Ионообменная хроматография аминокислот колонки

Разделение свободных аминокислот в безбелковых экстрактах тканей проводят методами ионообменной хроматографии на колонках (в автоматическом анализаторе аминокислот) и хроматографии на бу- [c.194]

Ионообменная хроматография дала возможность автоматизировать анализ аминокислот, что открыло новую эпоху в биохимии белка и ряде других областей молекулярной биологии. Однако при применении классической ионообменной хроматографии на колонках чрезвычайно большую роль играет фактор време ни. Основные проблемы в методах хроматографии на колонке возникают при оценке фракционирования и проведении параллельных экспериментов. [c.242]

Смесь аминокислот разделяется методом ионообменной хроматографии на колонке, заполненной сульфированной полистирольной смолой. Колонка промывается буферными растворами с последовательным повышением нх pH и концентрации. Время удерживания каждой аминокислоты строго определенно и зависит от степени ее ионизации. [c.35]

Ионообменная хроматография аминокислот. Влияние размеров зерен смолы на показатели работы колонки [231]. [c.218]

Ионообменная хроматография на колонках применяется в трех очень важных областях 1) для качественного и количественного аминокислотного анализа пептидов и белков, дающего ценную характеристику молекул его можно использовать Как средство обнаружения некоторых специфических различий среди белков 2) для определения аминокислотного состава биологических жидкостей, который дает не только существенную информацию о наличии свободных аминокислот, но и позволяет проследить за изменениями, происходящими в организме под воздействием многих факторов, таких, как окружающая среда, физиологическое состояние и генетическая конституция 3) для определения первичной структуры белков — чрезвычайно важной задачи биохимии сегодняшнего дня. Многие исследователи занимаются определением аминокислотной последовательности большого числа разнообразных белков. Это дает возможность установить их химическую структуру и изучить ее взаимосвязь с функцией. [c.8]

Ионообменная хроматография аминокислот на колонках. Определить аминокислотный состав белка — значит установить массовое или молярное соотношение составляющих его аминокислот, для чего необходимо точно определить количество последних. Само по себе количественное определение аминокислот особых затруднений не представляет, так как для этой цели имеется несколько приемлемых способов. Основное препятствие состоит в разделении их смесей, чего, однако, избежать нельзя, поскольку пока нет методов, позволяющих определять аминокислотный состав белков без гидролиза. Поэтому полипептидные цепи белков сначала расщепляют с помощью кислот или щелочей и определяют аминокислоты в полученных смесях. ИОХ по существу представляет собой метод разделения весьма сходных по химическим и мало различающихся по физико-химическим свойствам аминокислот. В настоящее время ИОХ достигла высокой точности, составляющей 2—4% (относительных). Механизация аналитического процесса привела к созданию так называемых аминокислотных анализаторов, которые, постепенно совершенствуясь, стали полностью автоматизированными быстродействующими агрегатами, работающими по заданной программе. Разделение аминокислот, как правило, ведется на катионитах, из которых чаще всего используется сульфированный полистирол, сшитый дивинилбензолом, добавляемым при синтезе в количестве 8%. [c.189]

Разделение аминокислот и пептидов с помощью ионообменной хроматографии может быть осуществлено двумя способами путем хроматографии на колонках и методом тонкослойной хроматографии. [c.133]

При ионообменной хроматографии отношение количества носителя к образцу обычно бывает более высоким, чем при адсорбционной хроматографии. Так, например, для разделения аминокислот используют при навеске 1 мг колонки с внутренним диаметром 0,9 см и высотой 150 см, что соответствует соотношению адсорбента к иониту, равному 1 100 ООО. При препаративном разделении это соотношение колеблется приблизительно в пределах от 1 400 до 1 4000. Внутренний диаметр колонки следует выбрать с таким расчетом, чтобы его отношение к высоте составляло приблизительно от 1 50 до 1 100. Для разделения сильноосновных веществ на сильнокислом катионите иногда выгодно это соотношение уменьшить до 1 15. Благодаря изменению рП или при использовании некоторых буферных систем столб ионита может сильно набухать. Поэтому в колонке над столбцом ионита всегда оставляют достаточное свободное пространство, которое заполняется буферным раствором. [c.553]

Рааделение амино слот на ионообменниках основано на способности аминокислот образовывать соли с кислотами и щелочами. Подбирая соответствующие катиониты или аниониты, можно быстро и с успехом разделить гидролизат белка, пользуясь для этого 2,5—3,5 мг белка. Ионообменную хроматографию хорошо сочетать с элюционным или вытеснительным анализом. Мур и Штейн пользуются для этого катионитной смолой сульфополистирольного типа Дауэкс-50, через колонку которого пропускают аминокислоты последние вымывают затем соответствующими буферными растворами. Для разделения достаточно 3 мг аминокислот. [c.481]

Для понимания функции буферов, используемых в хроматографии аминокислот, важно понять, что, по мере того как аминокислоты, находящиеся в растворе на верху колонки, мигрируют вниз по смоле, на каждой теоретической тарелке или в каждой зоне колонки устанавливается равновесие. Разделение аминокислот, содержащихся в пробе, зависит от многих контролируемых факторов, таких, как размер зерна ионообменной смолы, ее химическая природа и степень поперечной сшивки, диаметр колонки и высота столбика смолы, температура колонки, заряд и величина боковой цепочки аминокислоты, а [c.21]

Для разделения и количественного определения аминокислот особенно эффективными оказались методы распределительной, адсорбционной и ионообменной хроматографии. Большое применение, в частности, получил метод Мура и Стейна, в котором исследуемый раствор пропускают через колонку, наполненную или крахмалом (твердый полярный адсорбент), или ионообменной смолой (сочетание адсорбции с ионным обменом), и затем связанные на колонке вещества вымывают с различной скоростью подходящими растворителями. Сбор и анализ отдельных фракций осуществляются при помощи автоматических приспособлений. Метод Мура и Стейна позволяет получить через 24 часа данные о полном аминокислотном составе образца белка, используя при этом только 2,5—3,5 мг белка. Для оценки эффективности и значения этого метода полезно напомнить, что старые и более грубые аналитические приемы требовали для получения данных о полном аминокислотном составе белка нескольких недель трудоемкой работы, связанной с расходованием десятков граммов белка. [c.35]

Современные методы количественного анализа аминокислот основаны на элютивной ионообменной хроматографии с использованием колонок, заполненных сульфополистирольным катионитом в натриевой форме. Этот метод аминокислотного анализа впервые предложен сотрудниками Рокфеллеровского института в США Штейном и Муром [1], которые до этого занимались разделением аминокислот на крахмальных колонках. [c.124]

Хроматографическое разделение аминокислот на листах фильтровальной бумаги [78] и на колонках с картофельным крахмалом [2] происходит главным образом благодаря различиям в их распределительных и адсорбционных характеристиках. Эти различия вызывают вариации в распределении аминокислот между стационарной и подвижной фазами, что в свою очередь приводит к разным скоростям миграции вдоль хроматограммы. Применение для хроматографии аминокислот синтетических ионообменных смол расширило возможности разделения за счет использования их ионообменных свойств в дополнение к распределительным и адсорбционным эффектам. Все аминокислоты, найденные в белках, проявляют амфотерные свойства прежде всего за счет карбоксила и аминогруппы, присоединенных к а-углеродному атому. Присутствие дополнительных кислотных или основных групп в боковой цепи аминокислоты значительно меняет ионизационные характеристики и общий заряд молекулы нри данном pH. В результате изменения pH раствора, используемого для проявления хроматограммы, происходят характерные изменения суммарного заряда всех аминокислот. Это можно использовать в качестве эффективного и чувствительного способа контроля их относительных скоростей миграции. [c.136]

Гистидинсодержащие дипептиды определяют в безбелковом экстракте мышц после разделения их методами хроматографии на бумаге, в тонком слое силикагеля или ионообменной хроматографии на колонке (в автоматическом анализаторе аминокислот). Как и все первичные амины, дипептиды можно обнаружить по реакции с нингидрином, флуорескамином и с о-фталевым диальдегидом. Карнозин, кроме того, может быть определен по цветной реакции Паули с диазотиро-ванной сульфаниловой кислотой. [c.191]

Кинетика обмена в ионообменной хроматографии аминокислот и пептидов сильно зависит от температуры. Воспроизводимый контроль температуры колонки требуется для того, чтобы получить воспроизводимые последовательность и время выхода пиков, необходимые для идентификации аминокислот или пептидов и для разделения близких по свойствам соединений. Эти контролируемые условия обычно достигаются путем циркулирования воды из термостата по рубашке колонки. Термостат снабжается контрольным термометром. Емкость термостата, мощность нагрева и скорость подачи воды насосом должны быть достаточными для поддержания температуры в рубашке колонки с точностью 0,5 °С в диапазоне 30—70 °С. Одной из тонкостей программирования температуры является скорость повышения температуры при переходе от одной температуры к другой, как это предписывается многими методиками анализа. В тех случаях, когда по методике для данного прибора требуется смена температуры, которая происходит в течение 20 мин, любой другой температурный градиент может привести к нежелательным результатам. Поэтому неудивительно, что некоторые методики не удается воспроизвести на сходных приборах, если режимы изменения температур не одинаковы. Целесообразно включать градиентное термостатирование в основную кoн tpyкцию анализатора. [c.28]

Данные по аминокислотному составу, включенные в настоящие таблицы, получены в основном с помощью ионообменной хроматографии на колонках (ИОХ) [1, 9, 54, 55] и микробиологического метода [11, 25, 30, 70], основанного на ограничении роста специально подобранных микроорганизмов на питательной среде, не содержащей той или иной аминокислоты, которая в этом случае становится лимитирующим фактором [И, 25. 30]. При определении какой-либо аминокислоты к питательной среде, не содержащей ее, добавляют исследуемый гидролизат. Об интенсивности роста микроорганизма судят по нарастанию кислотности среды (или по степени помутнения последней), которое измеряют соответствующим способом (титрование, нефелометрия). Основываясь на зависимости ростопой реакции от содержания в среде лимитирующей аминокислоты, строят графики для количественного определения аминокислот. [c.188]

Параллельно с исследованиями Эллиотта были проведены работы по выделению и очистке брадикинина, образующегося из бычьей плазмы при действии змеиного яда. С этой целью Прадо и сотр. [1764], а также Андраде и сотр. [54] использовали хроматографию на колонке с окисью алюминия и целлюлозой, а Андраде и Роша э Сильва [55] — ионообменную хроматографию на колонке с амберлитом ЩС-50 (ХЕ-64). Наибольшего успеха достигли Хамберг и сотр. [921, 926, 927], применявшие хроматографию на колонке с амберлитом ШС-50 (pH 5), препаративный электрофорез и хроматографию на бумаге. Аминокислотный анализ выделенного таким образом чистого полипептида показал, что последний содержит те же аминокислоты и в таких же соотношениях, что и трипсиновый брадикинин. Тщательное сравнение фармакологических свойств показало, что оба брадикинина, образующиеся при гидролизе белков как змеиным ядом, так и трипсином, идентичны синтетическому бради-кинину. Сообщение о выделении брадикинина из продуктов инкубации бычьей плазмы со змеиным ядом было опубликовано также Зубером и Жаком [2680]. [c.106]

Содержащиеся в речной и в морской водах аминокислоты могут быть как естественной примесью, так и следствием биологического загрязнения воды. Их можно концентрировать и выделять из воды путем адсорбции на сильнокислотной катионообменной смоле при низких значениях pH среды. Затем, если необходимо, их можно разделить методами ионообменной хроматографии на колонке с катионитом, тонкослойной хроматографии или хроматографии на бумаге, используя общепринятые методики. Согласно типичной методике [62], образцы воды объемом 1 л пропускают через небольшую колонку, заполненную Н+-формой сильнокислотной катионообменной смолы. Аминокислоты затем вымывают небольшим объемом концентрированного водного раствора аммиака. Элюат выпаривают досуха и фотометрически с использованием реагента нингидрин — хлорид кадмия рпределяют суммарное со- [c.514]

В результате расщепления белка или полипептида, каким бы методом оно ни осуществлялось, всегда образуется смесь пептидов. В среднем наиболее короткие пептиды получают при химотрипсиновом гидролизе, а наиболее длинные — при обработке бромистым цианом (так как содержание метионина в большинстве белков очень мало по сравнению с суммарным содержанием крупных гидрофобных аминокислот). При фракционировании смесей пептидов наилучшие результаты дает метод ионообменной хроматографии на колонках. Если для разделения используют смолу дауэкс I или другую, сходную смолу основного характера, а для элюции — ниридин-ацетатный буфер с постепенно понижающимся значением pH (8—3), то первыми с колонки выходят основные пептиды наиболее кислые выходят последними (фиг. 12). Обратный порядок элюции имеет место при [c.72]

В одном из экспериментов по сишезу аминокислот в качестве исходных реагентов были использованы гидрохлорид гидроксил-амина (в табл. 17 указан возможный способ его образования в условиях первобытной Земли) и полиоксиметилен [27]. В типичном эксперименте готовили водные растворы, содержащие оба реагеша в концентрации 0,25 моль/л каждый. Затем эти растворы нагревали в пробирках из стекла пирекс. Исследовання проводили при разных температурах, pH, концентрациях и соотношениях реагентов. Исследовалась также временная зависимость пара.мет-ров реакций и возможная роль неорганических катализаторов. Для разделения продуктов применяли ионообменную хроматографию иа колонках. Аминокислоты идентифицировали по темпера- [c.170]

Разделение аминокислот характеризуют величиной Я, зависящей от диаметра частицы ионообменной смолы, длины колонки и линейной скорости элюата [12] 7 1й 112Иу1 , где —диаметр частицы, 7 —длина колонки и V — скорость потока. Для высокого разрешения необходимы длинные колонки с мелкой смолой, но такая колонка оказывает большое сопротивление потоку элюента. Это обстоятельство наряду с необходимостью элюировать аминокислоты с воспроизводимым временем удерживания после начала хроматографии требует использования насоса постоянного давления для контроля за потоком элюента с необходимой постоянной скоростью. [c.261]

В последнее время появилась возможность определять аминокислотный состав белков с помощью автоматических аминокислотных анализаторов. Когда в 1948 г. Мур и Стейн [551 в дополнение к классическим методам органической химии, а также манометрическому и бактериологическому анализу ввели ионообменную хроматографию, наступил поворотный момент в развитии химии аминокислот. В основу работы созданных сотрудниками Рокфеллеровского института современных автоматических аминокислотных анализаторов была положена ионообменная хроматография. Принцип работы этих приборов заключается в следующем. Исследуемый белок гидролизуют, затем гидролизат подвергают хроматографии на смоле типа дауэкс 50 х8 в Na-форме. Элюирование производят с помощью непрерывной подачи буферного раствора. Выходящий из колонки элюат попадает в пластмассовую ячейку особой формы, где он смешивается с раствором нингидрина. Подачу нингидрина осуществляет специальный насос, работающий синхронно с насосом, подающим буферный раствор на колонку. Затем смесь элюата с нингидрином проходит через тефлоновый капилляр, который погружен в кипящую баню. В этих условиях в растворах происходит нингидриновое окрашивание, интенсивность которого измеряется в проточной кювете спектрофотометрически. Поглощение света регистрируется самописцем. Применение сферических смол [80] позволило сократить время исследования одного образца примерно в четыре раза, а использование особых ячеек сделало вполне допустимыми для анализа очень малые количества исследуемого вещества — порядка 0,01—0,05 мкмоля [38]. Введение одноколоночной процедуры значительно упрощает метод [9, 29, 43, 60]. С помощью этой методики в одной и той же пробе можно определить кислые, нейтральные и основные аминокислоты, что не только экономит исследуемый материал, но и повышает точность и сокращает время исследования. Работая на стандартном аминокислотном анализаторе и пользуясь некоторыми модификациями известных методов, можно полностью закончить анализ одного вещества в течение 3 ч [91. [c.32]

Ароматические и основные аминокислоты на пластинке Фик-сиоц 50 X 8 разделяются при одномерной хроматографии в цитратном буферном растворе pH 5,23 с концентрацией Ыа" 0,35 М (буферный раствор В, табл. 10), который используется в двухколоночной системе аминокислотного анализатора. Типичная хроматография такого разделения представлена на фиг. 49. Колебания pH и концентрации буферного раствора не существенны для фракционирования. Хроматографию проводят при комнатной температуре без предварительного уравновешивания. В камеру наливают слой буферного раствора высотой примерно 1 см. При хроматографии фронт буферного раствора должен подняться на высоту 15 см. Если пластинка не уравновешена, на это уходит около 2 ч. На уравновешенной пластинке (см. буферный раствор для уравновешивания, табл. 10) это происходит за несколько ми-нут. На примере разделения ароматических и основных аминокислот можно оценить Лиз высокую разрешающую спо-Гис обность ионообменной хроматографии в тонком слое по сравнению с соответствующей колоночной техникой. Известно, что на малой колонке в этом же буферном растворе (т. е. 0,35 М Ыа+, pH 5,23) ароматические аминокислоты не отделяются друг от друга. [c.250]

Фактически единственным способом разделения смесей ами-носахаров и/или сложных смесей амнносахаров и аминокислот является ионообменная хроматография. Для промывания колонок с ионообменной смолой применяют разбавленную соляную [c.96]

Созданию современной аналитической хроматографии аминокислот предшествовало два очень важных события — разработка методов получения химически гомогенных белков (школа Норт-ропа, середина 30-х годов [1]) и организация промышленного производства ионообменных смол с последующим развитием ионообменной хроматографии (50-е годы). В промежуточный период были разработаны адсорбционная и распределительная хроматографии аминокислот (на бумаге и на колонках с сорбентами), оказавшиеся, однако, непригодными для решения практических задач. Так колоночная хроматография не нашла применения, главным образом, из-за несовершенства имеющихся в то время сорбентов, в основном природного происхождения. Тем не менее благодаря тщательному подбору условий анализа В. Стейну и С. Муру, лауреатам Нобелевской премии за 1972 г., удалось добиться вполне удовлетворительного разделения смеси аминокислот [2]. Однако этот метод оказался слишком трудоемким и также не нашел широкого применения, поскольку требовалась тщательная стандартизация крахмала, хроматографические свойства которого зависят от источника выделения и метода получения. [c.305]

В связи с быстрым развитием хроматографии аминокислот на сульфокатионитах использование других ионитов носит ограниченный характер. На начальных этапах ионообменной хроматографии для разделения аминокислот пытались использовать амберлит IR -50 [23, 24]. К недостаткам этого катионита относятся трудности уравновешивания колонки, и необходимость соблюдения точных значений pH образца. Сильноосновный анионит дауэкс 2-Х10 находит применение для разделения аспарагиновой и глутаминовой кислот, а также их производных [25]. На анионитах сильнее других аминокислот удерживаются ци-стеиновая кислота, фосфосерин и подобные им вещества, которые, следовательно, можно отделять и получать в чистом виде. Как и в случае сульфокатионитов, степень разделения на анионитах зависит от диаметра частиц, их однородности, степени. сшитости и других факторов. [c.334]

Основными задачами препаративной хроматографии амино кислот являются разделение максимальных количеств материала, выделение чистых аминокислот и, наконец, разработка и использование предельно простых методик. В отличие от аналитической хроматографии здесь вполне допустимы те или иные потери материала. Наибольшей емкостью в отношении аминокислот обладают сорбенты, используемые в адсорбционной хроматографии. В той или иной форме этот метод используют для разделения аминокислот на колонке с активированным углем (в виде фронтального, элютивного или вытеснительного анализа). Разработка этого метода связана главным образом с именем А. Тизелиуса [86]. Таким методом удобно отделять ароматические аминокислоты [87, 88], однако по эффективности этот метод значительно уступает ионообменной хроматографии. [c.355]

Ионообменную хроматографию можно применять для разделения водорастворимых ДНФ-аминокислот. Хейнрих и Бугна [12] проводили разделение на термостатированной (50 °С) колонке (длиной 15—20 см) с катионитом амберлит ШС-50 (Bio-Rex 70 Na+ —400 меш), элюируя стандартным буферным раствором (pH 5), предназначенным для работы на анализаторе аминокислот Te hni on, со скоростью 0,5 мл/мин. Оптическую плотность элюата регистрировали при К 360 нм на проточном денситометре. ДНФ-аминокислоты появлялись на выходе колонки (через 30 мин — 1 ч) в следующем порядке ос-ДНФ-ли-зин, 8-ДНФ-лизин, ДНФ-аргинин, ди-ДНФ-гистидин, ДНФ-трип-тамин, ди-ДНФ-лизин. При использовании анализатора Te hni on нижний предел определения составляет 0,01—0,05 мкмоля. [c.365]

Разделение аминокислот методом ионообменной хроматографии. Анализ смеси аминокислот начинают с разделения этой смеси на компоненты методом ионообменной хроматографии. Небольшое количество смеси вносят в вфхнюю часть колонки, заполненной частицами полистирола, содержащими остатки сульфоновой кислоты (см. рис. 5-14). Затем через колонку пропускают буферный раствор. Аминокислоты проходят через колонку с разными скоростями, поскольку их движение тормозят два фактора 1) электростатическое притяжение между отрицательно заряженными остатками сульфоновой кислоты и положительно заряженными функциональными группами аминокислот и 2) гидрофобное взаимодействие между боковыми цепями аминокислот и сильно гидрофобным остовом полистирольной смолы. Для каждой из выписанных ниже пар аминокислот определите, какая аминокислота данной пары будет сходить с колонки первой (т.е. испытывать наименьшее торможение) при пропускании через колонку буфера с pH 7,0. [c.136]

В ионообменной хроматографии соединения разделяются в-соответствии с их зарядом. Например, карбоновые кислоты, которые диссоциируют с образованием анионов КСОг , оченз медленно проходят через колонку с анионообменной смолой (например, имеющей группы —М(СНз)зС1 ), тогда как нейтральные или положительно заряженные частицы проходят быстрее. В случае катионообменной смолы нейтральные и отрицательно заряженные частицы проходят быстро, тогда как катионы за-де рживаются дольше. Аминокислотный анализатор (машина длж автоматических анализов смесей аминокислот, см. гл. 12) основан на ионообменной хроматографии. [c.61]

После полного гидролиза белка производится количественное онределе-ние каждой из аминокислот, присутствующих в гидролизате. Для разделения аминокислот чаще всего применяется метод ионообменной хроматографии. В качестве ионообменника обычно используют сульфополистирольный катионит. Смесь аминокислот вносится в верхнюю часть колонки при pH 3 в этих условиях индивидуальные аминокислоты полонштельно заряжены. Аминокислоты в форме катионов сорбируются на сульфополистирольной смоле (содержащей группы — SOg Na ), замещая часть ионов натрия, и удернги-ваются на материале колонки электростатическими силами. Очевидно, что прочность сорбции аминокислоты возрастает с увеличением ее основности. После внесения смеси начинается элюция аминокислот при постепенном увеличении pH и 1тонной силы буферных растворов, пропускаемых через колонку. В этих условиях положительный заряд на аминокислотах постепенно нейтрализуется и ионные взаимодействия ослабляются. Первыми с колонки снимаются кислые аминокислоты (глутаминовая и аспарагиновая кислота), затем нейтральные и, наконец, основные. С помощью этого метода можно разделять все аминокислоты, обычно встречающиеся в белках, поскольку прочность сорбции аминокислоты смолой зависит как от ионных, так и от неионных взаимодействий. Сульфополистирольный катион адсорбирует аминокислоты достаточно избирательно, так что все нейтральные аминокислоты, которые нельзя разделить с помощью ионного обмена, тем не менее элюируются с колонки в разных фракциях. Индивидуальные аминокислоты, элюируемые с колонки, собираются автоматическим коллектором фракций. Затем их количественно определяют путем измерения интенсивности окраски, возникающей при действии нингидрина. В настоящее время промышленность выпускает несколько типов автоматических амино- [c.57]

В принципе почти все ионообменные разделения могут быть в той или иной степени автоматизированы, однако, как и следовало ожидать, до сих пор развитие автоматических методов почти полностью сосредоточено на длительных и трудоемких разделениях аминокислот и сахаров, определение которых является важной частью биохимических и клинических исследований. Различается два основных уровня автоматизации оборудования для ионообменной хроматографии а) автоматизация последовательности операций от загрузки пробы в колонку до колориметрического измерения и регистрации концентраций разделенных компонентов и 6) автоматизация не только разделения и регистрации данных, но и последовательной загрузки ряда проб после каждого законченного aнaJ изa. Ниже описываются примеры автоматического оборудования для ионообменной хроматографии обоих типов с указанием классов анализируемых соединений. [c.285]

Бах И Феллиг [52] и Бах [53] не согласились с выводом о том, что неизвестные метаболиты 1 и 3 представляют собой белковые комплексы 2,4-Д. Так же как и Яворски и Баттс [47], они нашли, что через несколько дней после обработки основная часть 2,4-Д превращается в биологически неактивный комплекс, который хроматографируется на бумаге медленнее, чем 2,4-Д [52, 54]. При кислотном гидролизе этого комплекса образуется вещество с близким к R 2,4-Д. Дальнейшие исследования [53, 55] показали, что этот комплекс — главный меченый компонент фракции экстрактов фасоли, растворимых в воде и нерастворимых в эфире, — состоит из нескольких меченых метаболитов, которые были разделены на колонке с древесным углем [55]. Сложный состав подтверждают также результаты хроматографии на бумаге на хроматограммах проявилось по крайней мере шесть главных компонентов [53]. При гидролизе каждого из этих шести компонентов получался ряд аминокислот и два меченых соединения, растворимых в эфире и идентичных двум главным компонентам растворимой в эфире фракции экстрактов фасоли. Среди продуктов гидролиза определены 10 аминокислот. Бах [53] считает, что нерастворимые в эфире меченые продукты метаболизма 2,4-Д не являются полипептидами или белками, как это предположили Баттс и Фанг [51], так как их поведение при ионообменной хроматографии, хроматографии на бумаге и экстракции органическими растворителями противоречит этому предположению. По мнению Баха, истинные метаболиты были все еще загрязнены относительно большими количествами связанных аминокислот, например амидами, образованными аминокислотами с различными продуктами обмена веществ в растении. По этой причине могла отсутствовать прямая корреляция между аминокислотами, которые идентифицируются после гидролиза различных меченых фракций, и аминокислотами, которые, как полагают, связаны с мечеными кислотами, образующимися из [c.20]

Ионообменная хроматография. Разделение смесей аминокислот на колонках с ионообменниками впервые было предложено Штейном и Муром в качестве ионообменника применялся крахмал Позднее крахмал был заменен ими на синтетическую смолу дауэкс 50x4, которая представляет [c.67]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология