Конформационные изменения, анализ

Полная структура конканавалина А была установлена методом рентгеноструктурного анализа [93, 94] (рис. 5-7). Этот белок представляет собой тетрамер, состоящий из субъединиц с мол. весом 27 500. При рН 5,8 он диссоциирует на димеры. Строение конканавалина А не совсем обычно, поскольку он не содержит а-спиральных участков. Каждый мономер состоит из 237 остатков, 57% которых образуют трехслойную р-структуру (рис. 5-7, В). Белок не связывает углеводы до тех пор, пока не будут заняты два участка, связывающие металл. Возможно, что для образования участка, связывающего углевод, необходимо конформационное изменение белка, которое происходит только в процессе его связывания с ионами. [c.379]

Поразительная специфичность действия ферментов привела к созданию теории замка и ключа, согласно которой для протекания реакции необходимо точное структурное соответствие между субстратом и активным центром фермента. Проведенные эксперименты убедительно доказали адекватность этой идеи, однако сама теория претерпела существенное изменение. Считается, что если фермент — это замок , а субстрат — ключ , то введение ключа в замок часто индуцирует конформационные изменения в молекуле белка. Имеется множество работ, в которых показано, что фермент укладывается вокруг субстрата, обеспечивая более точное соответствие подгоняемых структур. В пользу этого говорят данные по изменению спектров кругового дихроизма, спектров поглощения в УФ-области и констант седиментации, а также результаты исследования структуры комплексов ферментов с ингибиторами методом рентгеноструктурного анализа. Как мы уже видели ранее (гл. 4, разд. Д, I), идея индуцированного соответствия оказывается весьма плодотворной и при обсуждении взаимодействий субъединиц. [c.42]

О конформационных изменениях полимеров часто можно судить по-изменению спектров поглощения ароматических боковых цепей аминокислот, а также пуриновых и пиримидиновых оснований (рис. 2-28). Другими ценными методами являются инфракрасная спектроскопия раман-спектроскопия, флуоресцентный анализ и КД-спектроскопия все эти методы рассматриваются в гл. 13. [c.191]

Влияние, которое оказали результаты рентгеноструктурного анализа белков на изучение их фракций, детально рассматривается в следующем томе настоящего издания. Здесь хотелось бы обратить внимание на то, что наличие уже в течение нескольких десятилетий уникальной структурной информации все еще не привело к концептуальному развитию или переосмыслению представлений о природе и принципах функционирования белков, сложившихся до становления кристаллографии макромолекул. Ставшие доступными данные рентгеноструктурного анализа о пространственном строении белковых молекул не вызвали качественных изменений в понимании биокатализа, гормон-рецепторных взаимодействий и многих других явлений. Функционирование биосистем молекулярного уровня не обрело строгой трактовки в рамках сформулированных ранее концепций ферментативных и иных реакций, равно как и последние не получили на основе структурных данных своей объективной оценки. По-прежнему, фундаментальные различия между обычными химическими реакциями в растворе и реакциями, осуществляемыми ферментами, продолжают видеться в напряжении и деформации субстрата при его сорбции в активном центре в сторону переходного состояния, в индуцированном соответствии и принудительных конформационных изменениях фермента, в его изна- [c.75]

Рассмотрим конкретный пример, где использовался шумовой анализ. Работу ионного канала могут регулировать различные параметры его проводимость ограничивается либо скоростью, с которой молекула медиатора (в случае постсинаптического канала) диффундирует от рецептора или деградирует, либо реакцией канала на сигнал. В настоящее время принято считать, что конформационные изменения мембранных белков обусловливают изменение проницаемости в мембране нерва. С помощью шумового анализа было показано, что в случае постсинаптического ацетилхолинового рецептора закрывание канала в большей степени, чем удаление и гидролиз ацетилхолина, определяет продолжительность тока через концевую пластинку. [c.127]

Первым по значимости методом определения структуры белков в нативном кристаллическом состоянии, несомненно, является рентгеноструктурный анализ. Действительно, сейчас даже трудно себе представить какой-либо другой метод, с помощью которого было бы можно определять тысячи параметров, необходимых для решения этой труднейшей, но интереснейшей задачи. Для изучения белков в растворах необходимы, однако, другие методы. В прошлом для определения конформаций белков и конформационных изменений, мест связывания субстрата с кофактором, изучения ферментативной специфичности и решения многих других вопросов, касающихся структуры и функции белков, применялись самые разнообразные химические и физические способы. С их помощью получен большой объем сведений. [c.347]

П1.10. Влияние конформационных изменений макромолекул при межфазных переходах на результаты ГПХ-анализа [c.114]

Оценка относительной термодинамической устойчивости углеводородов, основанная на данных конформационного анализа, напротив, дает возможность точно учитывать все отмеченные выше изменения особенностей строения и, таким образом, в некоторых случаях весьма точно оценить термодинамические параметры реакции изомеризации. К сожалению, энергетические параметры реакции изомеризации по своей природе часто лежат вне пределов конформационного анализа, а степень точности данных, получаемых иным путем, пе сопоставима с высокой точностью, достигаемой оценкой конформационных изменений. Сюда относятся реакции, связанные с появлением (или исчезновением) в алканах новых заместителей, т. е. реакции, ведущие к изменению числа третичных или четвертичных атомов углерода. Положение осложняется еще тем, что энергетический эффект таких реакций значителен, а также весьма неодинаков для различных структурных изменений. Поэтому приходится использовать для расчетов какие-то средние величины. Таким образом, применение данных конформационного [c.63]

Таким образом, проведенный выше анализ показывает, что вклад в энтропию плавления полиэтилена от конформационных изменений является наибольшим, однако экспериментально точно он еще не определен. [c.87]

Несмотря на то что в растворе Си(П)-замещенный фермент связывает субстрат [85], этот аналог КПА не обладает ферментативной активностью. Однако методом рентгеноструктурного анализа при низком разрешении комплекса Си(П)КПА с глицил-ь-тирозином показано, что при связывании субстрата отсутствуют конформационные изменения глутамата-270 (рис. 19). Это наблюдение подтверждает, что при Си(П)-замещении изменяются стерические [c.87]

Различия в конформации разных белков и конформационные изменения, сопровождающие связывание лигандов или изменение окислительного состояния железа обнаруживаются методом рентгеноструктурного анализа. Некоторые примеры уже были приведены в разд. 7.4. Ниже мы опишем еще несколько примеров (см. также работу [94]). Различия структуры вокруг дистального координационного центра включают наличие или отсутствие групп, способных образовать водородную связь (разд. 7.4), т. е. они отражают явные различия сольватации лиганда. О конформационных переходах и различиях в конформации разных белков можно судить также по данным ЯМР, спектрам кругового дихроизма и дисперсии оптического вращения (см., например, работу [204] и ссылки в работе [8]). Особенно интересен тот факт, что связывание СО или кислорода вызывает существенные изменения спектров кругового дихроизма гемоглобина, небольшие изменения спектра кругового дихроизма изолированных химически модифицированных р-це-пей и совсем не влияет на спектры миоглобина или изолированных и химически модифицированных а-цепей [41]. Этот результат представляет собой веский аргумент в пользу предположения о том, что белок имеет более гибкую структуру в гемоглобине, чем в миоглобине. Такой вывод подтверждается и при исследовании моделей этих двух белков [169]. Различная гибкость, вероятно, связана с тем, что в гемоглобине атом железа может далеко выходить за пределы плоскости порфиринового кольца, тогда как в миоглобине такое искажение структуры гема не наблюдается (табл. 14). [c.174]

Рассмотренные примеры указывают на то, что нужное осторожностью применять данный метод к структурному анализу, но что в то же время чувствительность оптической активности эфиров азотистой кислоты к небольшим конформационным изменениям будет весьма полезной при структурных исследованиях. [c.208]

Эпштейн и Хаген [38] использовали концепции классической кинетики ферментов для анализа поглощения рубидия отрезанными корнями ячменя. Оказалось, что калий конкурентно ингибирует поглощение рубидия, тогда как натрий при низких и умеренных концентрациях не оказывает такого эффекта. На основании этого и ряда других фактов было сделано предположение, что переносчик, локализованный в мембране, обратимо соединяется с ионом на внешней стороне мембраны, а образующийся комплекс переносчик — ион проходит через мембрану (которая считается очень слабо проницаемой для свободных ионов), после чего благодаря химическому изменению молекулы переносчика ион освобождается во внутренний отсек или пространство. Ион теперь не может вернуться обратно во внешний раствор, во-первых, из-за непроницаемости мембраны и, во-вторых, из-за отсутствия сродства иона к переносчику, который на внутренней стороне мембраны имеет иную конфигурацию. В действительности переносчик, по-видимому, действует циклически, как транспортный фермент. В процессе переноса химическим или конформационным изменениям подвергается активный агент (переносчик), а не субстрат, на который он действует (ион). Можно предположить несколько иной механизм, который мы не способны были бы отличить от только что описанного он состоит в следующем. Мембрану можно рассматривать как макромолекулу, первоначально связывающую субстрат(ион)в участке своей поверхности, обращенной к внешнему раствору. Транспортирующий фермент перемещает ион [c.265]

Поскольку физические методы исследования конформационных изменений непрерывно совершенствуются, важно будет изучить прямыми методами влияние ингибиторов на сами ферменты. Даже сейчас в тех немногих случаях, когда есть возможность исследовать фермент в стехиометрической концентрации с субстратом, можйо было бы использовать прямые тесты для оценки влияния ингибитора. Таким путем можно обойти и другие трудности ингибиторного анализа. [c.84]

Выще температуры стеклования возможны три процесса— плавление, реорганизация и рекристаллизация. Так же как и в стеклах, изменения в энтальпии, возникающие вследствие конформационных изменений, более значительны, чем изменения в теплоемкости из-за перестройки вида колебания. Различные морфологические структуры в полимерах претер певают различные медленные изменения при нагревании. Равновесные кристаллы образованы полностью вытянутыми цепями. При нагревании процесс плавления протекает настолько медленно, что даже при малых скоростях нагревания к кристаллу подается больше тепла, чем может быть использовано при плавлении. В результате этого внутренние слои кристаллов временно перегреваются, пока расплавленная поверхность кристалла не достигнет его сердцевины. По перегреву кристаллов к настоящему времени выполнено мало работ и не сообщалось никаких калориметрических данных. Анализ полимерных кристаллов затруднен тем, что они обладают различной толщиной. До сих пор не удалось провести эксперименты на монокристаллах. Качественно можно утверждать, что длина и толщина кристалла влияют на перегрев. В экспериментах по изотермическому плавлению было установлено, что зависимость доли еще закристаллизованного вещества Шс от логарифма времени для большинства подвергнутых анализу полимеров выражается следующим эмпирическим соотношением [c.152]

Начало и раннее развитие конформационного анализа в органической химии в Англии [65 делают особенно подходящим рассмотрение здесь той роли, которую играют КД и ДОВ в стереохимии. Огромные возможности метода ДОВ при изучении конформаций и чувствительность этого метода к малейшим изменениям конформации были достаточно давно отмечены в работах [19, 26, 34, 66, 67]. За прошедшие с того времени годы появилось так много статей, посвященных обнаружению или описанию конформационных изменений, что в рамках этой лекции невозможно дать даже краткий их обзор. Поэтому будет приведено всего несколько примеров, которые позволят показать цель и направление работ, проводимых в этой области. Самый важный вклад дисперсия оптического вращения (и, следовательно, круговой дихроизм) вносит в изучение конформаций. Лучше всего показать это на простом примере. [c.31]

Каталитическую активность а-химотрипсина нельзя приписать исключительно наличию системы переноса зарядов. Из рентгено структурных исследований следуют многие другие факторы, от ветственные за каталитический процесс. Было обнаружено де вять видов специфических ферментсубстратных взаимодействий которые повышают эффективность а-химотрипсина. Например стабилизация тетраэдрического интермедиата, а следовательно понижение энергетического барьера переходного состояния, со провождается образованием водородной связи между карбониль ной группой субстрата и амидным атомом Ser-195 и Gly-193 В химотрипсиногене эта водородная связь отсутствует. Действи тельно, уточнение структур химотрипсиногена и а-химотрипсина с помощью рентгеноструктурного анализа показывает различия в расположении каталитической триады в зимогене и ферменте. Это конформационное изменение в общей трехмерной структуре фермента, возможно, вызывает значительные изменения химических свойств каталитического центра, что может играть важную роль в увеличении ферментативной активности при активации зимогена. [c.221]

Во второй части работы предлагается выяснить, определяются ли конформационные изменения аураминсвязывающего участка состоянием активного центра той субъединицы, на которой находится этот участок, или конформационная взаимосвязь существует между активным центром одной субъединицы и аураминсвязывающим участком другой. Для решения этого вопроса проводится теоретический анализ [c.340]

Рамановская спектроскопия все более интенсивно применяется для анализа биологических систем благодаря возможности изучения малых объемов и водных растворов. Конформационные изменения белков, нуклеиновых кислот и пептидов в липидах и мембранах можно легко отследить in situ (т. е. в естественном состоянии), поскольку вода почти неактивна в КР-спектре. Многие биологические образцы флуоресцируют, поэтому для получения КР-спектров следует применять КР-спектрометры с фурье-преобразованием (почему ). [c.197]

Молекула тропонина состоит из трех полипептидных цепей с мол. массами от 18 000 до 37 000 дальтон. Один полипептид (Т) прочно связывает тропонин с тропомиозииом в участке, расположенном приблизительно на одной трети расстояния от С- до N-конца, со стороны С-конца. Второй полипептид (I), входящий в состав тропонина, взаимодействует с актином в отсутствие ионов Са + и работает вместе с остальными двумя полипептидами, удерживая тропомиозин в таком положении, в котором он ингибирует гидролиз АТР. Когда третий полипептид (С-субъединица) присоединяет ионы кальция, то ингибирование прекращается и может начаться сокращение. Однако общая картина функционирования всей этой машины остается непонятной. По данным рентгеноструктурного анализа и электронной микроскопии [93, 94], при связывании кальция с тропонином тропомиозин отклоняется от S1 примерно на 20°, открывая активный центр для взаимодействия миозин — АТР—актин (рис. 4-24). Возможно, тропомиозин катится наподобие ролика вдоль поверхности актина, открывая центры одновременно в семи молекулах актина Если это действительно так, то какого рода мотор используется при этом и что не позволяет ролику упасть с актина Обо всем этом мы может только догадываться. Вполне возможно, что боковые цепи отдельных аминокислотных остатков тропомиозина, выступающие наподобие зубцов на субмикроскопической шестеренке, входят в комплементарные углубления актина. Тогда возникает вопрос почему связывание иона кальция с тропомиозииом приводит к тому, что тропомиозии начинает катиться , как ролик, по актину Мы знаем, что присоединение металлов к белкам может приводить к очень сильным конформационным изменениям (разд. В.8.в). Не исключено, что конформационное изменение С-субъединицы тропонина [c.325]

Метан имеет вполне определенную конфигурацию и не имеет конформационных изомеров. Этан является простейшим алканом, для которого возможна конформационная изомерия два углеродных атома связаны простой углерод-углеродной связью, вокруг которой возможно (и происходит) вращение. В 1930-х годах было обнаружено, что это вращение не является свободным и незаторможенным, и это явилось мощным толчком в развитии конформа-ционного анализа ациклических и алициклических молекул [21]. При этом вращении в этане происходят конформационные изменения, и если взглянуть вдоль оси углерод-углерод в ньюменовских проекциях, то четко видны различные конформации (рис. 2.1.2). [c.77]

Этим функции белка как фермента или апофермента скорее всего не исчерпываются. Все рассмотренные ме-чанизмы предполагали достаточно статичное расположение функциональных групп белка в активном центре Это не совсем верно. Взаимодействие с субстратом нередко сопровождается изменением конформации белковой молекулы, и согласно теории, выдвинутой Кошландом, направленные конформационные изменения белка являются важным фак1чэром ферментативного превращения. В отдельных случаях такие изменения зарегистрированы с помощью рентгеноструктурного анализа. Например, карбоксипептидаза А была подвергнута рентгеноструктурному анализу как в отсутствие субстрата, так и в комплексе с глицил-1/-тирозином. Полость, в которой находится активный центр, существенно сужается при связывании этого субстрата, т.е, наблюдается отчет ливый конформационный переход. Кроме того, широко дискутируется и имеет в отдельных случаях убедительные подтверждения гипотеза, согласно которой фермент фиксирует субстрат в конс юрмации, существенно более близкой по своей геометрии к активированному комплексу реакции, чем конформация субстрата, преобладающая у несвязанных молекул. Это, естественно, должно приводить к снижению активационьюго барьера реакции и способствовать существенному ускорению превращения. [c.208]

Если мономерной единицей нуклеиновых кислот считать нуклеотидное звено, то для описания его конформации следует учитывать возможность вращений вокруг шести связей (рис. 186). Кроме того, иадо принимать во внимание положение основания относительно углеводной части, которое определяется вращением вокруг N-гликoзиднoй связи, и конформационные изменения фу-ранозиого цикла. Все это делает конформационный анализ нуклеиновых кислот весьма сложным. [c.330]

Чтобы понять значение этих данных, полезно рассмотреть изменения энергии электрона на его пути через первый комплекс Грина (4.19). Перенос электрона через ряд переносчиков от NADH до N-2 не сопровождается изменением его энергии. Следующий акт, восстановление UQ, может произойти только после понижения энергии неравновесного восстановленного центра N-2 в ходе конформационной релаксации. Анализ лимитирующих стадий дыхательного электронного транспорта, проведенный во многих лабораториях с различными субстратами (наиболее важные результаты были получены в лаборатории Б. Чанса [41,61]), показали, что в четвертом дыхательном состоянии перенос электрона от NADH к UQ замедляется на 30-50 мс по сравнению с третьим дыхательным состоянием (избыток ADP). [c.100]

Люминесцентные характеристики объекта необычайно чувствительны к изменению самой структуры и окружения люминесцирующих центров. Это обстоятельство делает флуоресцентный анализ удобным методом изучения структуры различных молекул, в том числе биополимеров. В подобных исследованиях анализируют все характеристики люминесцентного излучения квантовый выход, спектр люминесценции, поляризацию люминесценции, время жизни возбужденного состояния, миграцию энергии возбуждения и получают важные данные о структуре сложных биополимеров — белков, ДНК, РНК, ДНП и т. д. Кроме того, по изменению люминесценции в ходе опыта можно судить о конформационных изменениях люминесцирующих молекул и о ходе биохимических реакций, происходящих как in vivo, так и in vitro, причем если иззгчаемый объект обладает люминесценцией, то эти исследования можно проводить без нарушения целостности объекта. [c.288]

Гексокиназа присутствует почти во всех клетках-животных, растительных и бактериальных. Она катализирует фосфорилирование не только D-глюкозы, но и некоторых других обычных гексоз, например D-фруктозы и D-маннозы. Гексо-киназу удалось вьщелить из дрожжевых клеток в кристаллическом виде, и ее трехмерная структура была детально изучена методом рентгеноструктурного анализа. Связывание гексокиназы с гексозой происходит по типу индуцированного соответствия молекула фермента претерпевает при этом глубокое конформационное изменение (см. рис. 12 и 13 к дополнению 9-4). Для проявления активности гексокиназе необходимы ионы Mg , поскольку истинным субстратом для этого фермента служит не АТР , а комплекс MgATP " (разд. 14.8). [c.446]

Вундерлих и Черный [262] при анализе температурной зависимости теплоемкости пришли к выводу, что конформационная энтропия плавления составляет 7,8 +1,0 Дж/(К моль СН2-звеньев), отнеся все те же 75% общего изменения энтропии к конформационным изменениям макромолекул и 25% к другим вкладам. Робертсон [194]. исходя из изменения объема, получил величину 7,5 0,6 Дж/(К моль СН2-звень-ев). Оба приведенных значения конформационной энтропии плавления близки к ее значениям, приведенным в табл. 8.7. [c.87]

Передачу изменений стереохимии железопорфирина более отдаленным областям белка через изменение ориентации порфирина с точки зрения структуры можно легко представить, учитывая данные рентгеноструктурного анализа [16, 99], касающиеся окружения гемовых групп. В области гемовой группы имеется около 60 атомов соседних аминокислотных остатков, которые связаны силами Ван-дер-Ваальса с атомами углерода каркаса порфирина. Вращательное изменение ориентации порфирина на 4° соответствует сдвигу положения ядер углеродов на периферии порфиринового кольца приблизительно на 30 пм. Такое структурное изменение легко может привести к конформационным изменениям третичной структуры ближайшего белкового окружения. Эти данные, следовательно, предполагают, что изменение ориентации порфирина на величину, наблюдаемую в спектроскопических исследованиях [133, 136], должно сопровождаться изменениями третичной структуры белка. Такие структурные изменения, происходящие, например, при отщеплении или связывании кислорода, могут затем передаваться к более отдаленным областям белковых субъединиц, таких, как контактные области Oi — Рг (рис. 2), посредством несвязывающих взаимодействий между каркасом порфирина и боковыми цепями аминокислот в ближайшем окружении гема. [c.56]

Конформация макромолекулы в поверхностном слое полимера может изменяться и в результате преимущественной адсорбции на границе фаз отдельных ее звеньев. Измерения смачиваемости позволяют проследить, как эти конформационные изменения связаны с термодинамическими характеристиками поверхности раздела. Так, Пеннингс [42], изучая смачиваемость образцов сополимеров винилхлорида и винилацетата, полученных прессованием из расплава между пластинками из различных материалов, показал, что Сз сополимера является функцией межфазной свободной энергии (а1г) на границе расплав — подложка. При использовании золотых подложек, когда СТ12 максимально, происходит преимущественная адсорбция на поверхности раздела винилацетатных звеньев, снижающая 012, но одновременно приводящая к росту сгз сополимера, измеряемого после удаления металла. Если в качестве подложки применяется ПТФЭ, то ап мало, адсорбция не имеет места, и значение аз сополимера оказывается примерно на 15% меньше, чем в первом случае. Параллельный анализ химического состава поверхности образцов методом ЭСХА подтвердил, что высокое значение аз сополимера, контактировавшего с золотом, действительно обусловлено изменением конформации макромолекул в граничном слое, приводящим к заметному обогащению его винилацетатными звеньями. [c.223]

Все это показывает, как широко используется ультрацентрифугирование при изучении нуклеиновых кислот и биосинтеза белка. Ультрацентрифугирование незаменимо также при все более расширяющемся изучении смежных проблем — в частности при изучении механизмов регуляции ферментативных реакций. Метаболические потребности клетки удовлетворяются, как известно, благодаря тонкой согласованности скоростей различных биохимических последовательностей. Такая согласованность возможна благодаря чувствительности аллостерических ферментов к изменениям концентраций отдельных метаболитов, что в свою очередь зависит от конформационных изменений, вызываемых соответствующим метаболитом и, очевидно, передающихся путем взаимодействия субъединиц ферментного белка. Успехи, достигнутые в изучении свойств аллостериче-ского фермента — аспартат-карбамоилтрансферазы, хорошо иллюстрируют большое значение ультрацентрифугирования — особенно когда оно используется в сочетании с другими методами анализа. Так, Герхарт и Шахман [5] показали, что этот фермент, представляющий собой глобулярный белок с молекулярной массой около 3-10 , после обработки соединениями ртути распадается на субъединицы двух типов. Каталитической активностью обладают лишь субъединицы одного типа, в субъединицах же другого типа, не обладающих каталитической активностью, находится центр по которому происходит присоединение цитидинтрифосфата. С этой регуляторной субъединицей связывается 5-бромцитидин-трифосфат, о чем свидетельствует соответствующая картина седиментации. Позже Вебер [6] определил аминокислотный состав и Ы-концевые остатки субъединиц обоих типов и установил, что одна молекула фермента содержит четыре регуляторных и четыре каталитических субъединицы. [c.9]

Начнем с того, что метод скорости седиментации вполне можно использоватсь для обнаружения существенных конформационных изменений даже в тех случаях, когда исследуемое явление не поддается точному аналитическому описанию. Хорошим примером такого использования седиментационного анализа служит работа Кроуфорда и Уоринга [9] по исследованию супер-спирализованной ДНК. [c.213]

Однако соотношение между ДОВ и конформацией цепи оказывается не столь простым, как можно было бы надеяться. Известно, например, что многие белки, которые по данным рентгеноструктурного анализа обладают спиральной конформацией, тем не менее подчиняются одночленному уравнению Друде. Кроме того, работа Ханлона и Клотца [44] породила серьезные сомнения в том, что изменение ДОВ при замене растворителя целиком обусловлено конформационными изменениями полипептида. Хэнфорд обратил внимание на то, что раскручивание спиральной полипептидной цепи в воде сопровождается переходом боковых групп из гидрофобного окружения, в котором они находились внутри спирали, в полярное окружение растворителя. Именно такого рода эффект дает сама по себе замена растворителя, приводящая к изменению удельного вращения каждой асимметричной группировки [45—47]. [c.441]

В последнее время появилась возможность изучать физические свойства белков такими методами, как температурный скачок, которые позволяют исследовать процессы с временами, соизмеримыми с временами каталитического превращения субстрата на ферменте, так что стало возможным непосредственно установить взаимосвязь между скоростями субстратзависи-мых конформационных изменений и скоростями самой реакции. В настоящее время имеется ун е несколько свидетельств в пользу существования изомеризации ферментов и ферментсубстратных комплексов, которые могут представлять собой конформационные изменения такого рода [49—52]. Скорость мономолекулярной изомеризации глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы характеризуется константой порядка 1 с и является слишком медленной, чтобы этот процесс имел место при каждом обороте фермента по-видимому, этот процесс относится к явлениям контроля ферментативной активности. Рентгеноструктурный анализ лизоцима [28], химотрипсина [54] и карбоксипептидазы [55] дал прямое доказательство существования изменений в конформации фермента при взаимодействии с субстратами или ингибиторами. Гемоглобин, хотя и не является ферментом, но может быть поучительным примером использования всех этих методов для демонстрации конформационных изменений при взаимодействии этого белка с кислородом [56]. [c.243]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология