Углеводы электрофорез

Тейхоевые кислоты являются одним из двух высокомолекулярных веществ, составляющих основу клеточных стенок грамположительных бактерий, где они соединены со вторым, биополимером — мукопептидом клеточной стенки. Тейхоевые кислоты — особый тип биополимера. Они содержат кроме углеводов и аланина многоатомные спирты — рибит или глицерин и остатки фосфорной кислоты. Тейхоевые кислоты выделяют из клеточной стенки, где их содержание составляет 20—50%, экстракцией 5%-ной водной трихлоруксусной кислотой . Полученные этим методом образцы тейхоевых кислот имеют молекулярный вес 4000— 5000 показано, что в этих условиях выделяется уже деградированный биополимер. Если предварительно выделенные стенки бактерий подвергнуть обработке ферментом, разрывающим связь тейхоевых кислот с другим ингредиентом стенки — мукопептидом, то с помощью электрофореза можно выделить тейхоевую кислоту с молекулярным весом около 2 ООО ООО,, которая, вероятно, является нативным биополимером. Из данных кислотного, ш,елочного и ферментативного гидролиза следует, что тейхоевые кислоты содержат остатки фосфорной кислоты, аланина, многоатомных спиртов — рибита или глицерина и одного из моносахаридов — глюко- [c.584]

Метод окрашивания полисахаридов перед электрофорезом [478] использовали Павленко и Оводов [479] для анализа ряда нейтральных и кислых полисахаридов с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. Для разделения различных компонентов полидисперсных декстранов и амилопектинов с помощью диск-электрофореза ими использованы буферы, содержащие тетраборат натрия (или борную кислоту), трис(гидроксиметил)-аминометан и натриевую соль ЕВТА при pH 9,2—9,3. Электрофорез в полиакриламидном геле используют также для анализа пектиновых веществ [480] и сульфатированных полисахаридов из морских водорослей [481], однако основной областью применения данного метода в химии углеводов является исследование гликопротеинов [482] и гликозаминогликанов (483, 484]. В по- [c.75]

Изоэлектрическое фокусирование обладает наивысшей разрешающей способностью, когда-либо достигавшейся при разделении белков цо зар5 дам [58—64, 92]. Этот метод позволяет разделить белки, велйчины р/ которых различаются всего на 0,01 ед. pH. Иногда Для такого разделения бывает достаточно различия между двумя структурами на одну заряженную группу. При помощи метода изоэлектрофокусирования можно также обнаружить другй различия в зарядах, которые, строго говоря, не связаны с макроскопической егомогенностью белков. Вот некоторые из факторов, обусловливающих такие различия посттрансляционная модификация первичной структуры (например, дезамидирование), связывание лигандов, химическая модификация, вариации в небелковых компонентах, например липидах, углеводах и других простетических группах, ассоциация и диссоциация, изменения окислительно-восстановительного состояния металлоферментов. Если при анализе картины изоэлектрофокусирования иметь в виду эти факторы, то полученные данные могут приобрести дополнительную ценность, поскольку в принципе они позволяют обнаружить микрогетерогенность белковых структур. В настоящее время метод изоэлектрического фокусирования применяют в сочетании с другими электрофоретическими методами, например в сочетании с электрофорезом в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия, для получения двумерных карт разделяемых компонентов. В одном направлении производят разделение белков в соответствии со значениями их рД а в другом — в соответствии с размерами их молекул, т. е. в соответствии с их молекулярными массами. При помощи этих методов можно охарактеризовать смеси, содержащие тысячи белков [94]. Еще несколько лет тому назад разделение с таким высоким разрешением было просто немыслимо, а в настоящее время этот метод анализа находит все более широкое и все более успешное применение в различных биохимических исследованиях. [c.126]

В последнее время большое внимание уделяется специфическим белкам — иммуноглобулинам, которым придается важное практическое значение. Иммуноглобулины также должны быть отнесены к сложным белкам, так как в их состав входят от 2,9 до 12% углеводов. Иммунопротеиды обладают общими характерными сво11ствами так, при электрофорезе они распределяются главным образом в 7-глобулиновой и отчасти — в р-глобулиновой зонах (рис. 88) электрофореграммы белков сыворотки крови (см. стр. 218). Общими для них являются одинаковые принципы строения, ряд антигенных свойств, а также все они обладают активностью антител. [c.206]

Электрофорез не заменяет хроматографию, но дает очень ценную дополнительную информацию, так как разделение при электрофорезе основано на других свойствах молекул (заряд, размер, форма). Высоковольтный электрофорез на бумаге применен для разделения не только моно-, но и олигосахаридов. Этот метод может быть использован не только для производных углеводов, содержащих заряженную группу (как, например, гексуроновые кислоты, аминомоносахариды, сульфаты и фосфаты моносахаридов), но и для нейтральных соединений, способных образовывать заряженные комплексы с такими электролитами, как борат, арсе-нит или молибдат натрия. Относительные подвижности углеводов зависят от природы комплексообразователя [57]. Правильный выбор электролита часто позволяет идентифицировать углевод. Разделение кислых полисахаридов [58] проводят с помощью высоковольтного электрофореза на бумаге, нейтральные полисахариды предварительно превращают в боратные производные [59]. [c.226]

На первой стадии разрушают биологический материал. Обычно начинают с разрезания и затем механического размельчения в гомогенизаторе. Для разрыва клеточных стенок используются различные методы обработка ультразвуком, встряхивание со стеклянными шариками, растирание замороженного материала в ступке, осмотический шок, осмотический лизис дистиллированной водой, обработка поверхностно-активными веществами илн воздействие протеазами. Нежелательные составные части клеток могут быть отделены центрифугированием, нуклеиновые кислоты отделяют осаждением протаминсульфатом, углеводы — электрофорезом, липиды — низкотемпературной экстракцией органическими растворителями. [c.346]

В книгу внесены следующие крупные изменения 1) сильно расширен отдел определения витаминов, 2) добавлено определение некоторых гормонов, 3) добавлено определение ряда ферментов, 4) совершенно переработана глава об определении белков сыворотки, 5) сильно расширена глава об определении пигментов и желчных кислот, 6) добавлено определение связанных углеводов крови, 7) добавлено описание хроматографии на бумаге и электрофореза на бумаге, 8) дано описание работы с некоторыми приборами (КОЛ-1, ФЭК, СФ-4, ЭФЗ и т. п.). Многие методики заменены другими — менее трудоемкими или более безопасными. Ввиду невозможности увеличения объема книги это сделано за счет более трудоемких методик, постепенно выходящих из употребления. [c.3]

Оси. работы посвящены исследованию адсорбции и электрофореза. Создал (1931 —1935) метод фронтальной адсорбционной хроматографии, с помощью которого смог анализировать качественно и количественно смеси, содержащие аминокислоты, пептиды, углеводы. В результате проведенных им (с 1935) исследований электрофореза разработал метод электрофоретического анализа биоколлоидов с его различными модификациями (микроэлектрофорез, электрофорез на бумаге, иммуноэлектрофорез). Применил электрофоретический метод для решения ряда прикладных задач биохимии — исследования и разделения нормальной и патологической сывороток, изучения чистых белков и их смесей, ферментов, нуклеопротеидов, нуклеиновых и аминокислот и др. С помощью иммуноэлектрофореза заложил основы изучения белковой структуры нормальной сыворотки крови, выделив из нее три различных белка (теперь их обнаружено более 20). [c.428]

Электрофорез на бумаге дает возможность изучать состав различных природных смесей кислот, углеводов, аминов, алкалоидов и др. Этот метод приобрел большое значение в исследовании белков, антибиотиков, стероидов и вошел в практику биохимических и клинических лабо- [c.40]

Методом тонкослойного электрофореза на силикагеле разделены аминокислоты [129, 253, 333], пищевые красители, изготовленные из каменноугольных смол [334, 335], амины [129, 333], неорганические ионы [336, 337], нафтолы [333], фенолы [332], фенолкарбоновые кислоты [332], алкалоиды [338], пептиды [253, 339, 340] и углеводы [341]. [c.168]

Электрофоретическое разделение углеводов проводят на бумажных полосах, длина которых определяется рамкой прибора для электрофореза. При работе на приборе ЭФА-1 ленты (2,5X40 см) смачивают боратным буферным раствором с pH 9,2 и помещают на рамку прибора. Смесь углеводов наносят на полоски хроматографической бумаги (3X15 мм), которые помещают на ленты. Электрофорез проводят в боратном буферном растворе с pH 9,2. [c.86]

Была сделана попытка [18] выяснить характер связи лигнина и углеводов в этой фракции путем электрофореза на стеклянной бумаге. Для этой цели фракция была растворена в 0,4%-ном водном растворе едкого натра, а также в нейтральном растворе с фосфатным буфером и подвергнута электрофорезу. При этом растворенное вещество удалось разделить на углеводы и вещества, содержащие лигнин и углеводы. Полученные данные позволили автору работы сделать вывод о существовании в древесине химически связанного лигнингемицеллюлозного комплекса. Этот вывод можно считать достаточно обоснованным, если приготовленные для электрофореза растворы были истинными, т. е. не содержали коллоидных частиц тонко измельченной древесины. К сожалению, эта сторона эксперимента осталась невыясненной. [c.294]

Более убедительными были работы, посвященные очистке выделенных соединенрй методами хроматографии, гельфильтрации и электрофореза. Наибольший интерес в этом отношении представляет исследование лигнинуглеводных комплексов из черного щелока, полученного при сульфатной варке древесины березы [19]. Фракционным осаждением, электрофорезом в колонках с гелем хроматографией на геле удалось показать, что основная масса растворённого лигнина не содержала связанных углеводов. Однако часть лигнина выделялась вместе с гемицеллюлозами. Попытки разделить их методами электрофореза и гельфильтрации не дали положительных результатов. В процессе разделения указанными методами углеводы перемещались с лигнином примерно в одной пропорции. Отсюда был сделан вывод о существовании лигнингемицеллюлозного комплекса в черном щелоке. [c.295]

С исйользованнем аналогичной методики [28] из бамбука выделены ЛУК [29 , содержащие фе] ольные кислоты. .Tua из фракций ЛУК содержала (%) 34,7 — нейтральных сахаров, 1,6 — уроновых кислот, 52,1 — лигнина, 6,1 — фенольных кислот, а другая — 67,9, 3,6, 22,3 и 1,1 соответственно. Углеводы в выделенных комплексах представлены линейными цеиями -(l—v4)-связанных остатков ксилозы, к каждому третьему звену которой ири-соединено одно звено 4-0-метил-Л-глюкуроновой кислоты и один или два остатка арабинофуранозы. Фенольные кислоты представлены и-кумаровой и феруловой кислотами. В ЛУК имеются как щелочно-стабильные, так и лабильные связи между лигнином и углеводами. Отмечаются поверхностно-активные свойства ЛУК, объяснимые содержанием остатков гидрофильных углеводов и гидрофобного лигнина в одной молекуле. По мнению авторов работы [29], использование фракционирования на гидрофобных гелях открывает новые возможности для разделения смеси ЛУК, однородных по отношению к электрофорезу и ультрацентрифугированию ио содержанию в них лигнинной части. [c.174]

Электрофорез ведут при напряжении 2000 в (при эффективной длине полоски около 40 см градиент напряжения составляет около 50 в/см) и силе тока 25 ма в течение 90 мин. Затем полоску вынимают, сушат на воздухе и разрезают вдоль на полоски шириной 5 см, соответствующие нанесенным углеводам, и каждую полоску на участки длиной 1 см. Участки нумеруют последовательно от анодного конца полоски к катодному. Из каждого участка вещество элюируют водой в тщательно вымытые пронумерованные градуированные пробирки и элюаты разбавляют водой до 1,5 мл. В каждую пробирку прибавляют по 3 мл сульфатированного а-нафтола (раствор 0,4 г а-нафтола в 100 мл концентрирован- ной серной кислоты выдерживают 8 ч при комнатной температуре). В процессе смешивания растворы охлаждают, а затем нагревают в течение 30 мин на кипящей водяной бане. После охлаждения определяют степень поглощения раствором Светового потока при 555 ммк. Затем строят график, отражающий изменение степени поглощения света в зависимости от расстояния от анода. Возникающие пики На графике указывают положение зон полисахаридов. [c.49]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

Talaromy es emersoni Осаждение сульфатом аммония, гель-фильтрация через Сефадекс О-150, хроматография на ДЕАЕ-сефа-дексе, препаративный электрофорез Четыре эндоглюканазы с одинаковой специфичностью, активностью, отличающиеся р1, Мг, содержанием углеводов [14] [c.122]

Экстракцией 6%-ным раствором гидроксида калия из измельченных стеблей сильфии 49] выделен белково-полисахаридный комплекс, не разделяющийся в условиях гель-фильтрации и электрофореза. Оп содержал 71 %i полисахарида и более 20% белка. Для оценки взаимосвязи между полисахаридом и белком комплекс фракционировали на ДЭАЭ-целлюлозе и сефадексах G-100 и G-200. В отдельных пробах определяли содержание белка и углеводов. Белковая составляющая не отделялась от полисахаридной, но максимумы их не совпадали, что свидетельствует об отсутствии прочной химической связи между этими полимерами. Аналогичные результаты были получены при попытке расфракциониро-вать этот комплекс методом электрофореза. Количественная ха- [c.117]

Для идентификации сиаловых кислот применяется хроматография на бумаге в тонком слое силикагеля или электрофорез на бумаге Если хроматографические данные показывают, что новая сиаловая кислота отличается от всех других известных сиаловых кислот, ее выделяют и очищают методами, принятыми в химии углеводов, учитывая при этом особую неустойчивость сиаловых кислот по сравнению с другими моноса- харидами, а затем проводят функциональный анализ (в первую очередь, определение метоксильных, Н- и О-ацетильных групп). Положение заместителей в молекуле определяют обычными методами, прежде всего окислением перйодатом. [c.338]

Стефанович [151] изучал электрофорез группы углеводов (moho-, ДИ-, три- и полисахаридов) на силикагеле G, забуференном при pH 10,2, смесью на основе борной кислоты и карбоната натрия. Электрофорез проводили при 400 В и 80 мА обычно в течение 60 мин. Все углеводы движутся в сторону катода это и другие обстоятельства приводят к заключению, что движение обусловлено электроосмосом. Однако результаты испытания метода показали, что он пригоден только для ана лиза углеводов. [c.574]

Примечания. Предварительный электрофорез служит для отделения диаминокислот от углеводов и примесей аминокислот не основного характера. В отличпе от осаждения фосфорновольфрамовой кислотой электрофорез может быть проведен количественно. Электрофорез особенно полезен в тех случаях, когда гидролизат содержит большое количество пролина, который затрудняет выделение лизина в виде пикрата, пли содержит большое количеотво продуктов распада углеводов, которые препятствуют выделению аргинина и осаждению фосфовольфраматов диаминокислот. [c.43]

Сиаловые кислоты, входящие в состав гликонротеинов, защищают их от действия протеолитических ферментов, поэтому необходимо предварительно отщепить их нейраминидазой. После удаления сиаловых кислот гликопротеины частично расщепляются протеолитическими ферментами (папаин, проназа) на гликопептиды, доступные для дальнейшего исследования. Гликопептиды затем обрабатывают ферментами, отщепляющими аминокислоты (например, карбоксипептидазой после защиты конечной аминогруппы), и превращают в олигосахариды, содержащие только одну аминокислоту. Углеводные компоненты гликапро-теинов, имеющих щелочелабильную связь углевод—аминокислота, отщепляют щелочной обработкой или ферментами, разрушающими связи такого типа. Полученные таким образом гетеросахариды или гетеросахариды с одной аминокислотой очищают от примесей пептидов и аминокислот переосаждением из водноорганических смесей (вода-спирт, вода—ацетон), экстракцией фенолом, хроматографией, электрофорезом или гель-фильтрацией. [c.76]

Зонный электрофорез на бумаге может служить в качестве полезного дополнения хроматографии на бумаге при исследовании углеводов и родственных соединений. Для электрофореза незаряженных соединений используют растворы электролитов, которые образуют с углеводами заряженные комплексы, в частности обратные буферы [461], однако электрофорез проводят также в буферах, содержащих другие анионы арсенит [462], фенилборат [463], германат [464], молибдат [465—467], воль-фрамат [467, 468] и станнат [467], которые дают анионные комплексы с полигидроксильными соединениями. Описано также использование в качестве комплексообразующего агента основного тетраацетата свинца [462], который дает катионный комплекс с углеводами. Результаты изучения условий электрофореза изложены в подробных обзорах Фостера [461, 469] и Вайгеля [467], которые также содержат данные о подвижности большого числа соединений, включая альдозы, кетозы, дисахариды и продукты их восстановления, полиолы, циклиты, метилгликозиды и метилированные производные. [c.74]

При применении этого метода наносят очень небольшие количества концентрированного раствора исследуемого препарата на старт в виде узкой полосы. В результате электрофореза (может быть приложена весьма высокая разность потенциалов, поскольку в геле подавляются конвекционные токи) смесь будет разделяться на ряд зон, что позволяет получить более высокое разрешение, чем при работе по методу свободной границы. Более того, можно варьировать средний размер пор и распределение пор по размерам для некоторых поддерживаюш,их сред (крахмал, агар, полиакриламид) таким образом, что действие одного из факторов, влияюш их на электрофоретическую подвижность, а именно гидродинамического сопротивления, будет столь велико, что часть молекул будет практически неподвижной [30]. Электрофоретические подвижности в гелях или на бумаге нельзя непосредственно сравнивать с электрофоретическими подвижностями, измеренными методом свободной границы, кроме тех случаев, когда рассматриваемые молекулы малы по сравнению с размерами пор в поддерживающей среде. Компактные белки с молекулярным весом вплоть до 50 ООО легко диффундируют в 5%-ном полиакриламидном геле, и даже с веществами большего молекулярного веса можно получить хорошие результаты. Бумагу или гелевый блок нужно окрасить, чтобы показать положение различных компонентов можно также сделать перенос на подходящим образом вырезанный кусок фильтровальной бумаги, хотя эта методика часто малочувствительна. Обычные красители, применяемые для обнаружения белков (нигрозин, амидовый черный), дают удовлетворительные результаты для многих гликонротеинов, но некоторые эпителиальные вещества, которые могут представлять собой по существу углеводы (до 90%), окрашиваются довольно плохо. Было найдено, что для кислых гликонротеинов лучше применять толуидиновый голубой [32] или муцикармин [33], а алциановый голубой окрашивает как кислые, так и нейтральные гликопротеины [34]. Наиболее общей методикой окрашивания является, по опыту автора, методика Райдона и Смита [35] (хлорирование и обработка смесью крахмала и иодистого калия), но она неприменима на полиакриламидных гелях. [c.47]

Углеводы также фракционировались при помощи электрофореза. Пионером в этой области является Са-мек, но он применял метод электрорасслоения, которьп будет упомянут в этом обзоре позже. Здесь будут рассмотрены некоторые другие простые приборы для фракционирования крахмала. [c.267]

Бумажный электрофорез углеводов освещен в недавнем обзоре Вейгеля [32], электрофорез в аппаратуре Тизелиуса в статье Т. Т. Болотиной [33]. [c.8]

Наличие различных изоферментов в органеллах может быть связано и с особыми условиями транспорта белка через мембрану из цитоплазмы в матрикс органеллы. Фумарат-гидратаза (КФ 4.2.1.2) присутствует и в матриксе митохондрий, и в цитоплазме клеток млекопитающих. Митохондриальная форма при электрофорезе движется в сторону анода медленнее, чем форма цитоплазматическая, но исследование межвидовых гибридных соматических клеток указывает на то, что обе эти формы могут быть продуктами одного гена и что различия между ними являются результатом постсинтетической модификации-[4761]. Эта модификация изофермента, по-видимому, довольно незначительна, и неясно, когда она совершается, — до или после проникновения фермента в митохондрию. Вопрос о механизме, с помощью которого в естественных условиях белки проникают в окруженные мембранами органеллы, окончательно не решен особенно трудно объяснить этот процесс в том случае, когда органелла окружена несколькими мембранами [479, 4112]. Лизосомы окружены одиночной мембраной при исследовании гомогенатов печени грызунов было установлено,, что фермент -D-глюкуронидаза (КФ 3.2.1.31) присутствует и в лизосомах, и в микросомной фракции, причем, хотя изофермент-ные его формы в этих компартментах различаются, они тем не менее образуются в результате посттрапсляционной модификации продукта трансляции одного гена. Эта модификация может-состоять в нековалентном присоединении какого-то пептида [2689], в частичном протеолизе или же в присоединении углевода [3574]. Возможно, однако, что лизосомы и эндоплазматический ретикулум имеют общее происхождене, и это облегчает транспорт белка между ними. [c.111]

Смотреть страницы где упоминается термин Углеводы электрофорез: [c.33] [c.576] [c.122] [c.166] [c.169] [c.419] [c.488] [c.140] [c.82] [c.342] [c.488] [c.140] [c.22] [c.257] [c.574] [c.58] [c.488] [c.18] [c.729] [c.38] [c.198]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология