Гели, используемые в методе ГПХ

Электрофорез, процесс разделения молекул, основанный на разной скорости перемещения их в электрическом поле, проводят самыми разными способами. Очень небольшое количество раствора, содержащего смесь белков (например, белков сыворотки крови), наносят в виде тонкой полоски на лист фильтровальной бумаги или ацетата целлюлозы. Лист насыщают буфером и пропускают через него электрический ток. Напряжения в несколько сот вольт достаточно для разделения белков сыворотки в течение 1 ч. Для ускорения процесса и снижения диффузии низкомолекулярных веществ широко используют высоковольтный электрофорез. Прикладываемое напряжение составляет в этом случае 2—3 тыс. вольт. Образец постоянно охлаждают с помощью термостатируемых пластин иногда для той же цели всю систему погружают в сосуд с керосином. Электрофоретическое разделение больших количеств материала проводится в плоских лотках, заполненных крахмальным или каким-либо другим гелем. Одним из наиболее распространенных и чувствительных методов разделения белков является электрофорез в колонке, заполненной полиакриламидным гелем. Этот метод, в настоящее время сильно усовершенствованный, позволяет проводить разделение молекул одновременно и по размеру, и по электрическому заряду его называют методом электрофоретического молекулярного сита 127, 128]. [c.164]

Аминокислотный состав и последовательность аминокислот выяснены для многих тысяч белков. В связи с этим стало возможным вычисление их молекулярной массы химическим путем с высокой точностью. Однако для огромного количества встречающихся в природе белков химическое строение не выяснено, поэтому основными методами определения молекулярной массы все еще остаются физико-химические методы (гравиметрические, осмометрические, вискозиметрические, электрофоретические, оптические и др.). На практике наиболее часто используются методы седиментационного анализа, гель-хроматография и гель-электрофорез. Определение молекулярной массы белков методами седиментационного анализа проводят в ультрацентрифугах , в которых удается создать центробежные ускорения [c.44]

В схеме установки, показанной на рис. 53, при получении сырого гелия использовался метод прямоточной конденсации, который осуществлялся в несколько стадий охлаждения, и в конце каждой из них про-160 [c.160]

Проблема извлечения гелия сводится к отделению от гелия всех присутствующих компонентов. Традиционно в производстве гелия используются низкотемпературные (криогенные) методы низкотемпературные конденсация, ректификация и адсорбция. Часто в современные поточные схемы производства гелия включают блоки селективной диффузии через мембраны [4]. [c.159]

Важная особенность этого метода состоит в том, что добавление фермента в реакционную смесь во время образования геля сводит дезактивацию фермента к минимуму. Далее, ковалентное присоединение фермента к гелю обеспечивает а некоторой степени защиту от протеаз. Эта процедура проста и универсальна она может быть прямо использована для многих ферментных систем, а также для иммобилизации целых клеток и органелл. Наконец, гель может быть приспособлен для магнитной фильтрации, если при образовании геля использовать железосодержащую жидкость. [c.258]

При иммобилизации ферментов необходимо, чтобы активные группы матрицы ие блокировали каталитич, центр фермента, а условия иммобилизации ие приводили к потере его активности. Определенные ограничения иа способ иммобилизации налагают и особенности субстрата. Так, в случае высокомол. субстратов нельзя использовать методы инкапсулирования или включения фермента в гель, Еслн матрица несет иа себе заряды, то заряд субстрата влияет на кинетич. параметры р-ции разноименные заряды иа носителе и субстрате увеличивают скорость р-ции, катализируемой И. ф,, одноименные заряды ее снижают в м. б. причиной полной потери активности препарата. Заряды носителя и субстрата влияют также иа величину pH, при к-рой скорость ферментативной р-ции максимальна. [c.215]

При обосновании оптимальных концентраций исходных реагентов для получения прочного геля с наибольшим временем гелеобразования и оптимизации числа опытов использовались методы математического планирования эксперимента и комбинированного квадрата. По результатам обработки полученных данных строились статистические выражения (модели), описывающие изменение прочности и время гелеобразования от исходных концентрацией исследуемых реагентов (табл.З). [c.17]

Гель-хроматография. В препаративных целях, особенно при очистке белков от примесей, щироко используют метод молекулярных сит, или гель-хроматографию. При обработке эпихлоргидрином полисахарида дек-страна образуются различной степени выраженности поперечные связи, приводящие к формированию крупных гидрофильных зерен, нерастворимых в воде и называемых сефадексами. Благодаря большому сродству к воде зерна сильно набухают в водной среде с образованием геля, которым заполняют хроматографическую колонку. Разделение веществ этим методом основано на том, что большие молекулы не проникают во внутреннюю водную фазу геля, являющуюся стационарной, и остаются снаружи, двигаясь вместе с подвижной фазой вниз вдоль колонки небольшие молекулы, напротив, свободно диффундируют внутрь зерен, образуя равновесную систему между подвижной и стационарной фазами, и соответственно с меньшей скоростью двигаются вдоль колонки (рис. 1.5). Обычно момент появления веществ в вытекающем из колонки с сефадексом элюенте выражают формулой [c.30]

Геохимические методы основаны на поисках и анализе аномальных вариаций содержания ряда химических элементов в подземных водах, газах, почве перед землетрясениями. Наиболее широко используются методы контроля радона, гелия, ртути, углекислого газа, водорода и углеводородов. [c.614]

Качество очистки должно непрерывно контролироваться, для чего применяются специально разработанные методы и приборы. В частности, используется метод, основанный на изменении теплопроводности газа в зависимости от наличия примесей. При использовании хроматографического метода происходит концентрирование примесей из пробы на поглотителе. Затем анализируется состав десорбированных примесей. Применяют также спектральный метод газового анализа и другие методы. Количество водорода в гелии может быть определено путем его поглощения при реакции с кислородом. [c.207]

Скорость диффузии зависит также от природы газа. Наиболее легкие газы — водород и гелий — имеют максимальную скорость диффузии в воздухе. Высокий коэффициент диффузии гелия используется в совре-д енных методах отыскания течей вакуумных систем. Коэффициенты диффузии газов Оо при 0°С и 760 мм рт. ст. приведены в табл. 7. Ко-2 [c.22]

Розен [20[ и Шостак [21] в первом порядке вычислили энергию трехчастичных взаимодействий между атомами гелия, используя соответственно метод валентных связей и метод молекулярных орбиталей. Имеется интересная аналогия между относительными трехчастичными атомными взаимодействиями в схеме Аксельрода — Теллера (относительно аддитивных сил второго порядка) и в схеме Розена — Шостака (относительно аддитивных сил первого порядка) эта аналогия заключается в том, что оба относительных эффекта отрицательны, если взаимодействующие атомы образуют равносторонний треугольник, и положительны при линейном располон ении атомов. Однако прямых попыток учета трехчастичных атомных взаимодействий первого порядка не было сделано. Кроме того, тверды гелий не представляет особого интереса, так как он образует гексагональную решетку. Имеются также данные исследования ряда многочастичных атомов взаимодействий, в одних случаях основанных на электростатических эффектах, в которых перекрывание зарядовых облаков рассматривалось классически, в других случаях — на модели Друде гармонических осцилляторов для атомов с дипольными взаимодействиями [22]. Однако никакие из указанных сведений не могут служить ключом к пониманию стабильности кристаллов инертных газов, поскольку [c.257]

Цель данного этапа — выявить в каком из фрагментов находится интересующая нас последовательность ДНК. Это делают с помошью генного зонда. Поскольку зонд плохо продвигается в геле, используют метод, называемый Саузерн-блоттингом (Эдвард Саузерн разработал этот метод в 1975 г.). Последовательность операции представлена на рис. 25.32 (см. также раздел о генетической дактилоскопии, 25.7.12). [c.259]

А. Нартен, Ц. Венкатеш и С. Рейс изучали структуру аморфного льда методом дифракции рентгеновского излучения и нейтронов. Образцы изготовляли при медленной (4 мг/ч) конденсации паров воды на плоскую поверхность монокристалла меди, находящегося в дьюаре при температуре жидкого гелия. Использовалось монохроматическое излучение молибдена. Опыт повторяли в течение 15 дней, и при этом изменение дифракционной картины не наблюдалось. Съемка производилась при 10 и 77 К. Исследования показали [c.314]

Для расчета молекулярно-массовых характеристик авторы [108] использовали метод, по существу эквивалентный подходу теории ветвящихся процессов. Область его применимости ограничена лишь решеткой Бете, для которой были вычислены а) точное значение статистической суммы и кривая сосуществования фаз б) средневесовая степень полимеризации и граница области гелеобразования. Характерной особенностью последней, как видно из рис. 1.29, является наличие максимальной температуры Гтах, выше которой геле-образование невозможно даже при ф = 1 вследствие слишком малого количества химических связей. Для всех типов растворителя, т. е. значений энергии Z7, имеется температура (лежащая ниже критической температуры смешения Гс), при которой линии сосуществования фаз и гелеобразования пересекаются. Если в интервале температур Гс < Г < Гтал система гомофазна (хотя при достаточно больших ф в ней может образоваться бесконечная сетка геля), то при 7 р<Г<Гс (см. рис. 1.29) происходит расслоение на две фазы. Они или обе содержат гель-фракцию (см. рис. 1.29, е), или обе не содержат ее (см. рис. 1.29, а) в зависимости от типа фазовой диаграммы. При Т <.1 только в одной из двух фаз, а именно в той, которая обеднена растворителем, образуется полимерная сетка геля. Фазовые диаграммы, качественно похожие на изображенные на рис. 1.29, получены путем расчета по методу Монте-Карло полимерной системы в рамках той же самой модели, но уже на трехмерной кубической решетке [109]. [c.187]

Выделение чистых И. проводится с помощью ионообменных смол с послед, гель-фильтрацией. Для мн. целей используют препараты миеломных И., особенно минорных классов. Антитела выделяют с помощью иммуносорбентов - фиксированных на нерастворимых носителях (напр, целлюлозе) антигенов. Обнаружение и количеств, определение И. разных классов проводят иммунологич. методами с помощью соответствующих антисывороток. Для определения кол-ва антител используют методы преципитации (иммунная р-ция осаждения антигена антителом), агглютинации (взаимод. антитела с двумя клетками), нейтрализации бактерий и вирусов и др. Широкое распространение получают радиоиммунные и ферментно-иммунные методы, обладающие исключительно высокой чувствительностью и позволяющие определять очень малые кол-ва антител (или антигенов) в смесях с др. в-вами. [c.217]

Получение ферментов. Обычно Ф. вьщеляют из тканей животньгх, растений, клеток и культуральных жидкостей микроорганизмов, биол. жидкостей (кровь, лимфа и др.). Для получения нек-рых труднодоступных Ф. используются методы генетической инженерии. Из исходных материалов Ф. экстрагируют солевыми р ами. Затем их разделяют на фракции, осаждая солями [ооь1чно (ЫН4)2304] или, реже, орг. р-рителями, и очищают методами гель-проникающей и ионо- [c.84]

Для получения метанов высокой изотопной чистоты Нортон [142] предложил использовать метод препаративной газовой хроматографии на колонке длиной 30 ти с полиаро-матическим сорбентом ПАР-2 при температуре —45° С и расходе газа-носителя гелия 300 мл1мин. Автор получил СНдО 99,8/0 чистоты. Метод применим к любым смесям изотопов метана. Нортон рекомендует кондиционировать сорбент отдельно, вне колонки под вакуумом при температуре 200° С в течение 48—72 час. [c.129]

Чтобы определить суммарный объем пор, Лард и Браун [147] предложили использовать метод потока, посредством которого смесь азота с гелием, содержащая 96,7 % азота, при- [c.674]

Используя хроматографический носитель, модифицированный (5), Клемм смог частично разделить некоторые ароматические эфиры и углеводороды. Способность (5) разделять хиральные ароматические углеводороды, не содержащие каких-либо других функциональных групп, представляет большой интерес. Гил-Авом и сотр. [136, 137], а также Винбергом и сотр. [138, 139], а также рядом других исследователей опубликованы сообщения о разделении гели-ценов методом ЖХ на силикагеле с ковалентно-связанным (5) или на силикагеле или оксиде алюминия с физически адсорбированным (5). Опубликованы также сообщения о проведенных разделениях ряда энантиомеров, в основу которых положен этот же принцип [140—142]. [c.147]

Превращения, протекающие в твердой фазе алюмосиликатного геля в процессе кристаллизации цеолитов, были исследованы электронно-микроскопически [11]. Используя метод углеродных реплик, удалось изучить морфологические изменения,указывающие на характер образования и роста кристаллов цеолита. Рис. 4.24 демонстрирует последовательную кристаллизацию типичного алюмосиликатного геля с образованием кристаллов цеолита А. На рисунке можно видеть структуру исходного геля, последующее появление ядер кристаллизации и хорошо окристаллизо-ванные кубические кристаллы цеолита. На рис. 4.24 показан необычный рост кристаллов достаточно большого размера. Двойникование, обычное для кристаллов цеолитов, проявляется в образовании ступеней роста на грани (100) монокристалла цеолита А. [c.351]

Для разделения и концентрирования ферментных белков часто используют метод гель-фильтрации с применением сефадексов—полимерных цепей полисахарида декстрана, соединенных через определенные промежутки поперечными связями и образующих своеобразные молекулярные сита, способные разделять белки в соответствии с их молекулярной массой [48, 49]. [c.170]

Фракционирование олигомеров осуш ествляют, используя методы скоростной седиментации в ультрацентрифуге и турбидиметрического титрования, а также хроматографические методы (электрофорез, тонкослойная и гель-проникаюш,ая хроматография и др.). [c.130]

Здесь могут быть использованы методы, известные из энзимологии и белковой химии равновесный диализ, ультрацентрифугирование, гель-хроматография и ультрафильтрация. Основной проблемой является здесь выяснение различий между специфическим и неспецифическим связыванием, в особенности при изучении связывания, проводимом на препаратах мембран и на частично очищенных белковых фракциях. В центральной нервной системе концентрации рецептора могут составлять несколько пикомолей на 1 г ткани, а нейромедиаторы благодаря своим полярным свойствам легко взаимодействуют, хотя и слабо, с полярными мембранными компонентами, расположенными вне рецепторной области. Если даже такое неспецифическое связывание имеет сродство на несколько порядков ниже, чем специфическое связывание с рецептором (т. е. более высокую Ко), оно все же оказывается важным фактором, который следует принимать во внимание из-за большого числа присутствующих неспецифических связывающих центров. Таким образом, обнаружение рецептора в центральной нервной системе посредством изучения связывания возможно, если имеется лиганд с очень высоким сродством и с очень высокой удельной радиоактивностью (>185-10 ° раоп./(с-ммоль). [c.249]

Для визуализации эндоглюканаз в слое геля и скрининга продуцентов целлюлаз широкое распространение получили методы с использованием растворимых производных целлюлозы. Так, для отбора клонов в ходе генно-инженерных манипуляций используется метод, основанный на том, что низкомолекулярные продукты деструкции КМ-целлюлозы способны образовывать неокрашенный комплекс с красителем Конго красным. Поэтому в ходе проявления пластин и (или) на чашках Петри в месте локализации фермента образуется зона просветления, хорошо различимая на [c.141]

Для получения крупнопористых силикагелей, сохраняющих структуру исходных гидро-, алкогелей, используют метод сублимирования в вакууме замороженной интермицеллярной жидкости [259 . В основе этого метода лежит идея об устранении действия менисков жидкости, стягивающих частицы геля при обычной сушке. Такая же идея положена в основу получения аэрогеля [42 . [c.185]

При выводе уравнения, аналогичного <5.25), Флори предаолагал, что цепи подчиняются гауссовой статистике кроме того, он использовал метод самосогласованного поля для оценки вклада отталкивания [1]. Успех его теории естественно всежл в спевдалистов уверенность, что цепи в набухшем геле в хорошем приближении гауссовы. Однако это совершенно неверно по следующей при не. [c.172]

Новые методы синтеза катализаторов. Некоторые новые методы, описанные в разделе 5, позволяют приготовлять совершенно новые катализаторы с достаточно высокой удельной поверхностью. Например, метод приготовления аэрогелей, разработанный Тейшнером (см. разд. 5.2.2), используют для приготовления смешанных твердых кислот типа Ы10-А120з и МЮ-МоОз с высокой удельной поверхностью (600 ш /т). Такая высокоразвитая поверхность позволяет легко вводить добавки, необходимые для химической и структурной модификации катализаторов. Другие методы, которые могут иметь частное значение при приготовлении новых твердых кислот н смешанных оксидов и сульфидов переходных металлов, включают осаждение когелей, осаждение гелей и метод постепенного изменения pH (см. разд. 5.2.2). [c.181]

Ранее в лаборатории авторов были выполнены исследования il] деструкции при экструзии полистирола со средневесовым молекулярным весом М , 6,7-10 и узким молекулярновесовым распределением (МВР). Опыты проводили с помощью капиллярного реометра Instron , который использовался в качестве приспособления для создания высоких скоростей сдвига, моделирующих реальный процесс переработки полимера в изделие. Для оценки МВР образцов после экструзии использовали метод гель-проникающей хроматографии. Эту же методику использовали и в настоящей работе при исследовании высокомолекулярного образца полистирола с 1,8-10 . При этом варьировали различные параметры процесса, что позволило получить некоторые результаты, отличные от описанных ранее. [c.191]

Хемосорбция меченой окиси углерода СО (xv =5730 г., энергия р-частиц 0,156 МэВ) исследовалась на платиновом, родиевом, никелевом и окиснохромовом катализаторах [170, 171]. Хьюджес и др. [170] использовали радиоактивную смесь газов в потоке газа-носителя гелия. Этот метод очень напоминает способ, описанный в предыдущем разделе, только в данном случае концентрация адсорбируемого газа контролируется радиохимически. Для рассматриваемых целей, т. е. для количественных адсорбционных измерений, едва ли имеет смысл применять меченую окись углерода. [c.357]

Общая схема установки для исследования рассеяния света в жидкостях изображена на рис. 1.2.1 (1 - гелий-неоновый лазер, работающий в одночастотном режиме). Для выделения одной частоты использовался метод Ю.В.Троицкого /26/. При этом применялась полупрозрачная пластинка (кварцевая пластина с нанесенным слоем никеля пропускание 70%), помещенная в узел стоячей волны генерируемого излучения на расстоянии 100 мм от выходного плоского зеркала. Пластинка укреплялась на пьезокерамической подставке и могла перемещаться вдоль оптической оси 2 - фотоэлемент, предназначенный для контроля интенсивности изл -чения лазера 3 - линза, фокусирующая излучение лазера на кювете 6 4 - прерыватель излучения, управляемый звуковым г.енератором 9 (частота 73 Гц) 5 - воздушный термостат, представляющий собой цйлиндрический нагреватель на медном корпусе (стабильность и однородность температуры в кювете составляла 0,1°К). Рассеянное излучение через поляризатор (10), плоскопараллельную пластину (11) и линзу (12) направлялось на эталон Фабри - Перо, сканируемый давлением (напускание азоте из баллов (36) через вентиль (35), редуктор (33) и капилляр-натека-гель (32) насос (34) и клапан (31) служили для предварительной откачки воздуха) линейность развертки на четырех порядках интерферен- [c.10]

Фракционирование О. осуществляют, используя методы, применяемые для разделения на фракции высокомолекулярных соединений (см. Фракционирование), а также хроматографич. методы (электрофорез, тонкослойная и гель-нроникающая хроматографии и др.— см. Хроматография). Последние позволяют разделить смеси О. не только на узкие фракции, но и получать О.-гомологи в виде индивидуальных соединений. Электрофорез на бумаге используют для разделения О. с кислотными или основными группами. Тонкослойную хроматографию и хроматографию на бумаге применяют для разделения и идентификации О. различных классов (олигоэфиров, олигоамидов, олигофениленов, феноло-формальдегидных смол и др.). Благодаря своей универсальности получила широкое распространение гель-нроникающая хроматография, позволяющая не только разделить О.-гомологи, но одновременно оценить молекулярно-массовое распределение смесей. [c.230]

Для характеристики чистоты алюминия в настоящее время успешно используется метод, основанный на измерении остаточного электросопротивления металла при температуре жидкого гелия. Величина электросопротивления в этом случае зависит от общего содержания микропримесей в металле и характеризует, таким образом, степень чистоты алюминия [55]. [c.268]

Аффинный электрофорез в полиакриламидном геле — это метод разделения, использующий преимущества и аффинной хроматографии, и электрофореза в иолиакриламидном геле [23, 24]. В микромасштабе он позволяет быстро анализировать смеси белков с избирательным разделением тех компонентов, которые обладают связывающими участками, комплементарными к иммобилизованным специфическим аффинным лигандам. Последние ковалентно связаны с частью матрицы полиакриламидного геля и образуют, таким образом, слой аффинного геля . Принцип этого метода хорошо иллюстрируется на типичном примере разделения активных белков аффинным электрофорезом, как показано на рис. 7.4. В стеклянных трубках равного диаметра готовят [c.166]

При определении возраста метеоритов используется распад трития с образованием гелия-3. Тритий является продуктом реакции скалывания при облучении метеоритов космическими лучами, причем его равновесное количество достигается за время, равное нескольким периодам полураспада ( 1/2= 12,26 лет). Количество трития можно определить с помощью счета, а количество гелия-3 — методами нейтронной активации [67] или изотопного разбавления [68]. Для каменного метеорита из Нортон Каунти возраст, определенный таким методом, оказался равным 240 и 280 млн. лет, т. е. значительно меньше значения 4400 млн. лет, которое дает метод с использованием калия—аргона [68]. Расхождение можно объяснить тем, что возраст, определенный по тритию—гелпю-3, представляет собой [c.120]

Резорбционную способность по отношению к воде гидрогелей кремнезема, глинозема, закиси железа в зависимости от их предварительной обработки и величины зерен изучал Сплихал . Для той же цели употребляется особенно изящный метод Хана , при котором для расчета внутренней поверхности адсорбирующего геля Используется радиоактивная эманация в качестве индикатора, [c.309]

Точное решение для атома гелия может быть получено тремя методами. Можно сделать вполне определенный выбор подходящих вариационных форм, включающих межэлектронную координату Г12 и обеспечивающих сколь угодно высокую степень точности. Существуют классические расчетные методы решения такой задачи, предложенные Хиллерасом. До высокой точности, как это недавно показал Шер, могут быть доведены также методы теории возмущений. Кроме того, можно использовать метод конфигурационного взаимодействия, причем этот метод наиболее просто обобщается на сложные молекулы. Сущность его заключается в том, что составляются линейные комбинации функций типа 15= (1) 1х (2) с функциями, соответствующими возбуждению других атомных орбиталей 2з, 2р и т. д., например [c.16]