Переноса в изоэлектрической точке

При определенных значениях pH раствора число положительных и отрицательных зарядов в молекулах белка становится одинаковым и такие молекулы не переносятся ни к аноду, ни к катоду. Значение pH раствора, при котором достигается такое состояние белка, называется изоэлектрической точкой. Последняя не одинакова для различных белков, так как в зависимости от их аминокислотного состава они могут содержать разное количество свободных амино- и карбоксильных групп. Например, для яичного белка (альбумина) изоэлектрическая точка находится при pH = 4,8 (кислая среда), а для белка пшеницы (глиадина) — при pH = 9,8 (щелочная среда). [c.295]

В результате проведенных исследований по изучению явлений переноса аминокислот был установлен ряд закономерностей миграции Ь-лизина через катионообменную мембрану ]. Исследования проводились с учетом ионизации и протонизации -лизина в зависимости от значения pH раствора и изоэлектрической точки аминокислоты. Ввиду того что аминокислоты являются амфотерными соединениями, исследование миграционного переноса аниона -лизина через анионообменную мембрану, а также изучение кинетики процесса миграции лизина через систему двух ионообменных мембран представляет определенный интерес для выяснения закономерностей переноса аминокислот. [c.113]

Книга известного венгерского ученого, неоднократно переиздававшаяся как в Венгрии, так и в других странах. Это справочник, содержащий основные электрохимические данные проводимость, ионные подвижности, числа переноса, изоэлектрические точки, константы диссоциации органических и неорганических кислот и оснований и многие другие электрохимические свойства водных и неводных систем. Все данные представлены в единицах СИ, а в некоторых таблицах и в традиционных единицах. [c.488]

Однако уже в их работах встречались несовпадения изоэлектрических точек, определенных по переносу воды и по изменениям концептрации (отсутствие изменения концентрации в изоэлектрической точке). [c.270]

Сходное заключение было сделано при исследовании гетерокоагуляции коллоидных дисперсий смесей оксидов [248]. В том случае, когда два оксида, имеющие различные изоэлектрические точки, смешиваются при pH, среднем из значений таких изо-электрических точек, то происходит мгновенная коагуляция оксидов. Но если такой коагулят повторно подвергается процессу старения, диспергируется и вновь коагулирует, то время повторной коагуляции будет возрастать до тех пор, пока в конце концов рассматриваемая смесь не образует стабильную дисперсию. Подобное поведение объясняется взаимным переносом оксидов [c.113]

Как и при разделении на ранее описанных полимерных ХНФ, механизм хирального распознавания в данной системе является сложным и до конца не выяснен. Однако основные причины удерживания сорбата были выявлены в ходе систематических исследований влияния его структуры и состава подвижной фазы на коэффициент емкости. Во многих отношениях альбумин-силикагелевый сорбент ведет себя подобно обращенно-фазовым материалам на основе алкилированного силикагеля. Спирты, преимущественно пропанол-1, помогают регулировать время удерживания, поскольку вызывают его быстрое уменьшение вследствие ослабления гидрофобных взаимодействий с сорбентом. Оптимизировать состав подвижной фазы можно, варьируя тремя основными параметрами, а именно pH, ионной силой и органическим растворителем-модификатором [90]. Вероятно, в любой хроматографической системе одновременно наблюдается влияние диполь-ионных и гидрофобных взаимодействий. Кроме того, возможно образование водородных связей и комплексов с переносом заряда. Большое влияние свойств подвижной фазы на значения к разделяемых энантиомеров можно объяснить зависимостью свойств белков от распределения заряда и его конформации. БСА состоит как минимум из 581 остатка аминокислот, связанных в единую цепь (мол. масса 6,6-10 ), и его надмолекулярная структура в значительной мере определяется присутствием в молекуле 17 дисульфидных мостиков. При рН7,0 полный заряд молекулы равен - 18, а изоэлектрическая точка равна 4,7. Как это хорошо известно из химии ферментов, смена растворителя способна вызывать изменения в структуре связывающего центра белка в результате изменения его заряда и конформации. [c.133]

