Конкурентные чувствительность

Механизм устойчивости ВКО к интерферону оставался неустановленным, пока не была обнаружена открытая рамка считывания K3L, кодирующая белок мол. массой 10,5 кДа. Этот белок содержит аминокислотную последовательность, гомологичную N-концевой части эукариотического фактора инициации elF-2a мол. массой 36,1 кДа. N-концевые области обоих белков содержат 87 практически идентичных аминокислотных остатков, причем в положении 51 в обоих случаях находится серин, который в elF-2a фосфорилируется активируемой интерфероном Р1-киназой, что приводит к ингибированию синтеза белка в обработанных интерфероном клетках. КЗЬ-белок действует как конкурентный ингибитор фосфорилирования elF-2a, обеспечивая устойчивость ВКО к интерферону, и если из генома ВКО удалить ген K3L или его часть, то вирус станет чувствительным к интерферону. С помощью ПЦР-мутагенеза гена K3L, находящегося в составе плазмиды, и последующей гомологичной рекомбинации между ДНК ВКО и плазмидой с целью замены КЗЕ-последо-вательности дикого типа модифицированным вариантом был сконструирован мутантный ВКО K3L . Этот штамм оказался в 10-15 раз более чувствительным к интерферону, чем штамм дикого типа (рис. 11.11). Эта работа является важным этапом на пути создания более безопасных ВКО-векторов. Последовательности, сходные с K3L, могут содержать и другие устойчивые к интерферону вирусы, что позволит с помощью де- [c.241]

Белки — переносчики всех типов, напоминают связанные с мембранами ферменты, а процесс облегченной диффузии — ферментативную реакцию по ряду свойств 1) транспортные белки обладают высокой специфичностью и имеют участки (сайты) связывания для транспортируемой молекулы (по аналогии — субстрата) 2) когда все участки связывания заняты (т. е. белок насыщен), скорость транспорта достигает максимального значения, обозначаемого (рис. 22.7) 3) белок-переносчик имеет характерную для него константу связывания Ky , равную концентрации транспортируемого вещества, при которой скорость транспорта составляет половину ее максимальной величины (аналогично для системы фермент—субстрат), транспортные белки чувствительны к изменению значения pH среды 4) они ингибируются конкурентными или неконкурентными ингибиторами. Однако в отличие от ферментной реакции молекула транспортируемого вещества не претерпевает ковалентного превращения при взаимодействии с транспортным белком (рис. 22.7), [c.310]

Необходимо, однако, помнить, что галогенпиридины и их Л -оксиды могут реагировать с сильными основаниями совсем не через стадию дегидропиридина, а по Л -механизму (см. разд. 16.1.3.2, с. 36). Во многих случаях АЕ- и Л-ргакции конкурентны, поэтому соотношение изомерных продуктов реакции не обязательно отражает чувствительность дегидропиридина к атаке с той или иной стороны. Сведения о конкурентных АЕ- и /4-процессах собраны Кауфманом и сотр. [137, 177] некоторые из них приведены в табл. 16.1.5. [c.72]

Рассмотрение процесса взаимодействия двух лигандов с одним типом центров связывания показывает, что в условиях, когда концентрация лигандов соизмерима или превышает концентрацию центров связывания, комплексообразование каждого лиганда зависит от наличия и концентрации другого лиганда в системе (уравнения (10.113), (10.114)). Этот факт положен в основу одного из самых чувствительных из имеющихся в настоящее время методов анализа — конкурентного. [c.258]

Несмотря на то что конкурентные методы, представленные в табл. 32, основаны на использовании различных типов центров связывания, теоретическое их описание близко и в самом простейшем случае основано на схеме (10.1) — (10.2). Ключевыми характеристиками любого метода анализа, в том числе и конкурентного, являются чувствительность и специфичность. Остановимся подробно на том, какие факторы определяют эти характеристики для конкурентных методов анализа. При этом для простоты будем полагать, что процесс конкурентного связывания меченого и це-меченого лигандов протекает по схеме (10.1) —(10.2). [c.259]

Чувствительность методов конкурентного анализа [c.260]

Рис. 122. Влияние соотношения констант ассоциации меченого и определяемого лигандов на относительную чувствительность конкурентного метода анализа —анализ проводится в оптимальных условиях для Ко 2 — анализ про-

ДЬв)о — чувствительность конкурентных методов анализа [c.340]

Чувствительность методов конкурентного анализа. . Специфичность и кросс-реактивность при анализе. . . [c.344]

Кроме того, Ыа+К -АТФаза в жабрах, приспособившихся к соленой воде, должна сохранять достаточно высокое сродство к К в присутствии высоких концентраций На , так как противоион (К" ) взаимодействует с АТФазой именно в таких условиях (морская вода). Наружный Na понижает кажущееся сродство к K чем, по-видимому, и объясняется, что изменение наружной концентрации К ведет к изменению скорости откачивания Ыа . В таких условиях отбор благоприятствовал выработке АТФазы с высоким сродством к К " — менее чувствительной к конкурентному торможению ионами Ыа+ эта особенность фермента еще не была подвергнута систематическому исследованию. [c.156]

В результате нарушения межвидовых конкурентных взаимоотношений уменьшается количество чувствительных к загрязнителям компонентов растительного сообщества, что обычно сопровождается улучшением роста остающихся устойчивых видов (при условии не слишком сильного стрессового воздействия на них загрязняющих веществ). В этом случае общий урожай сельскохоз Йст- [c.104]

Эти реакции значительно менее чувствительны к самоотравлению за счет отложений кокса, поскольку, как известно, вода, всегда присутствующая в реакционной смеси при этих процессах, уменьшает образование на катализаторах полимерных отложений непредельного типа. Действие воды имеет, по-видимому, физический (конкурентная адсорбция) и механический (вымывание кокса) характер. [c.99]

В случае фермента химотрипсина в качестве конкурентных ингибиторов часто выступают оптические антиподы асимметрических субстратов. Разница между оптическими изомерами подразумевает взаимодействие между ферментом и субстратом в трех точках, как это изображено схематически на рис. 123, на котором группы Р и р субстрата присоединены к поверхности молекулы фермента группами А и В, а па чувствительную связь К воздействует группа С. В случае оптического антипода субстрата взаимодействующие группы Р и Q точно так же могут быть соединены с группами А и В, однако группа В теперь слишком далеко удалена от воздействующей на нее функциональной группы С. Согласно этой модели, можно было ожидать, что константы диссоциации комплексов фермент-субстрат и фермент-ингибитор почти одинаковы. Поскольку экспериментально доказано, что константы диссоциации многих комплексов фермент-ингибитор соответствуют значениям субстрата, в этом случае можно [c.326]

Вредоносность сорняков определяется не только их обилием и составом, но и чувствительностью к ним культурных растений в зависимости от фазы роста и развития. Фазы наибольшей чувствительности к наличию сорняков называют критическими фазами роста культур по отношению к сорнякам и определяются они конкурентными взаимоотношениями, которые изменяются на протяжении вегетации. Исследования показывают, что у большинства культур критические периоды взаимоотношений приурочены к ранним периодам их роста и развития. И чем раньше проводятся мероприятия по ликвидации сорняков, тем они эффективнее (табл. 4). Так, в посевах озимой пшеницы при совместной вегетации 15 дней урожайность снизилась на 0,22 т с 1 га, 30 дней — 0,26 73 —0,54 94 — 0,85 и 110 дней — на 1,20 т/га. Возрастали потери с увеличением степени засоренности при 10 шт на 1 м урожайность снизилась на 10%, 25 — на 18,1 50 — на 21,3 100 — на 23,9 200 шт.— на 27,3% [6]. [c.16]

Конкурентные методы анализа используют для различных антигенов, но чаще всего для определения гаптенов. Они отличаются простотой постановки реакции, но имеют ряд ограничений. Во-первых, в конкурентных методах предъявляются высокие требования к стандартизации количества связанных и добавленных реагентов. Во-вторых, чувствительность этих методов определяется в основном константой связывания антител. [c.118]

Первая группа методов является обычным конкурентным связыванием в присутствии ограниченного постоянного количества меченого антигена или специфического антитела, немеченый реагент при этом может быть связан с твердой подложкой. По завершении реакции количество меченого реагента, связанного с твердой фазой, будет обратно пропорционально количеству определяемого вещества в образце. Естественно, что наличие ( нового сигнала будет оказывать диспропорционирующий эффект на результаты измерения высоких концентраций вещества. В случае хорошо оптимизированной методики вещество можно определять с высокой точностью (коэффициент вариации менее 10%) в широком (два-три порядка) диапазоне концентраций. Чувствительность методики зависит как от ошибок практического характера (точность отбора пробы, антител, антигена и способ измерения сигнала), так и от аффинности антител. [c.9]

Известна высокая чувствительность термолиза кремнийорганических пероксидов к кислым и основным свойствам растворителя и другим соль-ватационным эффектам [57-59]. Для установления соотношения вкладов конкурентных путей термолиза кремнийорганических пероксидов [c.180]

Устройство ввода на основе решетки позволяет завести свет в световод. Решетка —это периодическая структура (например, треугольная, пилообразная, синусоидальная) (рис. 7.8-21), которая нанесена на поверхность световода. Когда свет падает на решетку он возбуждает в световоде проходящую моду в зависимости от периода решетки. Чтобы усилить эффект изменения показателя преломления на границе раздела, изменения, происходящие на поверхности решетки, надо перенести на световод. Например, на рис. 7.8-21 свет, падающий вблизи устройств ввода, будет возбуждать проходящие моды, зависящие от показателя преломления окружающей среды. В этом варианте поверхность становится чувствительной к тонким изменениям показателя преломления. Этот вариант, следовательно, подходит для проведения безметочного иммунного анализа, поскольку связывание между иммобилизованным антителом и антителом пробы дает большую плотность этих молекул на расстоянии порядка длины волны вглубь от поверхности (заметьте, что глубина проникновения света составляет величину порядка длины волны, уравнение 7.8-34) и, таким образом, приводит к изменению показателя преломления. Например, конкурентный иммунный анализ можно применить для определения пестицидов, при этом на модифицированной аминосиланом поверхности устройства связи ковалентно иммобилизован триазиновый гаптен, а связывание антитела детектируют за счет измерения угла несвязывания [7.8-53, 7.8-54]. Чтобы детектировать присутствие триазиновых пестицидов, пробу следует предварительно выдержать с антителами, а затем — перенести к иммобилизованному гаптену. Очевидно, чтобы обеспечить невмешательство пользователя в эту процедуру анализа, в устройстве должен быть предусмотрен этап выдержки. [c.559]

В конкурентном иммунном анализе устанавливают число центров, не занятых пробой он может иметь различные варианты, но суть в том, что определяемое вещество пробы смешивают с меченым определяемым веществом, и они конкурируют за активные центры (рис. 7.9-4). Метсд требует разделения связанного и свободного антигена или антитела с целью определения их относительных количеств. Если определяют антиген, присутствие меченого антигена позволяет оценить относительное разделение. Как можно заключить из кривых иа рис. 7.9-3, оптимальная чувствительность достигается при уменьшении концентраций меченого антигена и антитела. [c.569]

Многие ранние работы относительно подвижности аллильных сложных эфиров ненадежны из-за того, что исследователи не знали об исключительной чувствительности этих реакций к кислотному катализу. В некоторых случаях следы кислотных примесей могут способствовать тому, что изомеризация, катализируемая кислотой, станет преобладающей реакцией. При изомеризации а-арилаллил-п-нитробензоата происходит аутокатализ вследствие образования следов и-нитробензойной кислоты при побочных реакциях [134—136]. Подобный катализ характерен и для других изомеризаций сложных эфиров, относительно которых предполагалось, что они некаталитические. В присутствии сильных кислот изомеризация, катализируемая кислотой, может быть единственной наблюдаемой реакцией [135, 137]. Кислотный катализ не явг ляется необходимым условием для изомеризации аллильных сложных эфиров [134, 135, 138, 139] даже в апротных растворителях, подобных использовавшимся Бартоном [128—133] однако к данным, накопленным без учета конкурентных катализируемых кислотами и некатализируемых реакций, следует относиться осторожно. [c.431]

Существует несколько подходов к оценке чувствительности конкурентных методов анализа. Чувствительность характеризуют тангенсом угла наклона кривой зависимости какого-либо параметра связывания. от концентрации лиганда La (Yalow, Berson, 1968) и определяют как минимально измеряемую из данной кривой концентрацию лиганда (ALa)o (Ekins et al., 1968). Последнее определение является более корректным и поэтому будет служить [c.260]

Рис. 120. Зависимость чувствительности конкурентного метода анализа от кгастанты ассоциации Ка=К а н наличия в системе экспериментальных ошибок в помимо ошибки за счет статистики радиоактивного распада (данные работы Ekins et al., 1968) в в % / 0 2 — 0,5 S -l 4-5

Рис. 123. Зависимость относительной чувствительности конкурентного метода анализа от константы ассоциации меченого лиганда (константа сродства немеченого лиганда равна 10" М ) и наличия в системе экспериментальных ошибок (помимо ошибки за счет статистики радиоактивного распада) (данные работы Ekins et al., 1968) е в % /—0 2 — 0,1

Отклонение от линейности зависимости потенциала ячейки от ]g Ср обычно связывают с растворимостью мембраны с наличием загрязняющих примесей во вспомогательном электролите с адсорбцией определяемых ионов стенками сосуда. Однако детальное изучение [85 ] показало, что в случае фторидного электрода растворимость мембраны не оказывает влияния на его нормальную работу, чего нельзя сказать об Р , присутствующих в качестве примесей в фоновом электролите и растворах хлоридов. Буффл с соавт. [86 ] тщательно исследовали влияние собственно растворимости кристаллической мембраны и адсорбции Р на границе раздела мембрана — раствор, поскольку от них зависит чувствительность ЬаРз-электрода. Найдено, что адсорбция фтора в большей степени, чем растворимость кристалла, определяет нижний предел чувствительности электрода. Аналогично Веселы и Штулик [87 ], изучая влияние кислотности раствора на обратимость электрода, нашли, что поведение его определяется конкурентной адсорбцией ионов ОН", Р и различных фторсодержащих частиц гидрофильной пленкой, образующейся на электроде. Сам кристалл не подвергается действию ионов раствора. [c.126]

У моллюсков литоральной зоны, например, пируваткиназа, подобно гомологичному ферменту из других источников, обнаруживает явную потребность в К . Так как пируват — непосредственный предшественник аланина, степень активации пируваткиназы внутриклеточными ионами К могла бы также отражать изменения в ионной концентрации крови и окружающей морской воды. Еще важнее то, что аланин действует как конкурентный ингибитор пируваткиназы и поэтому служит чувствительным сигналом обратной связи, регулируюи им свой собственный синтез из пирувата. Точно так же пролин регулирует собствен- ный синтез из глутамата. [c.139]

В работах, посвященных синергистическому действию смесей фосфорорганических инсектицидов указывается на конкурентное ингибирование компонентами смесей группы эстераз (холинэстеразы и алиэстеразы). Различная чувствительность эсте-раз к одному и тому же соединению рассматривается как конкурентная борьба за опасные для эстераз псевдосубстраты, которыми являются фосфорорганические соединения. Принимая, что фосфорорганические вещества одинаково влияют на эстеразы, можно ожидать повышенную токсичность смеси, содержащей компоненты с различной эстеразной активностью по сравнению с токсическим действием смеси на основании правила аддитивности. [c.64]

Специфичность ассоциации особенно наглядно проявляется при взаимодействии ферментов с их субстратами. Часто небольшие молекулы, по некоторым стереохимическим характеристикам напоминающие субстраты, действуют как ингибиторы, конкурируя с субстратами за специфические адсорбционные центры на поверхности молекулы фермента. Природа специфичности ферментов, по метафорическому выражению, аналогична соответствию ключа и замочной скважины [934]. Однако результаты последних исследований позволяют предположить, что для объяснения некоторых важных экспериментальных фактов необходима комилементар-ность двух жестких поверхностей. Природа этого явления изображена схематически на типичном примере (рис. 121). Известно, что фермент Р-амилаза оказывает каталитическое действие на гидролиз глюкозидной связи, отстоящей на два глюкозных звена от конца цени амилозы поэтому ферментативный катализ должен быть связан с механизмом, учитывающим расстояние реакционноспособной связи субстрата от конца цепи. Однако было обнаружено, что циклогексаамилоза и циклогептаамилоза, не имеющие концов цепи, являются конкурентными ингибиторами [935] и поэтому могут адсорбироваться на каталитически активном центре. Это поведение может быть объяснено теорией индуцированного соответствия действия ферментов, согласно которой активный участок фермента обладает определенной гибкостью, и поэтому он может охватывать конец цепи амилозы, приводя каталитически активные группы в соприкосновение с чувствительными связями субстрата. [c.324]

Использование РНК-зондов в блот-гибридизации по Саузерну, по-видимому, увеличивает чувствительность метода — главным образом из-за отсутствия конкурентной гибридизации зонда на себя , препятствующей гибридизации зонд—мищень (такая же чувствительность может быть достигнута и при использовании кДНК или других одноцепочечных ДНК-зондов но такие зонды, как правило, сложнее получить). [c.29]

Иммунометрическне. Вторая группа методов — иммунометрические, основана на принципе сэндвич -анализа. Особенность этих методов заключается в том, что на твердой фазе иммобилизован избыток антител, с которыми проводят инкубацию антигена. После удаления несвязавшихся компонентов в систему добавляют избыток меченых антител, которые взаимодействуют с антигеном. Очевидно, этот метод применим только к поливалентным антигенам (рис. 24, а). Чувствительность и точность иммунометри-ческих методов принципиально существенно выше конкурентных, так как используя избыток антител на твердой фазе, можно адсорбировать из раствора сколь угодно малое количество антигена, а затем избытком меченых антител определить его содержание. Кроме того, в этом случае гораздо менее строгие требования к количеству добавляемых компонентов. Чувствительность иммунометрических методов в большей степени зависит от нижнего предела детекции маркера. Однако на практике предельной чувствительности достигнуть трудно в силу того, что при большом избытке первичных и вторичных антител наблюдается значительная иеспецифическая сорбция, которая фактически и лимитирует чувствительность этих методов. Использование моноклональных антител в иммунометрическом анализе очень эффективно, так как, сорбируя на твердой фазе антитела одной специфичности, а проявляя связавшийся с ними антиген мечеными антителами другой специфичности, удается не только повысить избирательность детекции антигена, но и сократить время анализа (рис. 24,6). [c.118]

Однако чувствительность одностадийной схемы ниже чем двухстадийной, а контакт фермента с анализируемой средой может неблагоприятно отражаться на результатах анализа. Данная схема налагает также дополнительные требования на соотношение концентраций меченых и иммобилизованных антител с целью исключения их конкуренции за связывание с ограниченным числом антигенных детерминант на молекуле антигена. В этой связи целесообразным является использование в-анализе моноклональных антител, специфичных к различным антигенным детерминантам на мдлекуле антигена. Следует подчеркнуть, что данный метод анализа не может быть отнесен к конкурентному типу, так как формирование комплекса антигена с мечеными иди иммобилизованными антителами не [c.88]

На основе реакции двухсубстратного (люминол и люциферин) пероксидазного окисления разработаны твердофазные иммуиомет-рические методы для определения антител к вирусу краснухи человека и конкурентный метод определения дигоксина. Чувствительность этих анализов была сопоставима с соответствующими вариантами фотометрических методов ИФА. Твердофазный метод [c.137]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология