использовать небольшие колбочки, снабженные обратными холодильниками. В случаях, когда реакция должна проводиться в большом объеме вследствие плохой растворимости красителя, или если реакционная смесь содержит компоненты, чрезмерно усложняющие хроматограмму, нужные продукты желательно экстрагировать (после доведения pH до необходимого значения) небольшим объемом летучего растворителя. [c.296]

В качестве примера интересного применения этого метода можно привести хроматографическое расщепление рацемических комплексов ароматических альдегидов с трикарбонилхромом в виде ди-астереомерных производных, полученных из хирального семикарбази-да [ 6]. Однако начиная с 70-х годов очень много усилий было направлено на развитие хроматографических методов с использованием хиральных неподвижных фаз. Эти методы описаны в гл. 5 и 6. [c.12]

Вопрос о разрушении ФОС в организме был изучен Мазуром в 1946 г. [43. Он обнаружил, что фермент, названный им ДФФ-азой , находится преимущественно в печени. Эта и подобные ей системы были подробно изучены Моунтером и Аугустинссоном. Более широкое использование новых ФОС, которые могут давать различные продукты распада, внесло дополнительные сложности в эту область. Эту проблему можно было решать только с помощью хроматографических методов. Так, группа Меткафа в Риверсайде (Калифорния) успешно применила для этой цели хроматографию на бумаге. Возглавляемая Касида лаборатория в Медисоне (Висконсин) широко использует в настоящее время для количественного анализа ФОС хроматографию на колонках. Можно надеяться, что эти методы помогут нам установить, в какой мере изменения чувствительности к ФОС могут быть связаны с расщеплением или активацией этих соединений в организме. [c.17]

Расщепление через днастереомеры — практически наиболее важный путь получения оптически активных веществ в определенных случаях с ним может конкурировать биохимический метод, а в последнее время — асимметрический синтез. Суть в том, что рацемат действием оптически активного вещества (асимметрического реагента К ) переводят в пару диастереомеров. Диастереомеры, как уже неоднократно подчеркивалось, отличаются по физическим свойствам друг от Д1зуга, их можно более или менее легко разделить. В принципе можно было бы при этом воспользоваться разными физическими методами разделения, но на практике обычно применяют кристаллизацию, т. е. используют различие в растворимости. В последнее время все чаще применяют также хроматографические методы. [c.50]

Первые наблюдения относительно того, что адсорбционные процессы могут послужить для расщепления рацематов имеются еще в работах Л. Пастера. Затем уже в нашем веке проводили отдельные опыты по адсорбционному расщеплению рацематов на природных оптически активных адсорбентах — фиброине шелка, крахмале. Описано [57] успешное расщепление азокрасителя из ле-аминоминдальной кислоты и Р-нафтола на крахмале. Однако гораздо чаще применяют синтетические хиральные адсорбенты в трех основных вариантах хроматографии — жидкостной, тонкослойной, газожидкостной. В настоящее время хроматографические методы стали важным дополнением к трем классическим способам Пастера (см. обзор [58]). [c.61]

Хроматограммы проявляют в системе бутиловый спирт — пропионовая кислота — вода (2 1 1,4) в одном направлении и в системе фенол, насыщенный водой, в другом направлении. Другие методы одно- и двухмерного хроматографического разделения органических кислот описаны Лаггом [2]. Расщепление янтарной кислоты описано Вудом [3], а также Бенсоном и Фаре-сом (см. синтез С -этилендиамина). [c.126]