Белки колориметрическое определени

БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ — цветная реакция, которую дают с солями меди в щелочной среде биурет H2N ONH ONH2, амиды и имиды кислот, полипептиды, белки и другие соединения, содержащие группировки —СО—NH—, Б. р. — цветная реакция на белок — лежит в основе его количественного колориметрического определения. Если к щелочному раствору белка прибавить раствор uSO , появляется фиолетовое окрашивание. Чувствитель-1юсть Б. р. невысока. [c.45]

Для количественного определения белка используют колориметрические и спектрофотометрические методы, в некоторых случаях пользуются определением белка по содержанию общего азота в препарате. [c.29]

Для определения содержания иммобилизованного белка можно в принципе использовать все известные методы, применяющиеся при работе с растворимыми белками. Однако из-за светорассеяния, характерного для гелей агарозы, быстрого оседания их частиц, а также адсорбции красителей на гелях в определение содержания белка внесены отдельные модификации. Могут быть рекомендованы спектрофотометрический и колориметрический методы. [c.84]

Колориметрическое определение молочной кислоты в биологических жидкостях применение катионитов для удаления белков [1272]. [c.276]

Триптофан обычно определяют в белках, которые пе подвергались гидролизу [165, 186]. Однако в последнее время были сделаны попеки стабилизации его молекулы, а также молекулы тирозина, цистеина и метионина при помощи реакции восстановления, которой предшествовала реакция десульфурации [92]. Кроме того, был разработан количественный метод колориметрического определения аминокислот в гидролизатах, полученных при действии селенитов щелочных металлов [56]. [c.392]

Муравьиная кислота — реактив для выделения платины и палладия, для отделения бериллия от алюминия и железа, для разделения вольфрама и молибдена уксусная кислота применяется для определения молекулярной массы веществ, для приготовления буферных растворов, как среда и ацетилирующее средство пропионовая кислота— для определения ароматических аминов антраниловая кислота — для обнаружения и гравиметрического определения кадмия, кобальта, меди, ртути, марганца, никеля, свинца и цинка бензойная кислота служит эталоном в колориметрии 2,4-диокси-бензойная кислота применяется для колориметрического определения железа, титана и других элементов лимонная кислота — в качестве сильного маскирующего комплексообразователя, для приготовления буферных смесей, определения белка в моче, как растворитель фосфатов при анализе удобрений молочная кислота — при полярографическом определении металлов, при электролитическом осаждении меди в присутствии железа, цинка и марганца нафтионовая кислота — для колориметрического определения нитрат иона, в качестве флуоресцирующего индикатора олеиновая кислота — для определения малых количеств кальция и магния, в титриметрическом анализе для определения жесткости воды пировиноградная кислота — для идентификации первичных и вторичных аминов, в микробиологии стеариновая кислота — для нефелометрического определения кальция, магния и лития сульфо-салициловая кислота — для колориметрического определения железа, в качестве комплексообразователя, для осаждения и нефелометрического определения белков трихлоруксусная кислота — как реактив на пигменты желчи и фиксатор в микроскопических исследованиях. [c.44]

Определение а-аминокислот. 2,4-Динитрофторбензол широко применяют [см. уравнение (24)] для колориметрического определения а-аминокислот в гидролизатах белков Интересно отметить, что отношение экстинкций при 350 и 390 нм для производных а-аминокислот равно приблизительно 2,1—2,4 и, следовательно, близко к найденному для вторичных, но не для первичных аминов. [c.228]

Колориметрическое определение. Для колориметрического определения мочевой кислоты используется синяя окраска, которую она дает с фосфорномолибденовой кислотой и динатрийфосфатом [12]. Окраска эта достаточно стойка и сохраняется в течение нескольких часов. Растворы белка, альбумоз, пептонов, креатина, креатинина и сахара в условиях реакции окраски не дают. Эти соединения дают синюю окраску с фосфорномолибденовой кислотой только в присутствии едкого кали или едкого натра. [c.354]

При определении белка в лекарственных препаратах при помощи колориметрических методов предварительно строят калибровочный график с использованием стандартного образца белка, указанного в частных статьях (бычьего сывороточного альбумина, сывороточного альбумина человека или аминокислоты тирозина). [c.30]

Подобно —ЗН-группам, фенольные ОН-группы тирозиновых остатков являются весьма реакционноспособными ряд работ был посвящен изучению экранирования этих групп и определению их значения для биологической активности. Преимуществом при исследовании специфических реакций оказалась лабильность связи ацилированных остатков в щелочной среде. При этих исследованиях с большим успехом могут быть применены спектры поглощения в ультрафиолетовой области, чем классическое колориметрическое определение по методу Фолина. Вопрос о том, можно ли окислить тирозиновые остатки нативных белков с помощью ферментов, был предметом большого числа исследований. [c.284]

Для отбора клеток, содержащих рекомбинантную ДНК, используют специальные приемы. Чтобы уменьшить количество кольцевых плазмидных молекул, образующихся ири сшивании фрагментов ДНК-лигазой Т4, рестрицированную плазмидную ДНК обрабатывают щелочной фосфатазой, удаляющей 5 -концевые фосфатные группы. Для отбора трансформированных клеток, содержащих гибридные плазмиды, проводят 1) тестирование на резистентность к определенным антибиотикам или колориметрическую реакцию 2) иммунологические тесты или выявление специфического белка - продукта клонированного гена 3) гибридизацию с зондом, комплементарным како-му-либо участку искомого гена. [c.78]

Так, например, получение высокой аналитической точности затрудняется тем, что при колориметрическом определении триптофана [159] цветные реакции, результаты титрования и спектры поглощения, зависящие от остатков тирозина, часто отклоняются для различных белков от значений, которых следовало ожидать, если бы все фенольные группы тирозина были свободны [160, 161, 162]. Нейрат [79] приводит ряд работ о предполагаемых связях между боковыми цепями аминокислот. Однако мы считаем преждевременным вывод, что полярные группы боковых цепей чистого нативного белка являются, в общем, сверх ожиданий, чрезвычайно инертными по отношению к специфическим реагентам для этих групп . [c.59]

Внесены улучшения в колориметрическое определение триптофана реакцией с я-диметиламинобензальдегидом этот метод пригоден для анализа муки высокого помола. Необходимо предварительно гидролизовать белки настаиванием с папаином, а затем отмыть крахмал и волокна [131]. [c.161]

Все авторы книги активно работают в разных областях химии белка. Они стремились должным образом ориентировать читателя, изложив краткое введение в обсуждаемую проблему и практические детали выполнения эксперимента, которые по их собственному опыту дают удовлетворительные результаты. Несомненно, многие методы прошли проверку практикой и временем, такие, например, как исчерпывающий гидролиз белков 6 М НС1 или колориметрическое определение белков по Лоури [7] вместе с тем созданы новые методы, которые в определенном отношении обладают неоспоримыми преимуществами. [c.8]

В растворе миозина проводят определение белка одним из колориметрических методов (с. 81) и определяют активность фермента. [c.393]

Разработанные впоследствии колориметрические методы определения аминокислот сильно продвинули наши сведения об аминокислотном составе белков. Но и для осуществления этими методами требоваюсь. много времени и значительное количество вещества. [c.479]

Для мясных продуктов дополнительной необходимой аминокислотой является оксипролин, который характеризует количество соединительных тканных белков в мясе. Его можно определять ионообменной хроматографией с помощью автоматических анализаторов или химическим колориметрическим методом [13, 15, 23]. Метод основан на нейтрализаиди кислотного гидролизата до pH 6,0, последующем окислении оксипролина с помощью 1,4% раствора хлорамина Т (или хлорамина Б) в смеси пропилового спирта и буфера и колориметрическом определении при 553 нм продуктов окисления оксипролина после реакщш с 10%-цым раствором шрд-диметиламинобензальдегида в смеси хлорной кислоты и пропилового спирта (1 2). [c.283]

Для колориметрического определения содержания ys в белках используются цветные реакции Эммана, заключающиеся во взаимодействии 5,5 -дитио-б ис-2-нитробензойной кислоты [c.394]

I. Колориметрические методы определения белка [c.30]

Существует два способа количественного определения красителей, связавшихся с белками элюирование фракций из электрофореграммы и их колориметрическое измерение и прямая электрофотометрия неразрезанной полоски. [c.60]

Простетической группой гемоглобина и других подобных белков является гем, представляющий собой комплекс порфирина с железом. Интенсивное и тщательное изучение гемоглобина было обусловлено, с одной стороны, его биологической ролью в качестве переносчика кислорода, с другой — тем, что он очень легко может быть получен в кристаллическом виде и имеет интенсивную окраску, дающую возможность проводить колориметрические определения. Очень важное значение имеет и то обстоятельство, что изменения в нативном состоянии гемоглобина могут быть легко уловлены по изменению его окраски и спектра поглощения. В нашу задачу не входит рассмотрение структуры гема и различных порфиринов дальнейшее изложение будет посвящено поэтому только тем вопросам, которые касаются структуры и свойств белка, входящего в состав гемоглобина. [c.242]

Метод состоит в колориметрическом определении интенсивности окрашивания раствора образующегося при нагревании о-толуидина с глюкозой в присутствии ук- сусной кислоты. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации глюкозы. Содержание глюкозы определяют в безбелковом фильтрате крови, поэтому белки предварительно осаждают 3%-ным раствором ТХУ. Метод является специфическим и дает возможность определять истинную глюкозу, так как другие редуцирующие вещества крови (глютатион, глюкуроновая кислота, аскорбиновая кислота и др.) с о-толуидиновым реактивом не дают окрашивания [c.130]

Применение. В микроскопии в качестве фиксатора (является одним из лучших фиксаторов). Применяется самостоятельно, а также служит исходным веществом для приготовления фиксирующих смесей, в частности смеси Санномия аналитической химии для колориметрического определения железа, для осаждения и нефелометрического определения белков. [c.377]

Соединения, содержащие 2,4-динитрофениламиногруппу, при действии NaBHi дают интенсивное красное окрашивание. Это -может быть использовано для колориметрического определения таких соединений. Метод нашел применение в химии пептидов и белков для анализа аминокислот [2310]. [c.546]

На САМ удобно оценивать количественно содержание фракций. САМ, предназначенную для колориметрических определений, пропитывают парафиновым маслом, например Shell Whitmore Oil 120, или уксусной кислотой, при этом САМ становится прозрачной, и на ней можно измерять поглощение и отражение. Поскольку САМ растворима в ряде органических растворителей, при проведении некоторых количественных определений можно использовать это ее свойство. Полученные растворы можно анализировать, колориметрически или сцинтилляционным методом. Для иммуннодиффузии и иммуноэлектрофореза САМ можно применять даже без агара. Разделяемые на САМ соединения, как правило, дают узкие зоны, что позволяет для большинства типов разделений уменьшить общую длину пути до 6—12 см. Миграция на меньшее расстояние приводит к сокращению длительности электрофореза и меньшему уширению зон под влиянием диффузии. В результате разделение, например, сывороточных белков можно осуществить при градиенте поте.ч-циала в 20—25 В/см за 60—90 мин. [c.293]

Для количественного определения может быть использована биурето-вая реакция, хотя в случае пептидов также наблюдается положительный результат. Реакция основана на образовании фиолетового медного комплекса, интенсивность окраски которого (540 — 560 нм) может быть измерена колориметрически. Гораздо более высокую чувствительность имеет метод Лаури [62], в котором при участии остатков Тгр, Туг и Су8 образуется комплекс белка с фосфомолибденовой кислотой и медью. Это наиболее часто применяемый колориметрический метод определения малых количеств белка. Образующийся голубой комплекс (максимум абсорбции при 750 нм) достаточно устойчив для количественного определения. В качестве стандартного белка служит сывороточный альбумин. Предел обнаруживания 5 — 10 мкг/мгл раствора. Определению по методу Лаури мешают трис- [c.355]

Для определения качественного и количественного состава аминокислот белка дрожжей, активного ила и других биомасс предназначен метод, основанный на колориметрическом определении количества каждой аминокислоты, выделенной хромато-графией на бумаге. Мономерные аминокислоты определяют после их экстракции из пробы горячей водой. Полимерные аминокислоты, составляющие макромолекулы белка, предварительно гидролизуют [75]. Для выделения аминокислот проводят нисходящее, многократное хроматографирование двумя растворителями. Проявителем служит слабокислый раствор нингид-рина, который с аминокислотами дает сине-фиолетовое соединение (ДИДА) по уравнению [c.217]

В учебниках биохимии обычно приводятся различные цветные реакции на белки. Большинство этих реакций свойственно отдельным аминокислотам и будет рассмотрено в гл. III. Фенольное ядро тирозина дает желтую окраску с азотной кислотой (ксанто-протеиновая реакция), красное окрашивание — с реактивом Миллона, диазореакцию и голубую окраску — с щелочными растворами фосфомолибдата. Цветные реакции, получаемые при взаимодействии белков с альдегидами, например с диметилами-нобензальдегидом (Эрлих) или с глиоксалевой кислотой (Гоп-кинс — Коле), обусловлены присутствием в молекуле белка триптофана красное окрашивание с гипохлоритом и о -нафтолом — присутствием аргинина (Сакагуши) темное окрашивание при нагревании растворов белков с щелочным раствором уксуснокислого свинца дают белки, содержащие в своей молекуле остаток цистина или цистеина. Неоднократно пытались использовать эти реакции для количественного колориметрического определения белков. Однако ясно, что интенсивность этих реакций варьирует от белка к белку и зависит от процентного состава соответствующей аминокислоты в молекуле белка. [c.17]

И других Примесей. Лучшие результаты получаются при колориметрическом определении белка по биуретовой реакции [41—43]. [c.21]

Колориметрическое определение. Основной метод колориметрического определения молочной кислоты в крови [99] подвергался некоторым изменениям [100]. Исследуемую кровь освобождают от белков, действуя метафосфорной кислотой, и от углеводов, действуя сульфатом меди остаток медных солей осаждают окисью кальция. Полученный раствор молочной кислоты обрабатывают чистой концентрированной серной кислотой и по охлаждении приливают к нему 0,125-процентный раствор вератрола в абсолютном спирте. Появляющаяся в присутствии молочной кислоты красная окраска колориметрируется через 20 мин. Требуется строгое соблюдение разработанных условий особенно приходится заботиться о тщательной очистке всех применяемых пипеток и стаканчиков (очистка серной кислотой), так как в загрязненной посуде вместо прозрачного светлокрасного раствора можно получить грязносерый или зеленый раствор, см. также [101, 102]. [c.250]

Существует косвенный метод подсчета вирусных частиц в образце, который позволяет определить массу каждой частицы. Этот подход особенно полезен в том случае, когда нет строгого соответствия между числом частиц и их способностью образовывать бляшки . Молекулярный вес вирусных частиц определяют методами седиментации — диффузии и светорассеяния. Умножив его на процентное содержание ДНК в вирусной частице, получают молекулярный вес ДНК. Среди методов, которые используются для определения содержания ДНК в вирусной частице, можно назвать определение фосфора (колориметрически или по величине радиоактивности P ) определение связанной с пуринами дезоксирибозы (колориметрическое) определение тимипа (но радиоактивности Н ) [16] опре-делепие ультрафиолетового поглощения (при этом допускается, что вклады ДНК и белка аддитивны) 1 109] и определение плавучей плотности ви-вируса (исходя из того же предположения). Общее содержание вируса в препарате можно определить по сухому весу, по инкременту показателя преломления [110] и исходя из суммарного содержания белка и нуклеиновой кислоты. [c.238]

Реакции типа биуретовой, зависящие от способности белков связывать ионы меди, дают более согласующиеся результаты для разных белков [120], чем реакции, основанные на действии фенольного реагента. Первоначальные методы, основанные на биуретовой реакции, были сравнительно малочувствительны, но Уэстли и Ламбет [124] достигли 40-кратного повышения чувствительности, удаляя избыток меди на ионообменной смоле и определяя медь, связанную с белком, колориметрически с диэтилдитиокарбаматом. Гольдвассер и сотр. [121] сообщили о расхождениях в результатах, полученных этим методом и методом Лоури для фракций овечьего эритропоэти-па. Отсутствие определенных структурных обоснований для образования окраски и чувствительность диэтилдитиокарбамата меди к свету ограничивает ценность этого метода. [c.151]

Колориметрия и УФ-спектрофотометрия применимы в случае любых РНК. Все РНК имеют одинаковый коэффициент экстинкции при колориметрическом определении. В присутствии белков, полисахаридов и многих других веществ, поглощающих УФ-свет (в том числе фенола, который часто применяется при выделении нуклеиновых кислот), точность УФ-спектрофотометрическо-го анализа снижается. Отклонения от нормального спектра свидетельствуют о загрязнении белком, углеводом или другими соединениями. [c.340]

Белки в концентрации менее 2 мкг/мл определялись с помощью кумасси R (фирма Sigma). Белок осаждали на стеклянно-фибровый диск, промывали трихлороуксусной кислотой, обрабатывали реагентом кумасси и образовавшийся окрашенный комплекс растворяли в метанольном растворе NaOH для колориметрического определения при 590 нм [249]. Применение щелочи, рекомендуемое для снятия осажденного белка с подложки, улучшает последующее колориметрическое или радиометрическое измерение [101]. [c.298]

На точность анализа влияют также ионы некоторых металлов, в частности, меди. Для выяснения ошибки анализа к пробам со стандартными растворами альбумина объемом в 1 мл следует добавлять по 1 мл жидкой фазы пульпы, где бактерии предварительно удалены центрифугированием. К образцам добавляют по 4 мл 0,5 Н NaOH и отбирают по 1 мл на анализ. Осаждение белка и его колориметрическое определение проводят методом описанным выше. Полученные данные сопоставляют с показаниями стандартных растворов белка. Прямая пропорциональная зависимость между концентрацией белка и оптической плотностью конечного раствора соблюдается в пределах от 0,3 до 2,0 мг/мл белка в пульпе. [c.79]

Для установления количественного состава входящих в гликопротеин моносахаридов и аминокислот биополимер подвергают полному кислотному гидролизу, и состав гидролизата определяют обычными методами количественного анализа. Пептидные связи устойчивее гликозидных по отношению к кислотам, поэтому для полного расщепления на мономеры гликопротеины приходится гидролизовать в более жестких условиях, чем обычные полисахариды (6 н. НС1, 100—ПО °С, 24 ч) . Нужно иметь в виду, что как сахара, так и аминокислоты могут частично распадаться в условиях кислотного гидролиза, причем в ряде случаев можно с помощью ХОЛОСТЫХ опытов внести соответствующие поправки при анализе. Специфической для гликопептидов побочной реакцией в условиях кислотного гидролиза является возможная конденсация сахаров с аминокислотами, приводящая к окрашенной сложной смеси различных веществ, в том числе простейших карбонильных соединений (так называемая реакция Майяоа). Например, по данным Готшалка , потеря аминокислот при кислотном гидролизе богатых сахарами гликопротеинов может составлять до 30 %. Количественное определение моносахаридов проводят с использованием хроматографии, спектрофотометрической и колориметрической техники (см. гл. 14). Для анализа аминокислот применяют обычно методы, хорошо известные из химии белка. Так, количественный анализ аминокислотного состава проводят в автоматических анализаторах или с помощью газо-жидкостной хроматографии . [c.567]

С ошибками, которые по опубликованным данным присущи трем обычно используемым методам определения белка биуре-товому методу, методу Лоури и методу Бредфорда. Для этих трех методов ошибки определений устанавливали, сравнивая опубликованные данные (Инструкция по определению белка фирмы Bio-Rad, с. 3—4) с количествами белков, определяемыми гравиметрически. В качестве стандартов для определения по Лоури и Бредфорду использовали бычий -у-глобулин, а для определения биуретовым методом — БСА. Несмотря на некоторые различия в определениях при двух длинах волн, диапазон ошибок (средний уровень отклонений) для определений по площади пиков при 205 нм укладывается в диапазон ошибок для трех стандартных колориметрических определений. Петерсон (Peterson, 1983) в своем обзоре указывает, что измерение по поглощению при 205 нм в два раза чувствительнее, чем модифицированный фенольный метод Фолина при определении белка по Лоури. [c.127]

Определение суммарной активности амилаз включает выделение амилаз раствором Na l, инкубацию их со стандартным раствором крахмала в течение заданного промежутка времени и, наконец, колориметрическое определение н гидролизованного амилазами остаточного крахмала. Активность амилаз выражается в миллиграммах гидролизованного крахмала за 1 ч на 1 мл раствора ферментов или в миллиграммах гидролизованного крахмала на 1 мг белка за 1 ч (удельная ак тивность). [c.188]

Возможные ошибки при определении pH колориметрическим методом. Неточности определения pH могут зависеть от солевой ошибки, обусловленной высокой концентрацией солей в растворе, изменяющей растворимость и диссоциацию индикатора от белковой ошибки, связанной с наличием в растворах белковых веществ (кровь, плазма и др.) от индикаторной ошибки, так как белки, обладающие амфотерными свойствами, взаимодействуют с кислотными и основными индикаторами, а также адсорбируют индикатор при этом происходит изменение общей концентрации его в испытуемом растворе таким образо.м, добавление значительных количеств индикаторов, которые, являясь слабыми кислотами и основаниями, могут, особенно в незабуференных растворах, изменять значение pH от температурной ошибки, зависящей от изменения константы диссоциации индикатора при колебаниях температуры так, -нитрофенол имеет при 0 С р/С = 7,30, а при 50° С рК = 6,81 с изменением температуры изменяется и pH стандартных растворов. [c.67]