Так как пиридин-2-карбоновая (пиколиновая) кислота хорошо растворяется в воде (90 г в 100 мл воды при 9°), то раствор перед установлением изоэлектрической точки упаривают примерно до 200 мл. Раствор переносят в трехгорлую колбу на 2 л с мешалкой и водоотстойником, прибавляют 1 л бензола и отгоняют воду в виде азеотропной смеси. Оставшийся горячий бензольный раствор фильтруют через воронку для горячего фильтрования и упаривают досуха в слабом вакууме на водяной бане. Остаток соли в колбе кипятят [c.336]

Как показал Смит [300] с помощью метода ИК-спектроскопии, карбоновые кислоты адсорбируются либо за счет образования водородной связи с карбоксильной группой, либо в результате переноса протона к поверхности. В спектрах наблюдались полосы поглощения карбоксилатов. Весьма вероятно, что ионы О или ОН реагировали как акцепторы протонов, хотя полосы ОН-групп были обнаружены после адсорбции карбоновых кислот. Изоэлектрическая точка чистого анатаза близка к pH 6,6 [305]. [c.266]

В изоэлектрической точке ионы белка не переносятся ни к аноду, ни к катоду. Некоторые свойства белковых растворов — набухание, вязкость, электропроводность — достигают в этой точке минимального значения. Резко падает также растворимость белка и увеличивается его способность к свертыванию (осаждению, коагуляции). [c.699]

В связи с тем, что в зависимости от строения молекулы могут преобладать либо кислотные свойства карбоксила, либо основные свойства аминогруппы, в водных растворах аминокислот pH среды отличается от 7. Но на кривой титрования аминокислоты имеется значение pH, при котором количество групп ЫНз оказывается точно равным количеству групп — СОО". Следовательно, при этом pH аминокислота существует только в виде биполярного иона и в условиях электрофореза переноса ионов происходить не будет. Такое значение pH называют изоэлектрической точкой (см. табл. 36). [c.374]

Изоэлектрическая точка. Теоретически изоэлектрическая точка может быть определена как величина pH, при которой средний заряд молекулы Z равен нулю. Согласно экспериментальному или рабочему определению, изоэлектрической точкой называют такое значение pH, при котором в среднем никакого переноса белка в электрическом поле не происходит. Поскольку опыты можно вести только в буферных растворах, содержащих соли, взаимодействие потоков (см, разд. 4 гл. IX) может привести к ошибкам и отклонениям, так как в присутствии некоторых солей даже сахара могут перемещаться в электрическом поле. Однако в большинстве случаев теоретическое определение и то, которое принято в повседневной практике, почти идентичны. Изоэлектрическая точка не зависит явным образом от концентрации белка, но зависит от состава растворителя. [c.119]

Выделение (перенос) и очистка -аминокислот на основе электродиализа могут быть осуществлены с учетом зависимости ионизации и протонизации молекул аминокислот от pH раствора и pH изоэлектрических точек. [c.129]

Компенсирующее движение объема раствора взамен переносимого растворенного вещества было применено с целью использования всего объема /-образной трубки для разделения. Принцип последнего метода понятен из рис. 40. Если мы хотим разделить два вещества А и Б, мы должны сперва подобрать наиболее подходящий pH для разделения, при котором различия в подвижности между ними максимальны. Обычно это pH не совпадает с точкой, при которой оба вещества переносятся с одинаковой скоростью в противоположных направлениях (см. кривые подвижности белков серума, данные Тизелиусом [137] в 1937 г.). Различие в подвижности гораздо больше в щелочной области, чем в области, лежащей между изоэлектрическими точками. Разделение между двумя веществами А и Б в этом случае будет протекать с большей скоростью при тех pH, при которых компоненты переносятся в одинаковом направлении. Опыт, однако, пришлось бы приостановить, когда более быстрый компонент достигает верхнего предела — /-образной трубки, т. е. в момент, когда лишь сравнительно малые объемы чистых компонентов успели отделиться друг от друга. [c.277]

При проведении иммуноблоттинга сложную смесь антигенов вначале подвергают гель-электрофорезу, а затем фракционированные пептиды переносят (блоттинг) на лист нитроцеллюлозы для идентификации индивидуальных антигенов при помощи специфических антисывороток. Производя предварительное разделение в геле с додецилсульфатом натрия или в геле для изо-электрического фокусирования можно получить данные о размерах и изоэлектрической точке исследуемых антигенов, а также о сходстве между ними (родстве) (рис. 29.13). [c.531]

Если в растворе отсутствуют посторонние ионы, которые переносятся вместе с макроионами во время электрофореза, или по-лиамфолит адсорбирует положительно и отрицательно заряженные низкомолекулярные ионы в одинаковой степе ни, то pH раствора определяется только диссоциацией ионогенных групп самой макромолекулы в этом случае состояние, при котором и = 0, соответствует изоионной точке. Она в отличие от изоэлектрической точки зависит от содержания полиамфолита в растворе и совпадает с ней лишь при pH 7. [c.577]

Как известно, амфотерными электролитами, кроме ионов некоторых простых элементов, являются аминокислоты. Впервые Аструп и Стаге [10] предложили метод обессоливания аминокислот с применением ионитовых мембран, т. е. метод фракционирования пеамфотерных неорганических солей и амфотерных аминокислот. Хорошие результаты получили Ди Бенедетто и Лайтфут [Ц] по разделению глицина и хлор-иона. В проведенных ими опытах перенос глицина при pH, близких к его изоэлектрической точке, был около 6,1% при pH = 9 перенос возрастал до 15,7% а при pH =11,3 —до 51%. [c.72]

В связи с использованием этих методов возникают некоторые проблемы теоретического характера. Для ряда белков было показано присоединение натрийдодецилсульфата. Предполагается, что этот эффект является основой разделения денатурированных белков при электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии детергента. В таком случае необходимо допустить, что индивидуальная картина заряженностн каждой молекулы белка изменяется при связывании анионов натрийдодецилсульфата, так что все макромолекулы становятся отрицательно заряженными. В настоящее время еще трудно сказать, почему белки и сильно различающиеся по аминокислотному составу, и имеющие различные изоэлектрические точки, должны одинаково следовать такой схеме взаимодействия с детергентом. Возможно, что эффект просеивания, описываемый экспоненциальной функцией, преобладает над эффектом заряда. Последний просто не проявляется. В своем исследовании Вебер и Осборн [60] показали, что около 40 различных белков имеют электрофоретические подвижности, не зависящие от изоэлектрической точки и аминокислотного состава (а возможно, и от количества связанного детергента), и скорость их переноса определяется исключительно величинами молекулярных весов их полипептидных цепей. [c.421]

ИМИ прием лучше всего можно продемонстрировать на примере сигналов при +3,3 м. д. в спектре восстановленного цитохрома и при +23,4 м. д. в спектре окисленного белка. Предполагается, что оба эти сигнала принадлежат метильной группе метионино-вого лиганда. Причины такого отнесения сигнала в восстановленном состоянии уже были рассмотрены, что же касается окисленного белка, то для него при отнесении указанного сигнала руководствовались следующими соображениями. Интенсивность сигнала соответствует трем эквивалентным протонам, а ширина достаточно велика, чтобы быть обусловленной релаксацией за счет близости атома железа. Кроме того, величина сдвига сигнала также соответствует ядрам, находящимся вблизи железа. Редфилд и Гупта взяли смесь восстановленного и окисленного цитохрома (1 1) и подвергли образец воздействию излучения при частоте, соответствующей сигналу +23,4 м. д., при мощности излучения, достаточной для насыщения сигнала в этом положении. Другими словами, они провели эксперимент по методике двойного резонанса таким образом, что сигнал при +23,4 м. д. исчез. Было замечено, что при этом уменьшился и сигнал при +3,3 м. д. Отсюда было сделано заключение, что электронный обмен между двумя формами белка идет быстрее, чем успевают релаксиро-вать метильные протоны метионина к своему равновесному состоянию в магнитном поле. Другими словами, насыщение резонансного сигнала метильных протонов в окисленном белке передается на резонансный сигнал тех же протонов в восстановленном белке. Эти эксперименты подтверждают, что указанные два сигнала действительно принадлежат одной и той же метильной группе. Следует отметить два обстоятельства. Во-первых, если насыщать сигнал, имеющий химический сдвиг 3,3 м. д., то это никак не влияет на сигнал при 23,4 м. д., поскольку последний очень быстро релаксирует. Во-вторых, два отдельных сигнала могут наблюдаться от смеси окисленного и восстановленного белка только в том случае, когда частота обмена между двумя состояниями окисления меньше, чем разность частот между двумя сигналами. Скорость переноса электрона между восстановленным и окисленным цитохромом с была оценена путем измерения степени уменьшения резонансного сигнала при 3,3 м. д. и времени спинрешеточной релаксации Т для этого сигнала с использованием некоторых теоретических построений [28, 29]. Было показано, что в отсутствие малых ионов транспорт электрона происходит быстрее при pH 10, т. е. в изоэлектрической точке цитохрома с, причем добавление солей при этом pH не влияет на скорость переноса электрона, тогда как уже при небольшом отклонении от изоэлектрической точки скорость обмена зависит от ионной силы [30]. [c.398]

Последний участник циклической электронтранспортной цепи — медьсодержащий белок пластоциа-пин — располагается между цитохромом и хлорофиллом а фотохимического центра (пигментом Р700). Характерные особенности этого белка Е = + 0,37 в, М = 21 ООО, изоэлектрическая точка меньше 4. Одна молекула пластоцианина содержит два атома меди, каждый из которых, по-видимому, связан с сульф-гидрильпой группой остатка цистеина в белке. Медь может вымываться из белка подкисленным раствором сульфата аммония, что сопровождается потерей способности пластоцианина участвовать в переносе электронов. Функции белка восстанавливаются с помощью раствора сульфата меди. Свое название этот белок получил в связи с тем, что в окисленном состоянии имеет синий цвет, в то время как восстановленная форма зеленоватого цвета. Окисленная форма имеет три характерные полосы в спектре поглощения в области 597 нм (главная), 460 нм и 780 нм. Один грамм-атом меди пластоцианина приходится на 300— 400 молекул хлорофилла. [c.162]

Такой случай перезарядки золя довольно обычен для белков, что было замечено Гарди (1899) при действии кислот и щелочей. Перезарядка белковых мицелл наблюдалась методом электрофо реза. Гарди было показано, что имеется такое состояние золя, в котором. нет переноса мицелл ни к аноду, ни к катоду, т. е. имеется изоэлектрическая точка. [c.347]

Изоэлектрические точки моноаминокарбоновых кислот лежат в пределах 5,8< рЛ < 6,3, а их О-ацетилпроизводные обладают кислыми свойствами, что дает возможность в электрическом поле провести направленный миграционный перенос О-ацетилпроиэводных а-аминокислот. [c.391]

Если значение pH деминерализуемого раствора близко к значению изоэлектрической точки аминокислоты (р1), то при наложении электрического поля такая аминокислота остается в растворе [1, 2]. Перенос тока осуществляется, в основном, катионами и анионами минеральных примесей. Процесс во многом определяется свойствами применяемых ионообменных мембран, концентрацией аминокислоты и примесей в деминерализуемом растворе, pH растворов смежных камер, величиной плотности тока [3]. [c.249]

Естественно, что аланин, изоэлектрическая точка которого близка к pH нейтральногс раствора, в наименьшей степени участвует в переносе тока, а поэтому его потери менее всего зависят от среды электродных камер. [c.264]

В рассмотренных выше работах деминерализация осуш,ествля-лась путем переноса неорганических ионов через ионитовые мембраны. При этом подбирали такие условия, при которых аминокислота оставалась в средней камере, т. е. электролиз проводили при pH раствора, равном изоэлектрической точке. [c.265]

Значительных успехов в разделении аминокислот методами электродиализа достигли Рязанов и сотр. [52, 53]. Исследования электродиализа гидролизата желатины (pH 5—7), циркулирующего через среднюю камеру ячейки, отделенную от катодной камеры катионитовой мембраной марки ] К-40, а от анодной — анионитовой мембраной марки МА-40, показали, что в средней камере можно выделить нейтральные моноаминокислоты (пролин, оксипролин, а-аланин, лейцин, валин, глицин), свободные от примесей основных и кислых аминокислот [52]. Однако некоторое количество нейтральных кислот попадает вместе с аргинином, лизином и гистидином в катодную камеру и с аспарагиновой и глутаминовой кислотами — в анодную. Следовательно, этот способ дает возможность получить лишь чистую фракцию нейтральных моноаминокарбоновых кислот. Уход части нейтральных кислот из центральной фракции авторы [53] объясняют следующим образом. Во-первых, pH граничных слоев мембран отличаются от значения pH в объеме электролита. Это приводит к тому, что нейтральные кислоты, попадая в граничные слои мембран, заряжаются отрицательно. В результате аминокислоты принимают участие в переносе тока, попадают и в катодное, и в анодное пространства даже при pH раствора в средней камере, близком к изоэлектрической точке. Во-вторых, согласно [53], возможна диффузия этих кислот как через катионообменную, так и через анионообменную мембраны. Однако этот источник потерь не может играть существенной роли [c.270]

Конденсацию фрагментов (D 3—6) и (D 7—10) осуществляли с помощью N, N -дициклогексилкарбодиимида. Полученный таким образом защищенный октапептид (Е 3—10) очищали противоточным распределением (54 переноса) и далее декарбобензоксилировали обработкой бромистым водородом в ледяной уксусной кислоте (100 мин). Из образовавшегося бромгидрата действием водного раствора карбоната калия удалось выделить свободный эфир октапептида (F 3—10) в достаточно чистом состоянии для использования в дальнейшем синтезе. При конденсации эфира октапептида (F 3—10) с bo-Asp(NH2)-Arg(N02)-0H (F 1—2).применяли карбодиимидный метод. Защищенный декапептид (G 1—10) очищали противоточным распределением. Гидрогенолиз пептида (G 1—10) в смеси метанола с 1,4 н. соляной кислотой при 35° и последующий гидролиз образовавшегося эфира декапептида (И 1—10) (без отделения получающегося в качестве побочного продукта хлористого аммония) действием 37%-ной соляной кислоты в течение 90 мин при 40° привели после обработки основной ионообменной смолой к смеси двух декапептидов (К 1—10) и соответствующего А5р(ЫН2-Р) -производного (I 1—10), которые удалось разделить противоточным распределением К —0,8 и 2,5 соответственно). Содержание этих двух веществ в смеси отвечает соотношению 1 1 оба они выделены в виде моноацетатов. Изоэлектрические точки декапёптндов (К 1—10) и (I 1—10) различны (7,4 и 7,9). При щелочном гидролизе в основном образуется декапептид (I 1—10) и лишь немного пептида с двумя свободными карбоксильными группами (К 1—10). [c.55]

Данные опытов с диафрагмой из н елатипы приведены в табл. 1. Если перенос воды и изменение чисел переноса в процентах нанести в виде кривых в системе координат, причем в качестве ординат взять значение этих отклонений и значения w lO , а в качестве абсцисс значения pH (рис. 4), то их характер весьма сходен с кривыми Бете и Торопова [23] для этой же диафрагмы, но дублеппой в хромовых квасцах. Также имеет место несовпадение изоэлектрических точек, определенных по переносу воды и по числам переноса ионов. Характерным для желатины является то, что [c.275]

Если индифферентную точку переноса воды принять за изоэлектрическую точку желатины (что в большинстве случаев делается), то эта точка лежит в области pH—4,70. Это ие отличается от данных для этой диафрагмы Лойда [24] (рН = 4,6), Фрейндлиха [25] (рН=4,7), Оствальда, Кюна и Беме [26] (рН = 4,7—5,25) и ряда других исследователей. [c.276]

Однако правильней в данном случае в качестве изоэлектрической точки диафрагмы принимать индифферентную точку нереноса ионов z = 0), так как различие в степени гидратации может порождать перенос воды и в том случае, когда диафрагма не обладает электрокинетическим потенциалом. Это различие в гидратации ионов для НСЛ подтверждается из послодинх работ Баборовского, Вагнера [27] и др. Они нашли для 0,01 N НС1 значения гидратации Н-иона 5 молей Н2О и С1-пона 26,6 молей Н О. [c.276]

За исключением прибора Aндep (Jнa, только что упомя. нутые приборы имели по три камеры. В случае аминокислот бесполезно вводить большее количество камер, так как аминокислоты нейтральной группы в широком интервалс рН практически не заряжены, так что дальнейшее разделение этой группы невозможно. Белки, однако, имеют резкие изоэлектрические точки и способны к электрофоретическому переносу даже при значениях pH, близких к изоточке. Естественно поэтому, что для разделения белков были применены многокамерные ячейки. Руппель, Орнштейн, Карл и Лаш[96] установили, что разделение желатины и других белков, а также серумальбумина и [c.249]

Свойства того или иного белка в значительной мере определяются набором и соотношением в нем аминокислот. Некоторые из таких зависимостей известны. Так, изоэлектрическая точка белка (см. табл. 3), т. е. pH среды, при котором отсутствует перенос белка в электрическом поле, зависит от соотношения катионных и анионных групп. Сравнительная оценка изоэлектриче-ских точек 300 белков показала, что их распределение подчиняется почти симметричной одновершинной кривой с пиком при pH 4,5. Это свидетельствует о том, что у большинства природных белков дикарбоновые аминокислоты преобладают над диаминокислотами, сообщая белкам суммарный от рицательный заряд. Высокое содержание про, гли и асп в белке способствует его хорошей растворимости в спирте большое число полярных групп в молекуле белка приводит к появлению эластичности и т. п. [c.46]

Буфер для переноса должен обеспечить эффективное вымывание белков из матрицы геля и связывание их с мембраной. Поскольку оптимальные условия для переноса различных белков отличаются, имеются несколько систем буферов, пригодных для данной цели. Наиболее часто применяется буферная система, впервые описанная Towbin с соавт. (25 тМ Трис, 193 тМ глицин, 20% метанол, 0.05 - 0.1%о ДДС-Na, pH 8.3). Для переноса большинства белков в этом буфере достаточно проводить процесс при напряжении 7.5 В/см и токе от 200 до 800 мА в течении 3 часов. Добавление в буфер для переноса метанола позволяет предотвратить разбухание геля, а также способствует извлечению SDS из комплекса с белками и обеспечивает их ренатурацию. В то же время, поскольку белки плохо переносятся вблизи их изоэлектрической точки, для переноса используются и другие буферные растворы по Davis с соавт. (20 тМ трис -ацетат, 2 тМ [c.64]

Изоэлектрическое фокусирование в пластинах полиакриламидного геля. Предложена методика проведения ИЭФ в тонком слое 5%-ного полиакриламидного геля, содержащего 2% амфолина [71]. Гель получают путем фотополимеризации в кювете, образованной двумя стеклянными пластинками, которые удерживаются на расстоянии 1 мм друг от друга с помощью прокладок из силиконовой трубки. Поверх ность одной из пластинок оиликонизируют. Всю конструкцию скрепляют большими пружинными зажимами для бумаги. По око1нчании полимеризации силиконизнрованную пластинку отделяют от геля, который остается прикрепленным ко второй пластинке. Для внесения пробы кусочек фильтровальной бумаги пропитывают определенным объемом исследуемого раствора и вставляют в щель, прорезанную в слое геля. Затем пластинку с гелем переносят в пластмассовую коробку и укладывают на два горизонтально расположенных угольных стержня, служащих электродами. Катод и анод смачивают 5%-ными растворами соответственно этилендиамина и фосфорной кислоты. На время опыта в коробку помещают насыщенную водой синтетическую губку для создания в камере влажной атмосферы. ИЭФ проводят в [c.149]

Окрашенные срезы кисточкой переносят в буферные растворы с различной коицентрадпей водородных ионов по три среза в каждую, В буферных растворах их выдерживают 1...2 ч. Затем срезы вынимают, размещают на предметном стекле в определенном порядке и рассматривают под микроскопом прн малом увеличении. В растворах с pH ниже ИЭТ окраска ткани будет розовой при pH выше ИЭТ — синей. Переход окраски (фиолетовый цвет) будет указывать иа то, что pH внешнего раствора соответствует ИЭТ ткани. Изоэлектрическая точ ка для коры и ксилемы будет неодинакова (переход окраски от розовой к синей будет наблюдаться при разном pH). Следовательно, состав цитоплазмы в клетках этих тканей различен. [c.13]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология