ДНФ-аминокислот сухой метод

Разделение на окиси алюминия. В качестве примера разделения дикарбоновых аминокислот опишем опыты советских исследователей В. Л. Кретовича и А. А. Бундель (1948), исследовавших содержание свободных дикарбоновых аминокислот в растениях. Указанными авторами был разработан применительно к растительным объектам хроматографический метод определения суммы дикарбоновых аминокислот. Этот метод заключается в пропускании водного экстракта из фиксированного кипящим этиловым спиртом растительного материала через колонку окиси алюминия, обработанную слабой соляной кислотой, с последующим вытеснением адсорбированных дикарбоновых аминокислот раствором щелочи. Общий ход процедур следующий. Определенное количество свежего растительного материала фиксируют кипящим 96%-ным этиловым спиртом в течение 5 мин. Удалив спирт, растирают сухой [c.123]

В соке, сгущенном до 48% сухих веществ, методом хроматографического разделения на бумаге идентифицированы следующие аминокислоты цистеин, гистидин, аргинин, серин, глутаминовая кислота, пролин, 0-фенил-а-аланин, триптофан, лизин, тирозин. [c.406]

ОБРАЗОВАНИЕ СЛОЖНЫХ ЭФИРОВ. Карбоксильная группа аминокислоты легко этерифицируется обычными методами. Например, метиловые эфиры получают, пропуская сухой газообразный хлористый водород через раствор аминокислоты в метаноле. [c.395]

В состав клеток микроорганизмов, так же как и в состав других живых клеток, входят белки, ферменты, аминокислоты, витамины, липиды и другие органические вещества, которые можно выделить из биомассы клеток, применяя методы химической технологии. Эту же биомассу можно использовать как источник получения перечисленных выше веществ для питания человека (дрожжи) и для целей животноводства. При оптимальных условиях в среде культивирования можно достичь выхода до 100 г/л сухой биомассы. [c.4]

Биологический ил, представляющий собой хлопьевидную массу, богат разнообразными питательными веществами (белками, углеводами, жирами, витаминами, аминокислотами, минеральными веществами и др.). Поэтому вполне оправдан поиск способов извлечения этих веществ или применения сухого ила в качестве кормовых добавок для сельскохозяйственных животных. Так, разработана схема утилизации избыточного ила после биохимической очистки сточных вод в производстве синтетических жирных кислот, по которой активный ил уплотняется методом напорной флотации со снижением влажности, а затем сушится в печах с псевдоожиженным слоем. Высушенный в мягком режиме до влажности 10—20% ил практически-не меняет своих биохимических свойств и в таком виде может быть использован как добавка в корм животным [95]. [c.175]

С помощью распределительной хроматографии легко осуществляется разделение аминокислот и определение их в-смеси. Метод заключается в том, что каплю смеси аминокислот или гидролизата белка наносят на полоску фильтровальной бумаги, конец которой опускают в подходящий органический растворитель. Растворитель насасывается полоской фильтровальной бумаги и увлекает за собой нанесенные на бумагу аминокислоты. Скорость перемещения аминокислот на бумаге зависит от химического строения аминокислот и от их способности растворяться в подвижном и неподвижном растворителе. В качестве подвижного растворителя употребляют, например, водонасыщенный фенол (или н. бутиловый спирт, амиловый спирт и др.). Неподвижным растворителем является вода, пары которой насыщают фильтровальную бумагу (внешне бумага остается сухой). Чем меньше растворимость аминокислот в воде и чем больше их растворимость в феноле, тем быстрее они движутся вслед за фронтом органического растворителя. [c.21]

Количество связанного лиганда определяется в зависимости от его природы с помощью методов, основанных, как правило, на освобождении аффинного лиганда в результате щелочного или кислотного гидролиза. Анализируя пептиды, удобнее всего определять количество аминокислот после кислотного гидролиза [3]. При использовании радиоактивного лиганда целесообразно проводить измерение радиоактивности. Концентрацию связанного аффинного лиганда удобнее выражать числом микромолей этого лиганда, приходящимся на 1 мл набухшего в колонке геля, а не на 1 г сухого носителя. [c.12]

Для того чтобы определить число концевых групп на 1 моль белка, необходимо точно знать содержание белка в ДНФ-производ-ном. Воздушно-сухие ДНФ-белки обычно содержат около 70% белка, но нужно получить точные данные на основании аминокислотного анализа или определения амидного азота. Последнюю величину можно просто и быстро определить для ДНФ-белка и исходного белка при помощи метода, описанного на стр. 271. Другой возможный путь состоит в сравнении содержания трех или четырех различных аминокислот. [c.142]

Распределительная хроматография. Принцип распределительной хроматографии впервые описан Мартином и Синджем в их работе по аминокислотам. В этом случае, вместо равновесия между твердой и жидкой фазами, устанавливающегося при работе по методу Цветта, равновесие устанавливается между двумя жидкими фазами, причем одна из жидкостей поддерживается в состоянии геля или находится на подходящем субстрате. Сначала был применен силикагель, способный адсорбировать до 70% воды и сохраняющий при этом вид сухого порошка. При пропускании раствора исследуемой смеси в несмешивающемся с водой растворителе (например, в хлороформе) через колонку из силикагеля происходит разделение компонент смеси, обусловленное различиями их коэффициентов распределения. Впоследствии в качестве стационарной фазы стали применять листы фильтровальной бумаги, насыщенной водой. Наиболее подходящими органическими растворителями оказались фенол, н-бутиловый спирт, коллидин и некоторые другие растворители, частично смешивающиеся с водой. Индивидуальные аминокислоты были идентифицированы по цветным реакциям и охарактеризованы величинами Rf, представляющими собой отношения скорости движения зоны адсорбции к скорости движения фронта растворителя. Можно также измерять и использовать для идентификации отношение расстояния, на которое переместилось данное вещество, к расстоянию, на которое перемещается эталонное вещество (например [c.1512]

Наряду с использованием в качестве удобрения представляют интерес другие методы утилизации осадков, которые изучаются в настоящее время. К таким методам относятся приготовление из активного ила кормовых добавок к рационам питания сельскохозяйственных животных и ценных пород зверей , получение из активного ила витамина В12 и аминокислот, получение ценных продуктов при сухой перегонке осадков и, другие методы. [c.196]

Но все же метод Фишера не мог быть применен для точных количественных определений аминокислотного состава белков. При самых благоприятных условиях перегонки могло быть определено не более 70% анализируемых сухих веществ. В большинстве же случаев определению в расчете на чистые аминокислоты подвергалось не более 50% исходных веществ. Для суждения о количественном содержании аминокислот необходимо было прибегнуть к весьма искусным, но в то же время спорным интерполяциям. Количественный аминокислотный анализ белков был удовлетворительным лишь в исключительных случаях. Примером этого может служить фиброин шелка, который при гидролизе давал около 36 /о глицина, легко количественно отделяемого в воде от трудно растворимых хлоргидратов эфиров других аминокислот. [c.77]

В 1905 г. Фишер предложил использовать метод синтеза пептидов, при котором нет необходимости блокировать аминогруппу. Метод был основан на способности некоторых аминокислот быстро превращаться в кристаллические хлоргидраты хлорангидридов аминокислот при встряхивании суспензии аминокислот и пятихлористого фосфора в ацетилхлориде без нагревания. При помощи этого метода были синтезированы хлорангидриды -лейцина, L-аланина, DL-фенилаланина и L-пролина. Прибавлением хлоргидрата хлорангидрида аланина к раствору этилового эфира гликоколла в сухом хлороформе и нейтрализацией образовавшегося хлористого водорода эквивалентным количеством метилата натрия с последующим омылением эфира дипептида щелочью был получен L-аланил-глицин [172]. [c.81]

Методика определения. В колбу Эрленмейера емкостью 100 мл отмеряют пипеткой 25 мл фильтрата и прибавляют (для осаждения белков) несколько капель 5— 10%-ного раствора фосфорновольфрамовой кислоты. Осадок отфильтровывают и отбирают пипеткой Мора 5—10 мл фильтрата в небольшую коническую колбу. Затем прибавляют 3 мл 1%-ного раствора гидросульфита, хорошо перемешивают и оставляют на 30 мин. Избыток гидросульфита связывают вначале 0,1 н., а затем 0,01 н. раствором 1г в растворе KI. Комплексное соединеняе пировиноградной кислоты с гидросульфитом разрушают, добавляя 1 г сухого NaH Oj, и выделившийся NaHSOi оттитровывают 0,01 н. раствором Ij в растворе KI, 1 мл этого раствора соответствует 0,14 мг пировиноградной кислоты. Этот метод в присутствии больших количеств аминокислот сопровождается значительными погрешностями. [c.214]

Синтез. Улучшением старого метода синтеза дикетопиперазинов путем нагревания сухих аминокислот явилось применение растворителей, таких, как глицерин [254] или этиленгликоль [255], которые умеряют реакцию. Температура поддерживается обычно 170—175°. Для аминокислот с двумя алкильными группами у а-углеродного атома требуются значительно более высокие температуры [256]. В некоторых случаях при нагревании эквимолекулярной смеси двух различных аминокислот в качестве главных продуктов реакции могут получиться смешанные ангидриды аминокислот. [c.354]

Белковые вещества пентозных дрожжей представлены протеинами (нуклеопротеин, фосфопротеин, лецитопротеин, гликопротеин), глобулинами, альбуминами и более простыми — пептонами, полипептидами и аминокислотами. Анализ белка хроматографическим методом показал, что он содержит все жизненно необходимые аминокислоты. Количество их- в пентозных дрожжах следующее (в % от сухого вещества) [c.572]

Солодоращение. Проросшее зерно, обогащенное активно действующими ферментами, называется солодом. В зерне содержатся ферменты, расщепляющие белок (протеолитические) и осаха-ривающие крахмал (диастаз). В сухом зерне эти ферменты инактивны и становятся активными в проросшем зерне при наличии достаточного количества влаги и тепла в благоприятных условиях ферменты выполняют сложнейшие биохимические процессы расщепления белка (на пептоны и аминокислоты) и гидролиза крахмала в сахар. Процесс солодоращения осуществляют следующим образом зерно подвергают очистке от пыли в сепараторе или в веялке, сортировке на сите - трясучке или бурате и затем направляют на замочку в железных чанах цилиндрической формы, переходящей внизу в конус. Чан снабжен мешалкой или трубопроводами для подачи сжатого воздуха. Вода подводится в аппарат снизу, а грязная вода спускается по трубопроводу. Чан устанавливают над солодовней. Набухшее зерно спускают через трубопровод и спускной клапан. Замочку ведут путем чередования периодов пребывания зерна под водой и без воды. Обычно 6 час. зерно находится под водой при температуре 15°, а затем воду спускают и оставляют зерно в чане на 6 час. без воды, для обеспечения доступа кислорода, необходимого для дыхания зерна. Эти операции чередуют до тех пор, пока зерно набухает. Продолжительность замочки ячменя по ускоренному методу стахановца Беренда составляет 18 час. [c.196]

Метод. Белок гидролизуют 8 н. серной кислотой и удаляют неорганическую кислооу при помощи барита. Нагревают раствор аминокислот до кипения и добавляют избыток карбоната меди. Затем раствор целиком вместе с избытко.м СиСОз упаривают на паровой бане до густого сиропа и тщательно высушивают соли, осторожно добавляя избыток ацетона. Сухие соли растирают в порошок и сушат в течение нескольких часов в шкафу при 110°. Если нужно, их после этого еще раз растирают h экстрагируют повторно сухим метанолом до получения бесцветного фильтрата. В раствор при этом переходят медные соли изолейцина, валина, оксивалина ( ), пролина и некоторые другие. Основная масса лейцина остается в осадке. [c.278]

Основы метода. Фракция эфиров аминокислот, переходящая ниже 90°, при 0,5 мм давления подвергается гидролизу раствор свободных аминокислот выпаривают досуха и сухой остаток тщательно экстрагируют абсолютным спиртом. Содержание пролина определяют в той части остатка, которая полностью растворится в холодном абсолютном спирте. Для определения осаждают пролин в виде медной соли или в виде комплексного соединения с хлоридом кадмия или в виде пикрата . можно также вычислить содержание пролина по неаминному азоту. [c.338]

Основы метода. После з даления основных аминокислот извлекают пролин и оксипролин бутиловым спиртом (Дэкин [183, 185]). От прочих моноаминокислот в экстракте пролин отделяют обработкой сухой смеси аминокислот этиловым спиртом, после чего из этого же осадка извлекают оксипролин при помощи пропилового спирта. [c.339]

Основы метода. После удаления серной кислоты из гидролизата [366] аминокислоты переводят нагреванием их с СиСОз в медные соли. Раствор медных солей выпаривают до густого сиропа и тщательно сушат повторной обработкой ацетоном. Затем растертые в порошок медные соли экстрагируют 6 раз абсолютным метанолом на приборе для взбалтывания. Спиртовые экстракты отделяют и медь из них удаляют сероводородом. Раствор аминокислот упаривают досуха и пролин извлекают из сухого остатка абсолютным спиртом. [c.341]

Использование Д. как химич. сырья до нек-рой степени тормозится трудностью получения из нее чистых веществ. Все же на переработке Д. основаны многие произ-ва целлюлозно-бумажное, гидролизное, сухая перегонка Д., углежжение, энергохимич. переработка Д., производство древесных плит и пластиков (см. Древесние пластики, Древесно-слоистые пластики), дубильных экстрактов, канифоли и др. Только на получение целлюлозы в мире расходуются сотни млн. м Д. С каждым годом ее использование как химич. сырья будет расширяться. Методом гидролиза Д. можно будет получать фурфурол, чистую глюкозу, этиловый и др. спирты, уксусную и др. органич. к-ты методом биосинтеза — многие ценнейшие аминокислоты и др. Выявляются также все новые возможности направленного пиролиза Д. с целью получения чистого фурфурола, уксусной к-ты, левоглюкозана, дешевых фенолов, синтетич. дубителей, угля для получения сероуглерода и др. Кору дуба, ели и ивы широко используют для получения дубильных экстрактов. Из любой коры, особенно после ее обработки аммиаком, можно получить [c.380]

Очистка первичного газа от серы может проводиться сухим способом при помощи массы Лаута (стр. 43), которую после насыщения серой регенерируют, экстрагируя серу сероуглеродом. Газ можно очищать и мокрым способом, например по алкацид-иому методу (калиевыми солями аминокислот) или раствором К.,СО,, (по методу Коннерса). [c.65]

При выборе метода выделения фенола, встречающегося в природе, необходимо учитывать не только свойства соединения, как упоминалось выше, но также и химический состав биологического источника. Растительный материал состоит в основном из нерастворимой целлюлозы и лигнина, а в свежем виде может содержать также большое количество (70—80%) воды. Кроме того, могут присутствовать хлорофилл, воски, жиры, терпены, сложные эфиры, растворимые в воде соли, гемицеллюлозы, сахара и аминокислоты. Из свежего или сухого материала, как правило, сначала выделяют с помощью неполярного органического растворителя (например, петролейного эфира, гексана, бензола, хлороформа или эфира) нефенольные, неполярные вещества. Фенольные соединения можно затем выделить путем экстракции ацетоном, этанолом, метанолом или водой, причем выбор растворителя определяется числом гидроксильных групп и остатков сахара в молекуле. В некоторых случаях растительные материалы подвергаются непосредственной экстракции щелочью, но это не всегда приводит к хорошим результатам. Фенолы из растительного материала затем очищаются путем ряда экстракций и осаждений. С этой целью сырой материал переносят в несмешивающийся растворитель, такой, как эфир, бутанол или этилацетат, и смесь последовательно экстрагируют разбавленными растворами оснований в порядке возрастания активности сначала ацетатом натрия (для удаления сильных кислот), а затем бикарбонатом натрия, карбонатом натрия и едким натром. Водные экстракты, содержащие искомые продукты, подкисляют и вновь экстрагируют бутанолом, эфиром или этилаце-татом. Процедуру повторяют до получения кристаллического продукта. Подобное фракционирование в настоящее время осуществляется путем автоматической подачи несмешивающихся растворителей по принципу противотока (Хёрхаммер и Вагнер [9]). Фенолы можно отделять от других продуктов, содержащихся в растениях, путем осаждения с помощью нейтрального или основного ацетата свинца. Этим методом до некоторой степени отделяются о-диоксисоединения (дают осадок) от монозамещенных соединений (не дают осадка). Соли свинца разлагают серной кислотой, сероводородом или катионообменными смолами и свободные с )енолы элюируют из неорганических солей спиртом. [c.36]

Известно, что однохлористая сера дает с ароматическими. аминами ряд окрашенных соединений (13, 14]. Химизм этих реакций и свойства получаемых соединений мало изучены. Так, судя но реакции Герца, в молекулу полученного соедпнения входят хлор и сера, а по работе Шингте и сотрудников — только сера. Мы применили данную реакцию для разработки фотометрического метода определения микрограммовых количеств юднохлористой серы в воздухе. В качестве растворителя был выбран сухой четыреххлористый углерод, который не вступает в реакцию с однохлористой серой. Реактивами служили первичные, вторичные, третичные ароматические амины, диамины, содержащие в своем составе метильные, ацетильные, карбоксильные группы и сульфогруппы. Установлено, что вторичные амины, а также аминокислоты окрашенных сое-динений с однохлористой серой не образуют. п-Аминофе-нол, а-нафтиламин и, в особенности, диметил и-фенилендиамин, с которым производили дальнейшие исследования, образуют с однохлористой серой интенсивно окрашенные растворы. [c.448]

Метилош.10 эфиры. В 1960 г. Сэрофф и Кармен [26] разделили методом газо-жидкостной хроматографии метиловые эфиры К-три-фторацетилнроизводных 14 аминокислот. При синтезе этих производных авторы получали сначала метиловые эфиры соответствующих аминокислот, применяя сухой хлористый водород в качестве катализатора, затем их ацилировали. Однако в этих условиях при этерификации смеси аминокислот глицин реагировал с некоторыми из них, вследствие чего выход его эфира уменьшался. Поэтому в качестве катализатора была использована смола Дауэкс-50 в Н+-форме, применение которой не только улучшало выход, но и позволяло легко удалять воду, образующуюся в процессе этерификации. [c.15]

Для количественного определения аминокислот использовали стандартный раствор аланина и глицина концентрация каждой аминокислоты в растворе составляла 0,01 моль1л раствор сухого гидролизата брали определенной концентрации (приготовлен из навески, взятой с точностью до 0,0002 г). Концентрация определяемых аминокислот в исследуемом гидролизате должна была составлять 0,01—0,03 моль1л. Для этого, как правило, концентрация гидролизата должна быть 2—4%. Растворы приготовляли в 10%-ном изопропиловом спирте для продолжительного хранения. Метод разрабатывали на примере анализа жмыха поджелудочной железы. [c.151]

В работе использовали ионообменные смолы, приготовленные на основе сополимеров стирола и п-дивинилбензола [1,2]. Опыты проводили в статических условиях. Навеску иоиита в воздушно-сухом состоянии заливали 0,05 М раствором аминокислоты. Концентрацию аминокислоты в растворе, после 72 часов контакта с ионитом, определяли методом формоль-ного потенциометрического титрования [3]. [c.30]

Чаще всего для обнаружения аминокислот и пептидов применяется нингидрин (гидрат трикетогидриндена), так как он образует окрашенные продукты. Самый простой метод обнаружения заключается в следующем. Сухую хроматограмму погружают в раствор нингидрина в ацетоне, чаще всего 0,2%-ный (при этом достигается однородное покрытие бумаги реагентом), сушат в течение непродолжительного времени и помещают в большой ящик, стенки которого опрыскивают спиртовым раствором лимонной кислоты, чтобы исключить попадание на них аммиака. При комнатной температуре пятна аминокислот обнаруживаются примерно через час, и их окраска достигает оптимальной интенсивности примерно за 8 ч. Пятна пептидов обнаруживаются медленнее, поэтому лучше всего выдержать хроматограмму в этом ящике до следующего дня. Появление цветных пятен ускоряется, если хроматограмму нагревают при 50—60 °С. [c.125]

Химическая характеристика высокомолекулярных соединений путем исследования продуктов деструкции основывается на особенностях строения полимеров. В некоторых случаях продукты распада определенного строения получаются уже при сухой перегонке, для многих полимеров деструкция протекает вплоть до образования мономеров. При облучении ультрафиолетовыми лучами и при размоле в шаровой мельнице также происходит деструкция полимеров, но большей частью только до низкомолекулярных полимеров (например, при размоле полистирола в шаровой мельнице происходит деструкция до степени полимеризации около 100). Направленная деструкция, сопровождающаяся разрывом определенных связей в макромолекуле, позволяет сделать конкретные выводы о строении полимера. Такая реакция имеет место при расщеплении озонидов каучука (см. стр. 81), а также при гидролитическом расщеплении полисахаридов (см. стр. 86, 87 и 91) и идентификации осколков макромолекул известными методами, используемыми для низкомолекулярных соединений. Исследования продуктов распада белков и нуклеиновых кислот также дали возможность сделать предварительные выводы о их строении и о строении структурных единиц (об анализе аминокислот см. стр. 97). О специфических методах ферментативного расщепления было уже упомянуто выше (см. стр. 92). Для установления строения поливинилового спирта, полученного из поливинилацетата, наряду с отсутствием янтарной кислоты в продуктах разложения (как показали Штаудингер и Штарк, см. стр. 107) решающим явился тот факт, что этот полимер не деструктируется или очень незначительно деструктируется такими реагентами, как йодная кислота, расщепляющая 1,2-гликоли (Мар-вел и Деноон). [c.182]

Метод вытеснения особенно ценен в тех случаях, когда приходится разделять большие количества различных соединений. Партридж и Бримли выделили 16 аминокислот из гидролизата 280 г продажного яичного альбумина выход составил 54% (по сухому весу) взятого белка. [c.65]

Исследования по выяснению влияния на токсин частичного кислотного гидролиза проводились Бишопом с соавторами (Bishop et al., 1959) с экстрактами, полученными по первому вышеописанному методу и содержащими 1000 М. Е./мл. После их вьь паривания к сухому остатку добавлялась смесь ледяной уксусной кислоты с 10 н. соляной кислотой (1 1,2 мл/объем). Смеси выдерживались в темноте при 37°. Через 24, 48, 70 и 94 часа в них проводились биологические испытания и хроматографирование. Оказалось, что за 24 часа гидролиз снижал токсичность на 50%, через 48 час.— на 757о- Полная инактивация наблюдалась через 70 час. При хроматографировании же были обнаружены свободные аминокислоты во всех интервалах по времени. Хроматограммы с аналогичными аминокислотами были получены и из гидролизата исходного материала, гидролиз которого проводился в запаянных ампулах 10 и. соляной кислотой при 105°. [c.160]

Бреннер и Нидервизер [23], а также Фэми и др. [24] провели обширное исследование разделения аминокислот на силикагеле О они получили величины для 26 соединений в различных растворителях (табл. 17.1). Разделение. осуществляли на воздушно-сухих пластинах силикагеля в насыщенной атмосфере. Трудноразделимые пары соединений удалось эффективно разделить методом двумерного хроматографирования с различными растворителями. После 10-минутной сушки хроматограмм при 110°С авторы обнаружили пятна аминокислот реактивом Т-178. Получаемая при этом окраска пятен характерна для индивидуальных аминокислот. Длина пути разделения в этом случае составляет 10 см. Бенчер и др. [25] описали методику хроматографирования на пластинках меньших размеров при длине пути [c.479]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология