Аминокислоты, анализ гистидин

Экспериментально было установлено, что метод титрования формальдегидом дает заниженные результаты при определении аминного азота в таких аминокислотах, как лизин. Несколько менее заниженные результаты получаются при анализе некоторых других аминокислот, например, гистидина и фенилаланина. Как показывает опыт, истинные конечные точки при титровании индивидуальных аминокислот не соответствуют одной и той же величине pH. При титровании смесей всегда необходимо выбрать для конечной точки определенное значение pH и в зависимости от этого [c.211]

Анализ значений энтальпии и энтропии комплексообразования (см. табл. 4.8) показывает, что комплексообразование 18-краун-б с АК является селективным процессом. Отметим, что комплексы 18-краун-б с такими аминокислотами как Ь-аспарагин, Ь-глутамин, Ь-серин, Ь-треонин энтальпийно стабилизированы, а комплексообразование ОЬ-метионина, Ь-гистидина, Ь-изолейцина с макроциклом энтальпийно и энтропийно благоприятно. [c.209]

При анализе данных табл. 1.4 виден ряд закономерностей. На долю дикарбоновых аминокислот и их амидов в большинстве белков приходится до 25-27% всех аминокислот. Эти же аминокислоты вместе с лейцином и лизином составляют около 50% всех аминокислот. В то же время на долю таких аминокислот, как цистеин, метионин, триптофан, гистидин, приходится не более 1,5-3,5%. В протаминах и гистонах отмечено высокое содержание основных аминокислот аргинина и лизина, соответственно 26,4 и 85,2% (см. Химия простых белков ). [c.40]

Промежуточное высушивание. На 10 мин пластинку помещают в тягу (хорошая вентиляция), затем нагревают 10 мин в сушильном шкафу при 60° и охлаждают 15 мин также в тяге. Затем можно сразу проводить хроматографический анализ во втором направлении. Более длительное высушивание не рекомендуется, поскольку на воздухе происходит частичное разложение ДНФ-аминокислот окисление ДНФ-метионина может привести к неправильному выводу о наличии ди-ДНФ-гистидина при последующем хроматографическом анализе. Если после высушивания необходимо более длительное хранение, то слой покрывают стеклянной пластинкой и хранят в темноте. [c.422]

Первичные аминогруппы других аминокислот превращаются под действием азотистой кислоты в полярографически неактивные гидроксильные группы. Продукты нитрования тирозина, фенилаланина и гистидина не мешают анализу. Содержание пролина можно определить с точностью 2%, а оксипролина — с точностью +4%. Можно определить приблизительно 1 у нитрозопроизводного в 1 мл раствора. [c.387]

Электрохимические исследования аминокислот, нуклеиновых кислот и белков непосредственно связаны между собой, поскольку первые являются структурными элементами более сложных макромолекул. Электрохимические исследования двадцати основных 1-а-аминокислот [230—232] показали, что только шесть из них — цистеин, цистин, метионин, гистидин, тирозин и триптофан — окисляются на пирографитовом и стеклоуглеродном электродах. В области pH от 1 до 10 их окисление протекает необратимо при н.и.э.>1,0 В, причем с ростом pH потенциал полуволны или максимум тока смещается в отрицательную сторону. Процессы окисления сопровождаются пассивацией электрода продуктами реакции. По данным ЯМР- и ИК-спектроскопии, продукты реакции имеют сложную полимерную структуру, что не позволяет пока перейти к детальному анализу механизма. Тем не менее полученные результаты оказались полезными при интерпретации электрохимического поведения белков, адсорбированных на графитовых электродах [245, 246]. [c.163]

При анализе гидантоинов большую колонку (95 см) промывают вначале (13 ч) буфером I, а затем в течение 17 ч буфером П на короткой колонке (15 см) используют буфер ПГ. Сопротивление длинной колонки 1 атм, короткой — 0,1 атм. Следует иметь в виду, что при скорости подачи более 10 мл/ч разрешение резко падает. Поэтому на таких колонках работают при низком давлении. Порядок выхода гидантоинов на длинной колонке следующий аргинин, треонин, серин, глицин, аланин, аспарагиновая кислота, глутамин, гистидин, лизин, валин, пролин, изолейцин, метионин и лейцин. На выходе короткой колонки вначале появляется сумма аминокислот (в виде двух пиков), а затем фенилаланин и тирозин. [c.382]

Примечание. Этим методом удобно пользоваться при анализе протаминов и несложных по составу смесей аминокислот. Однако его нельзя рекомендовать для исследования гидролизатов белков, более сложных по составу, так как данные, получаемые для гистидина, редко оказываются удовлетворительными. [c.17]

Четырехчасовой метод анализа, смолы иН-ЗО, РА-35. Увеличение pH первого буфера (pH 3,25 0,20 н. раствор) для кислых и нейтральных аминокислот всего на несколько сотых долей улучшает разделение пары аминокислот треонин — серин. Увеличение pH второго буфера с 4,25 до 4,41 (0,20 н. раствор) ухудшает разделение пары изолейцин — лейцин. При увеличении pH буфера (pH 5,25 0,35 н. раствор) гистидин элюируется быстрее по сравнению с другими основными аминокислотами. [c.41]

Обсуждение. Порядок выхода аминокислот на этой колонке такой же, как и на длинной колонке, заполненной смолой иК-ЗО (см. рис. 6), с той лишь разницей, что содержащиеся в пробе цистеиновая кислота, таурин и мочевина будут элюироваться несколько раньше. При использовании колонки (26 см), заполненной смолой иН-40, величина отношения высоты впадины между пиками к высоте большего пика пары разделяемых аминокислот равна для пары треонин-серин 0,40, серин — глутаминовая кислота 0,23, глицин —аланин 0,10 и тирозин — фенилаланин 0,16. В условиях данного анализа цистин выходит между пролином и глицином, а гистидин — до лизина. После лизина вымываются аммиак и аргинин. Состав буферов приведен в табл. 2. [c.72]

Анализ самого белка показал, что он принадлежит к группе протеинов (простых белков) и по своим химическим свойствам относится к глобулинам 3. Из аминокислот при расщеплении глобина были обнаружены лейцин, валин и гистидин [c.165]

Гидролиз пищевых продуктов. Чаще всего при определении аминокислотного состава пищевых продуктов используют кислотный гидролиз в 6 н. растворе НС1, проводимый в запаянных ампулах при температуре ПО—120°С в продолжение 22—24 ч [38, 48, 61]. Необходимо отметить, что гидролиз — наиболее несовершенная операция в аминокислотном анализе, так как в белках содержится несколько лабильных аминокислот (треонин, серин, цистин, метионин, гистидин, триптофан, тирозин), которые, по мнению многих авторов, заметно разрушаются даже при кратком кислотном гидролизе другие (валин, лейцин, изолейцин), наоборот, с трудом высвобождаются из полипептидных цепей при длительных сроках гидролиза (в течение 70—80 ч). Поэтому для определения истинных количеств аминокислот в белках при особо точных исследованиях гидролизуют несколько (3—4) проб белка при различных сроках (20—80 ч). Путем построения графиков зависимости количества аминокислот от длительности гидролиза находят истинное значение содержания лабильных аминокислот, экстраполируя кривую к начальному моменту гидролиза. [c.190]

Муссини и Маркучи [156] анализировали на слоях силикагеля G н-бутиловые эфиры 18 аминокислот. Разделение проводили смесью бензол—н-бутанол (3 1) этот элюент не вызывает смещения основных аминокислот — лизина, гистидина и орни-тина. Для этих эфиров применяли смесь н-бутанол—уксусная кислота—вода (12 3 5). Дальнейшая работа с этой же системой позволила разделить бутилпроизводные пролина, дегидро-пролина и оксипролина [41]. В то же время, используя систему н-бутил—уксусная кислота—вода (12 3 5), удалось разделить нитрозопроизводные этих аминокислот. Мухилл и Джексон [42] также провели хроматографический анализ нитрозопроизводных L-пролина и L-оксипролин а. [c.510]

В ходе анализа методом круговой хроматографии не удалось разделить следующие аминокислоты лизин — гистидин, серии — глицинаспарагиновая кислота, треонин — глутаминовая кислота, метионин — валин, но было установлено их общее количество. [c.562]

Аминокислотный анализ исследуемого белка, проведенный на анализаторе аминокислот JL -3B фирмы JEOL, свидетельствует о явном преобладании в нем основных аминокислот (лизина, гистидина и аргинина). Сумма этих аминокислот в два раза превышает содержание дикар-боновых аминокислот. По аминокислотному составу выделенный белок практически идентичен энцефалитогенному белку, полученному другими авторами из ткани головного и спинного мозга (Паллад1н и др., 1970). [c.25]

N-Koнцe вoй лизин дает а,е- бис-динитрофенильиое производное лизин, расположенный в середине цепи или на С-конце, дает е-моноди-нитрофенильное производное. Фенольная группа тирозина и имино-группа гистидина также реагируют с динитрофторбензолом, но образующиеся производные расщепляются в условиях кислотного гидролиза пептидной связи. Для определения последовательности аминокислот белок подвергают частичному гидролизу и определяют строение образовавшихся ди- и трипептидов анализом концевых групп. Если в гидролизате охарактеризованы все возможные дипептиды, то последовательность аминокислот в белке может быть однозначно определена без дальнейшего анализа концевых групп. [c.690]

С помощью Л. X, удается выделять и разделять соед., склонные к координации с ионами металлов, в присут. больших кол-в минер, солей и некоординирующихся в-в. Напр, с использованием иминодиацетатной смолы с ионами Си из морской воды выделяют своб. аминокислоты На катионитах с ионами Ре разделяют фенолы, с ионами Лg -сахара. На карбоксильных катионитах с N1 разделяют амины, азотсодержащие гетероциклы, алкалоиды. На силикагеле с нанесенным слоем силиката Си в водно-орг. среде в присут. ННз проводят быстрый анализ смесей аминокислот и пептидов, причем элюируемые из колонки комплексы легко детектируются спектрофотометрически. На высокопроницаемых декстрановых сорбентах с иминодиацетатными группами, удерживающими ионы N1 или Си- , селективно выделяются из сложных смесей индивидуальные белки и ферменты, содержащие иа пов-сти своих глобул остатки гистидина, лизина или цистеина. Силикагели с фиксированными на пов-сти инертными т/)ис-этилендиа.миновыми комплексами Со используют для т. наз. внешнесферной Л. х. смесей нуклеотид-фосфатов. Методом газовой Л. х. с помощью фаз, содержащих соли Ag , разделяют олефины, ароматич. соед., простые эфиры. Тонкослойная Л. х. на носителях, пропитанных солями Ag , применяется для анализа стероидов и липидов. [c.590]

Анализ кристаллических структур комплексов белков с металлами показал, что аминокислотные комплексы металлов имеьот октаэдрическое строение, причем два остатка аминокислоты связаны с центральным атомом металла амино- и карбоксильными группами, а свободные координационные места заняты водой. Особой устойчивостью отличаются комплексы с аминокислотами, имеющими функциональные боковые цепи, как, например, гистидин, азот имидазола в котором образует дополнительную связь с центральным атомом. [c.67]

Установлено, что действующими веществами каланхое является комплекс веществ кислотного характера (органические кислоты), в том числе аминокислоты, полисахариды, флавоноиды, катехипы, микроэлементы и др.). Наличием этих соединений в значительной мере обусловлено нротивовоснолительное и усиливающее регенерацию тканей действие. Проведен аминокислотный анализ и подтверждено наличие 12 аминокислот аспарагиновая кислота, треопип, серии, глутаминовая кислота, глицин, аланин, валин, лейцин, фенилаланин, гистидин, изолейцин, аргинин основные органические кислоты - яблочная, лимонная, щавелевая. [c.48]

Таким образом, для чисто химических или физико-химических исследований основным требованием является точность для широкого обзора в области пищевых белков самое первое, что нужно, это — получить возможно больше материала по присутствию и содержанию незаменимых аминокпслот. В нашей практике часто встречалось, что пищевой белок является хорошим источником больщинства незаменимых аминокислот, которые легко определить (именно цистин, метионин, аргинин, гистидин, лизин, тирозин и триптофан), и все же неполноценен в отношении других аминокислот, для выявления которых нет простых и точных способов определения. Если в таких случаях руководствоваться только анализами первой группы аЛтинокислот, то можно было бы впасть в серьезную ошибку при биологической оценке данного белка. Поэтому только полный анализ аминокислот, имеющих значение для питания, может дать правильную и полноценную картину исследуемых продуктов, даже если определение отдельных аминокислот будет произведено не абсолютными, а скорее сравнительными методами. [c.9]

Примечание. Как мы установили, описанньп выше метод позволяет получать удовлетворительные н сходящиеся результаты с большим числом белков, значительно различающихся по аминокислотному составу н по степени чистоты. Однако следует помнить, что для определения основных аминокислот нельзя установить постоянных правил. Часто оказывается необходимым изменять условия эксперимента вследствие специфических особенностей. Напрпмер, если содержание в белке одной или нескольких основных аминокислот невелико, то для анализа полезно применять больщие количества белка или комбинировать микро-метод Косселя со специфическими колориметрическими методами, вписанными ниже. Разработанное нами видоизменение метода Косселя позволяет двум работникам проводить 2 полных определения аргинина, гистидина и лизина в течение примерно 12 час. При этом единственной аппаратурой, которая встречается не [c.31]

Анализ организма животных показывает, чтс в нем содержится около 7% аргин. ша, свыше 2% гистидина и 6 Д лизина. Отсюда логически следует, что для быстрого рос-та животного оелковая пища должна содержать эти три аминокислоты приблизительно в тех же соотношениях. Это особенно справедливо для гистидина и лизина, которые, повидимому, не синтезируются млекопитающими даже в малых количествах. [c.67]

Основные аминокислоты. Скорость подачи буфера и нингидринового реагента устанавливается соответственно на 70 и 35 мл/ч температура колонки 53,4 +0,05 °С. Используют 0,35 н. натрийцитратный буфер pH 5,35 + 0,01. Продолжительность анализа, включая определение триптофана, лизина, гистидина, аммиака и аргинина, составляет 48 мин. [c.60]

Нингидриновый метод применим не ко всем аминокислотам и не используется больше, по-видимому, с 1960 года. В результате этого метода глицин образует полимеризующийся формальдегид, тогда как гистидин, аргинин, триптофан, цистеин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты, очевидно, не пригодны для анализа этим методом [7]. В качестве жидкой фазы использовали и силиконы [7, 164, 158], и полиэфиры [4, 149]. Предпринимались попытки [121] декарбоксилирования в присутствии N-бромсукцинимида (БСИ), однако образующиеся нитрилы и альдегиды, содержащие на один углеродный атом меньше, имели различные количественные соотношения в зависимости от характера аминокислоты. [c.89]

ПОДХОД СОСТОЯЛ в растворении аминокислот в трифторуксусной кислоте. Лизинхлоргйдрат можно было этерифицировать при 108°С м-амиловым спиртом [14, 29], через который непрерывно пропускали сухой газообразный НС1. Метиловый эфир гистидина получали в присутствии H2SO4 в качестве катализатора этерификации [84]. Все обычные аминокислоты, включая лизин и гистидин, взятые в малых количествах (менее 1 мг) [23], можно этерифицировать в среде 8 М НС1 н-пропанолом за 20 мин при 100°С. Для больших количеств лизина и гистидина (намногр превосходящих используемые в обычных анализах) необходима стадия переэтерификации. [c.105]

Так как свободные аминокислоты и пептиды недостаточно летучи, прежде чем начинать ГЖХ, их нужно превратить в летучие производные. Получение производных — это главная проблема, которая решена до сих пор еще не для всех пептидов. Часть трудностей возникает из-за того, что многие важные аминокислоты в пептидной цепи наряду с а-амино- и карбоксильными группами содержат ряд других функциональных групп. В результате получаются производные, сильно различающиеся по летучести кроме того, часто протекают осложняющие побочные реакции. Так как нет принципиальных отличий в методах получения летучих производных аминокислот и пептидов, можно ожидать, что результаты и опыт работы с производными аминокислот будут способствовать развитию аналогичных методов и для соответствующих пептидов. Пока недоступными для ГЖХ анализа являются пептиды, содержащие гистидин, аргинин или аминокислоты (подобно аспарагину и глутамину) с дополнительной функциональной амидной группой. В отличие от аминокислот при анализе пептидов исследователь встречается с особыми эффектами, вызываемыми более высокими молекулярными весами пептидов и связанной с этим пониженной летучестью. Чтобы компенсировать низкую летучесть, приходится пользоваться только такими защитными группами, которые очень устойчивы при высоких температурах, значительно увеличивают летучесть и легко доступны. Эти условия ограничивают применимость к пептидам большого числа защитных групп, используемых для аминокислот. [c.146]

До разработки метода перметилирования было показано, что пептиды, содержащие несколько трифункциональных аминокислот, могут быть подвергнуты масс-спектрометрическому анализу при условии, что дикарбоновые аминокислоты (Asp, Glu) этери-фицированы по их свободным карбоксильным группам, тирозин представлен в виде 0-метилового эфира, а лизин — е-ацилирован производные цистина и гистидина дают масс-спектры без модификации боковых цепей [25]. Только аргинин вызывает наибольшие затруднения. Шемякин и сотр. [26] показали, что арги-ниновые пептиды могут быть сконденсированы с Р-дикетонами (например, ацетилацетоном) с образованием пиримидиновых производных, которые дают хорошие масс-спектры (см. также Веттер-Дихтел и сотр. [27]). Шемякин и сотр. [26] далее показали, что обработка аргининовых пептидов гидразином приводит к образованию соответствующих орнитиновых производных. [c.217]

Связь амидного азота с у арбоксильной группой аспарагиновой кислоты и 6-карбоксильной группой глутаминовой кислоты доказана выделением аспарагина и глутамина после ферментативного гидролиза белка. Количество первичных аминогрупп в белке или в гидролизате может быть точно определено микрометодом Ван-Слайка (1911). Кислота, содержащая первичную аминогруппу, реагирует с азотистой кислотой с количественным выделением азота последний определяется манометрически. В лизине и а- и е-аминогруппы могут быть определены по Ван-Слайку, в аргинине реагирует только а-аминогруппа и не реагирует гуанидогруппа ЫН-группы пролина, триптофана и гистидина в этих условиях азот не выделяют глутамин дает 2 моль азота. Этот метод может быть применен для анализа гидролизата, осаждаемого фосфорновольфрамовой кислотой. Осадок содержит три основные аминокислоты и цистин, количество которого может быть вычислено, исходя из результатов анализа общего азота (по Кьельдалю) и опре- [c.640]

Значительную роль в полярографическом анализе, особенно нри определении благородных металлов, играют пиридин и амины, применяемые в качестве комплексообразующих веществ. В полярографии применяют следующие амины диэтиламин, эти-лендиамин, триэтансламип, гекса-метилентетрамип и другие, а также аминокислоты гистидин, с -аргипин, аланин, глутаминовая и аспарагиновая кислоты и др. Хлорид пири-диния широко используют в полярографии для определения Си, N1 и Со в сталях и, особенно, при определении № в кобальте и его солях [53], при полярографическом определении ВЬ в присутствии и 1г [54] (рис. 6). [c.376]

По данным рентгеноструктурного анализа, железопорфирины в гемоглобинах и миоглобинах локализуются в неполярных карманах вблизи поверхности белка, причем между атомами порфирина и белка имеется около 60 точек контакта, в которых атомы белка и простетической группы удалены друг от друга менее чем на 400 пм. Эти контакты включают координационную связь между железом и гистидином Р8 и водородные связи карбоксильных групп одной или обеих групп пропионовых кислот в положениях 6 и 7 порфирина. Все остальные контакты относятся к неполярным взаимодействиям, включая вандерваальсовы силы [172]. Ковалентных связей нет. Исследования влияния вариаций боковых групп порфирина, удаления металла и замены различных аминокислот в белке (в мутантных гемоглобинах) указывают на большую роль этих типов взаимодействия. [c.157]

На колонку наносят пробу аминокислот в количестве, составляющем половину пробы для 150-сантиметровой колонки. Элюцию проводят при 50° буферным раствором pH 5,28 со скоростью 30 мл час. Первым пиком из колонки выходит смесь кислых и нейтральных аминокислот, затем смешанный пик фенилаланина и тирозина после этого основные аминокислоты и аммиак в последовательности лизин, гистидин, NHз, аргинин. Удерживаемый объем последнего составляет около 115—120 мл, т. е. для анализа требуется около 4 час. Положение гистидина, как и цистина, на выходной кривой весьма чувствительно к pH буферного раствора, значение которого должно быть таким, чтобы гистидин выходил между пиками лизина и КНд. Для лучшего разделения основных аминокислот рекомендуют вместо 15-сантиметровой колонки использовать колонку длиной в 30 см. Короткая колонка работает без регенерации, так как в большинстве исследуемых смесей нет нингидринположительных веществ, сорбирующихся па колонке сильнее аргинина. При необходимости регенерировать колонку через нее пропускают 10 мл 0,35 н. раствора МаОН, содержащего детергент, а затем 80 мл буферного раствора pH 5,28. [c.135]

Укажем только на следующее для точного определения аминокислотного состава белка его нужно подвергнуть гидролизу (в вакуумированной запаянной ампуле с 6н. НС1 при температуре 110°) в течение 22 и 70 час [26]. При этом для глицина, аланина, валина, лейцина, изолейцина, метионина (с внесением поправки на 10%-е расщепление при хроматографии), фенилаланина, гистидина и лизина нужно использовать полученное при анализе содержание аминокислоты (в 22- или 70-часовом опыте). В то время как для аспарагиновой и глутаминовой кислоты, серина, треонина, пролина, тирозина и аргинина, которые частично разрушаются при гидролизе (по реакции 1-го порядка), их содержание рассчитывается путем экстраполяции на нулевое время по формуле [c.149]

Крукшанк и сотр. [31] показали, что при анализе метиловых эфиров К-ТФАпроизводных 21 аминокислоты производные всех аминокислот, кроме цистина и гистидина, давали воспроизводимость отношения площадей пиков в пределах 10% (площадь пика метилового эфира К-ТФАпроизводного аланина была принята за единицу). Воспроизводимость для десяти аминокислот была в пределах 5 %. Плохую воспроизводимость в случае цистина ( 30,0%) и гистидина ( 15,7%) авторы объясняют разложением этих соединений благодаря наличию в их молекулах реакционноспособных функциональных групп — сульфгидрильной и ими-дазольной соответственно. [c.70]

Особое затруднение при количественном анализе аминокислот в виде сложных эфиров их N-TФAпpoизвoдныx вызывает разделение гистидина и триптофана, так как каждое из этих производных элюируются двумя пиками [25, 33]. Сначала элюируются диацил-производные этих аминокислот, затем моноацилпроизводные. При анализе бутиловых эфиров К-ТФАпроизводных аминокислот на одной колонке не было получено количественного и воспроизводимого разделения аргинина, цистина и гистидина [128]. [c.70]

В 1968 г. Герке с сотр. [134] предложил для анализа указанных производных протеиновых аминокислот двухколоночную систему, в которой одна колонка служила для разделения бутиловых эфиров К-ТФАпроизводных 16 аминокислот, другая — для разделения производных аргинина, триптофана, гистидина и цистина. Гистидин в виде диацилпроизводного элюировался вместе с производным аспарагиновой кислоты, а затем диацилпроизводное гистидина было превращено на колонке в моноацилпроизводное после введения в нее бутанола. Предложенный метод давал удовлетворительные результаты разделения, но они очень зависели от точности дозировки вводимого в колонку бутанола и от конструктивных особенностей используемого прибора. [c.70]

При анализе эквимолярпого раствора аминокислот колебание значений отношений площадей пиков к соответствующим молярным концентрациям аминокислоты для моноацильного производного гистидина составляло 0,36—0,45. Метод определения гистидина в виде бутилового эфира моно-ТФАпроизводного не давал возможности точно определить для него значение коэффициента чувствительности. [c.71]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология