Антитело антиген разделение

Рис. 4-46. Три типа матриксов, используемых для хроматографии. При ионообменной хроматографии (А) нерастворимый матрикс содержит ионы, задерживающие молекулы с противоположным зарядом. Для разделения молекул используются следующие матриксы диэтиламиноэтилцеллюлоза (ДЭАЭ-целлюлоза) - заряжена положительно карбоксиметилцеллюлоза (КМ-целлюлоза) и фосфоцеллюлоза - заряжены отрицательно. Силы взаимодействия между молекулами в растворе и ионообменником определяются ионной силой и pH элюирующего раствора, которые для достижения эффективного разделения можно варьировать определенным образом (как на рис. 4-47). При хроматографии по методу гель-фильтрапии (Б) матрикс инертен, но содержит поры. Низкомолекулярные соединения проникают внутрь частиц матрикса. Оказавшись при этом в относительно большем объеме, они проходят через колонку медленнее. В качестве матрикса можно использовать зерна поперечно-сшитого полисахарида (декстран или агароза). Поскольку в продаже имеются полисахариды с самым различным размером пор, их можно использовать для фракционирования молекул с молекулярной массой от 500 до 5 х 10 дальтон. При аффинной хроматографии (В) используется нерастворимый матрикс, ковалентно связанный со специфичными лигандами (антителами или субстратом ферментов), которые присоединяют определенный белок. Связываемые иммобилизованным субстратом молекулы фермента можно элюировать концентрированными растворами субстрата в свободной форме, а молекулы, связанные с иммобилизованными антителами, можно элюировать за счет диссоциации комплекса антитело антиген концентрированными растворами соли или растворами низкого или высокого pH. Однократная хроматография на такой колонке позволяет

В случае хранения в замороженном состоянии при —20 °С рекомендуется разделять антисыворотку на партии небольших объемов, чтобы не подвергать ее многократному замораживанию и размораживанию. При использовании некоторых методов необходимо, чтобы иммуноглобулины IgG были отделены от других сывороточных белков. Осаждение сульфатом аммония или комбинирование этой операции с ионообменной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе [31, 36] или с аффинной хроматографией при использовании белка А, иммобилизованного на носителе [48], позволяет легко, но более или менее тщательно очистить эти иммуноглобулины. Иммуноаффинная хроматография, используя очищенный иммобилизованный антиген, дает возможность производить очистку специфических антител белка при разделении фракции IgG или даже антисыворотки. [c.97]

Преимуществом колоночной хроматографии является возможность количественного фракционирования больших количеств веществ без превращения их в какие-либо производные. Однако хорошее разделение часто возможно лишь при малых скоростях элюирования, поэтому были разработаны новые виды колоночной хроматографии. Методы аффинной и адсорбционной хроматографии основаны на избирательной адсорбции молекул на нерастворимом адсорбенте, который содержит группы (молекулы), специфически взаимодействующие с молекулами подлежащих очистке соединений, например ингибиторы (для очистки ферментов) или антитела (для очистки антигенов) в настоящее время эти методы нашли широкое применение и для разделения углеводов. Невзаимодействующие с адсорбентом примеси удаляются, а связанный с адсорбентом сахар затем десорбируют способом, не приводящим к его разрушению. Десорбцию можно осуществить, изменяя pH, ионную силу среды или применяя соответствующий ингибитор взаимодействия, удерживающего вещество на адсорбенте. Для разделения ряда полисахаридов были использованы иммобилизованные формы (см. разд. 26.3.7.6) конканавалина А [40], являющегося фитогемагглютинином (лектином), который специфически взаимодействует с разветвленными полисахаридами определенного строения в настоящее время применяют и другие иммобилизованные фитогемагглютинины. Колоночная хроматография на носителях, покрытых полиароматическими соединениями [41], также находит применение для разделения полисахаридов. Благодаря достижениям в производстве носителей для жидкостной хроматографии под высоким давлением можно осуществить хроматографическое разделение быстро и избирательно описаны методы фракционирования небольших олигосахаридов, продолжающегося менее 1 ч [42]. [c.224]

Гель-электрофорез. Электрофорез на геле и крахмале применяют для аналитических целей. Наиболее важным применением гель-электрофореза является иммуноэлектрофорез. Для этого вида анализа используют макропористые гели, в частности гели агара и агарозы. Метод иммуноэлектрофореза основан на том, что после разделения электрофорезом происходит диффузия разделенных веществ — антигенов — в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Навстречу этим соединениям диффундируют антитела. При соединении антигенов и антител образуются характерные дуги осаждения. Метод иммуноэлектрофореза очень чувствителен при обнаружении антигенов, специфических для данных антител. В настоящее время применяют метод введения радиоактивной метки в антигены, благодаря чему радиоиммуноэлектрофорез является одним из самых чувствительных методов анализа биополимеров. [c.364]

Для анализа антигенов, разделенных с помощью электрофореза или электрофокусирования в полиакриламидном геле, разработаны многочисленные методы иммунодиффузии. Так, для этой цели можно использовать различные варианты двойной иммунодиффузии. Цилиндрические столбики геля разрезают продольно на две половинки (см. разд. 1.15.6), а из пластин нарезают полоски, содержащие разделенные антигены. Разрезанный гель помещают на стеклянные пластинки, заливают их теплым раствором агара и дают ему застыть. Канавки для антител располагают на соответствующем расстоянии от полиакриламидного геля. Как только полиакриламидный гель покроется слоем агара толщиной 1 мм, в непосредственной близости от него сразу же вырезают канавку для антисыворотки. Если для анализа используют разрезанные вдоль столбики полиакриламидного геля, то их кладут на слой агарового геля и в нем рядом с полоской геля по обеим ее сторонам быстро вырезают канавки для антител. Преципитаты образуются под полоской полиакриламидного геля. Столбик полиакриламидного геля можно также разрезать в поперечном направлении на диски и проанализировать присутствующие в них антигены методом двойной радиальной диффузии 203, 394]. [c.244]

Большие возможности совершенствования промышленной биотехнологии заключены в развитии и интенсификации не только основной стадии — ферментации, но и последующих этапов разделения, очистки и получения товарных форм препаратов. Здесь прогресс крупнотоннажного микробиологического синтеза связан с грамотным применением и модификацией известных процессов химической технологии, таких, как разделение суспензий, выпарка, сушка, ионный обмен, кристаллизация, экстракция и особенно мембранные методы ультрафильтрации, обратного осмоса, диализа и т. п. Отметим, однако, что биотехнология должна и уже начала развивать свои специфические методы выделения биологически активных веществ, основанные на биологических взаимодействиях. Например, чрезвычайно перспективна хроматография культуральных жидкостей на носителях, несущих антитела к имеющемуся в растворе антигену, что позволяет выделить чистый биопрепарат из растворов практически любой концентрации и сложности. [c.139]

Поверхность фазы носителя рассматривают в целом как имеющую однородное распределение иммобилизованных антител, но это очевидное упрощение. Существует доказательство, что поверхность имеет фрактальную геометрию, где адсорбированные антитела собраны в островки высокой плотности, разделенные областями с малой населенностью (рис. 7.9-8,б). Обычное равновесие ассоциации/диссоциации между антителом и антигеном также имеет тенденцию к нарушению, поскольку крайне высокая локальная поверхностная концентрация антител в островных кластерах препятствует диссоциации антигена, и поэтому, если антиген был уже связан, процесс в значительной степени становится необратимым. [c.575]

Имеются также окислительно-восстановительные иониты (получаемые поликонденсацией гидрохинона, пирогаллола и пирокатехина с формальдегидом и фенолом), иониты с оптически-актив-ными группировками (для разделения оптических изомеров), иониты с антигенными группировками (для отделения антител), биполярные иониты (с кислыми и основными группировками) и др. [c.116]

В другой группе методов используется электрофорез для разделения компонентов до проведения иммунохимической реакции [41] или для введения антигенов в среду, содержащую антитела [66], или для достижения этих двух целей [65, 94]. Эти три основных метода приведены на рисунке 4.6. [c.103]

Рис. 2. Разделение на колонке с сефадексом Г-200 смеси яичного альбумина (3), иммунного гамма-глобулина (2), являющегося в данном случае антителом к альбумину, и продукта их взаимодействия— комплекса антиген — антитело ) (по Тархановой, 1966).

Принцип метода. После электрофоретического разделения исследуемого белка в агаровом геле компоненты специфической иммунной сыворотки диффундируют навстречу полученным фракциям через слой агарового геля, содержащий известные (контрольные) антигены, которые абсорбируют соответствующие антитела и. задерживают их дальнейшую миграцию к определяемым антигенам. В результате в образовании полос преципитации принимают участие только те антигены исследуемого образца, которые отличаются от контрольных. [c.150]

Успехи ионообменной хроматографии были в значительной мере обусловлены синтезом ряда специальных ионообменных полимеров или смол (ионитов). Различают два основных вида ионитов 1) катиониты, способные к обмену катионов, представляющие собой сетку высокомолекулярных полиэлектролитов с многочисленными сульфогруппами (рис. 105), карбоксильными группами и др. (амберлит JR-100, дауэкс-50, отечественные КБ-4, СБС и др.) 2) аниониты, способные к обмену анионов (0Н , С1 и др.) и представляющие собой сетку высокомолекулярных катионов (амберлит JRA-400, дауэкс-2, вофатит-М, отечественные ЭДЭ-10, ПЭК и др.). Поглотительные емкости ионитов доходят до 3—10 миллиграмм-эквивалентов на 1 г ионита. Имеются также окислительно-восстановительные иониты (получаемые поликонденсацией гидрохинона, пирогаллола и пирокатехина с формальдегидом и фенолом), иониты с оптически активными группировками (для разделения оптических изомеров), иониты с антигенными группировками (для отделения антител) и др. [c.239]

Этот метод весьма полезен, например, при диагностике недостаточности синтеза иммуноглобулинов какого-либо класса. В этом случае электрофоретическому разделению подвергают нормальную сыворотку человека, в зону абсорбирующих антигенов вносят сыворотку больного, а в зону иммунной сыворотки — антисыворотку к сывороточным белкам человека. В образовании полос преципитации с фракциями нормальной сыворотки человека принимают участие только те антиглобулиновые антитела, которые не встретили соответствующих им иммуноглобулинов в сыворотке больного, диффундируя из зоны антисыворотки в зону нормальной сыворотки. В результате появляются полосы преципитации, которые соответствуют отсутствующему классу иммуноглобулинов, например IgG, IgA или IgM. [c.152]

Другой тип двумерного разделения с применением изоэлектрической фокусировки — это метод, в котором используется иммунодиффузия. В этом методе разделение проводят изоэлектрической фокусировкой на полиакриламидном геле, а затем фрагмент геля вводят в агарозу, содержащую антисыворотку. После этого проводят электрофорез в направлении, перпендикулярном первому разделению. Белки перемещаются в агарозу, и в ней появляются зоны миграции антигенов-антител [419]. [c.177]

В. М. Лауфер показали, что необходимо специальное исследование физиологической безвредности ряда анионитов, например, ММГ-1, ТН и других. Во всяком случае, применение ионитов, открывает новые возможности перёд медициной и позволяет вмешиваться по новому в ряд важных биохимических и физиологических процессов, протекающих в организмах человека, животных и растений. Метод ионного обмена позволяет более тонко и дифференцированно изучать различные процессы жизнедеятельности, протекающие в организме. Наиболее важным является возможность разделения, концентрирования аминокислот, витаминов, антибиотиков. Ионообменные смолы можно также применять для медицинской диагностики различных заболеваний, для очистки антител при помощи антигенов, связанных с зернами ионитов, и в других случаях. [c.276]

В конкурентном иммунном анализе устанавливают число центров, не занятых пробой он может иметь различные варианты, но суть в том, что определяемое вещество пробы смешивают с меченым определяемым веществом, и они конкурируют за активные центры (рис. 7.9-4). Метсд требует разделения связанного и свободного антигена или антитела с целью определения их относительных количеств. Если определяют антиген, присутствие меченого антигена позволяет оценить относительное разделение. Как можно заключить из кривых иа рис. 7.9-3, оптимальная чувствительность достигается при уменьшении концентраций меченого антигена и антитела. [c.569]

Из схемы, описываемой уравнением (3), вытекают следующие основные задачи, связанные с разработкой методов иммунохимического анализа а) получение специфических антител б) выбор и получение высокоочищенных антигенов в) введение маркера в исследуемое вещество г) разделение связавшихся и свободных компонентов д) выбор метода определения концентрации маркера е) оптимизация и стандартизация условий проведения анализа. [c.107]

Иммуноэлектрофорез. Исследование проводится в два этапа 1) электрофоретическое разделение исследуемого материала в агаре 2) иммунологический анализ. В агаре параллельно оси миграции электрофоретических фракций вырезают траншеи, в которые вносят иммунную сыворотку, содержащую антитела к исследуемым антигенам. В случае реакции между антигенами и диффундирующими в агар антителами формируется преципитат в виде дискретных дуг, соответст- [c.117]

Пористое стекло (диаметр пор 5 — 250 нм), как и наиболее широко применяемые носители иа основе агарозы, отличается низкой неспецифической сорбцией и высокой емкостью. Аффинная хроматография нашла широкое применение при разделении ферментов, полнпептидных и белковых гормонов, антител, антигенов, а также транспортных и рецепторных белков. [c.354]

Особое распространение получили методы, основанные на использовании антигенов и антител, меченных ферментами, — так называемый иммунофермеитный анализ. Они используются для изучения широкого круга соединений — антител, пептидных и стероидных гормонов, вирусных и бактериальных антигенов, различных белков и ферментов. Существуют гетерогенные (твердофазные) и гомогенные методы иммуноферментного анализа, принципиально различающиеся способом разделения компонентов иммунохимической реакции. Твердофазные методы основаны на применении антител или антигенов, иммобилизованных на нерастворимых носителях. [c.306]

Ингвал и др. [324] применилн принцип радиоиммуноанализа, описанный для определения кроличьего иммуноглобулина G однако вместо меченных радиоактивным изотопом антигенов они конъюгировали последние с ферментом — щелочной фосфатазой. Основой конкурентного иммуноаналнза является разделение свободных и связанных с антителами антигенов, так чтобы антигены можно было определить количественно. Это разделение можно облегчить фиксацией антител на твердой фазе путем физической сорбции на стенках полистирольных пробирок. [c.382]

Специфическая адсорбция протеина ионитами. Последние исследования Ислайкера [41, 42] по приготовлению и свойствам комплексов ионит -антиген представляют значительные и многообещающие перспективы разделения и очистки антител и некоторых антигенов. Катиониты и аниониты превратились в уникальные специфические адсорбенты для изоаглютининов человека, КЬ-антител, антител вируса инфлуэнцы и антител к альбумину сыворотки человека путем придания им высокой специфичности, проявляющейся при реакциях антитело-антиген. Эта специфичность обеспечивается химическими реакциями или физической адсорбцией в любом случае специфический антиген соединяется с ионитом, образуя нерастворимый комплекс, который легко реагирует со своим специфическим антителом, удаляя его таким образом из раствора. [c.618]

Проводить регистрацию антигенов, разделенных ДСН-электрофорезом в ПААГ, с помощью антител, меченных пероксидазой (КФ 1.11.17), впервые было предложено в работе Raamsdonk et al., 1977. [c.342]

Распределение белка и полисахарида или липополисахарида между фенолом и водой было применено для расщепления и разделения специфических осадков полисахаридных антигенов с антителами [40]. В принципе осадок диспергируют в воде и прибавляют при перемешивании равный объем жидкого фенола. После разделения фаз центрифугированием водный слой содержит свободный от антител полисахаридный антиген, который можно выделить и проанализировать. Метод позволяет очищать полисахаридные анти1 ены путем избирательного осаждения антителами [32, 40], т. е. фракционировать полисахаридные антигены по их серологической специфичности. Хоман и Лене 41] очистили препараты гепарина, содержащие белки, использовав смесь фенола с водой. Из водной фазы, которая оказалась свободной от белка, был выделен очищенный гепарин. [c.330]

Рис. 82, А. Двухмерная двойная иммунодиффузия из прямоугольных канавок. / — канавка для антигена — канавка для антител. Б. Иммуноэлектрофорез. Л 5—5 — электрофорегически разделенные компоненты смеси антигенов 2 прямоугольная канавка для смеси антигенов (стартовая зона электрофореза) б —канавка для антител (иммунной сыворотки).

Во многих определениях существует значительная разница в размерах рецептора и лигавда. Антитела имеют молекулярные массы порядка 160 ООО и могут быть легко отделены от антигенов с молекулярной массой менее 80 ООО. Наиболее широко ддя этой цели применяется эксклюзионная гель-фильтрующая хроматография. Небольшой свободнь1й меченый антиген удерживается на колонке, в то время как объемистый комплекс антиген-антитело элюируется. Метод обеспечивает хорошее разделение, но он дорог н требует затрат времени, так что он не подходит для рутинного, многократного использования. [c.578]

Б случае иммуноэлектрофореза [49 — 51] принцип электрофореза сочетается с биоспецифической аффинностью белка (рис. 3-5). Белки-антигены сначала разделяются гель-электрофоретически. При встрече с диффундированными внутрь геля антителами происходит образование комплексов антиген — антитело, наблюдаемых в виде серповидных полос преципитации. Иммуноэлектрофорез имеет особое значение в медицинской диагностике (разделение и идентификация сывороточных белков и др.). Рис. 3-6 поясняет эффективность этого метода по сравнению с другими видами электрофореза. [c.352]

Принцип, положенный в основу методов RIA [91, 117], аналогичен принципу методов ELISA эти методы в основном различаются тем, что для мечения вместо ферментов применяются радиоактивные элементы (главным образом йод) [49]. Широко используемый вариант этого метода не предусматривает иммобилизацию одного из реагентов реакция проходит в растворимой фазе, поэтому очень важным дополнительным этапом является отделение меченых реагентов, участвующих в иммунокомплексах, от тех, которые не участвуют. Если антиген представляет собой белок, обычно проводят разделение иммунокомплекса, осаждая его антителами к иммуноглобулинам кролика (если специфические антитела к белку индуцированы у кролика) [49]. [c.108]

Высокоспецифичным для диагностики ВИЧ-инфекции является метод иммунноблотинга (см. подразд. 1.4.5). При этом проводится электрофоретическое разделение вирусных белков с последующим перенесением их на мембрану из нитроцеллюлозы. Затем мембрана обрабатывается исследуемой сывороткой. Заключительный этап исследования состоит в выявлении антител к различным белкам ВИЧ. Для этого в систему добавляют антивидовые меченые сыворотки. Индикацию образующихся иммунных комплексов проводят с использованием ИФА или РИА. Результаты иммуноблотинга считают положительными при обнаружении антител к определенным вирусным антигенам р24, рЪ1, а также к gpЛ или к gp]20. [c.308]

При групповом разделении методом гель-фильтрации удается в значительной мере избежать разбавления, если учитывать объемные соотношения, подробно рассмотренные в разделе Обессоливание . При очистке суспензии вируса (выделенного из столовой свеклы) от сопутствующих пигментов путем гель-фильтрации на 4—6-кратном (по отнощению к объему образца) объеме сефадекса 0-75 разделение составляло лишь 20—30% [14]. Свободные от белков катехоламины — адреналин и норадреналин — были выделены без разбавления из 20 мл сыворотки (27% объема колонки) гель-фильтрацией на сефадексе 0-25 (2X25 сж, 78 мл) [15]. Кислюк [16] показал, что с помощью гель-фильтрации на сефадексе 0-50 удается гораздо легче отделить фермент от его кофакторов, чем с помощью диализа. Таким путем удается получить кофакторы в сравнительно небольшом объеме и изучить эффект их вторичного присоединения к ферменту. После гель-фильтрации был выделен совершенно неактивный белок, активность которого вновь восстанавливалась (до 86% исходной) после добавления низкомолекулярной фракции. При диализе активность фермента снижалась только до 38% [16]. Групповое разделение гель-фильтрацией оказалось чрезвычайно удобным методом отделения низкомолекулярных антигенов от антител. Диссоциацию комплекса антиген — антитело часто осуществляют, добавляя избыток гаптена, который затем можно легко отделить от белка гель-фильтрацией [17]. В бактериологии гель-фильтрация на сефадексе 0-75 или биогеле Р-100 может служить для удобного выделения экстрацеллюлярных токсинов. Перед засевом культуральную среду освобождают от высокомолекулярных примесей гель-фильтрацией. Затем на той же колонке после удаления бактерий можно вновь отделить высокомолекулярные токсины от культуральной среды [18]. [c.142]

Поскольку н Т-, н В-лимфоциты встречаются во всех периферических лимфоидных тканях, нужно было найти удобные методы, которые позволяли бы различать н разделять эти два типа клеток,-только после этого можно было изучать их индивидуальные свойства. К счастью, различительными маркерами могут служить многочисленные белки плазматической мембраны, характерные только для Т- нли только для В-клеток. Один нз наиболее часто используемых шркеров-гликопротеин Thy-], который у мышей имеется на Т-, но не на В-лимфоцитах поэтому антитела к Thy-1 можно использовать для удаления нли очистки Т-клеток из смешанной популящ1н лимфоцитов мыши. Использование антигенных маркеров клеточной поверхности для различения и разделения Т- и В-клеток революционизировало клеточную иммунологию и сыграло важную роль в быстром прогрессе этой области знания в последние годы. У экспериментальных животных и у человека находят все больше и больше новых маркеров, характерных для функционально различных субпопуляций Т- и В-лимфоцитов. [c.11]

Один из важных п чрезвычайно избирательных методов идентификации и разделения белков — иммунологический. Иммунологические реакции — специфические защитные реакции высших животных по отношению к попадающим в организм чужеродньш белкам (по последним данным, и к нуклеиновым кислотам). При повторном введении в кровяное русло животного чуж еродного белка в кровяной сыворотке появляются белки, относящиеся чаще всего к классу у-глобулинов (так называемые антитела), которые специфически реагируют с тем веществом (антигеном), к которому они выработались. Реакция антиген—антитело может быть изучена вне организма, как обычная химическая реакция, путем смешения раствора антигена с так называемой антисывороткой. Одна из типичных иммунологических реакций — прецп-питиповая — состоит в выпадении осадка при соединении антигенов с антителами. [c.135]

Применение иммунологических методов в препаративных целях осложняется прочностью и специфичностью комплекса антиген— антитело. Некоторые комплексы можно разложить только с одновременной деструкцией одного из компонентов, обычно антигена при этом освобождается антитело [371—373]. Антитела против полисахаридных (пневмококковых) антигенов можно отделить [374—376] в концентрированном растворе Na l (1,8 М), причем получаются растворы антител различной степени чистоты. Как показывают результаты измерения содержания азота в осажденных антителах, степень чистоты таких растворов нередко приближается к 100% . Успех применения этого метода, повидимому, частично зависит от эффективности антисыворотки, применявшейся для преципитации. Антитела белковых антигенов, например дифтерийный антитоксин, не могут быть выделены при помощи такого простого метода. Оказалось целесообразным гад-ролизовать белковый антиген пепсином или трипсином в определенных условиях при этом удается выделить только 30—60% указанного антитоксина [377]. Сырой дифтерийный антитоксин, полученный в результате обработки трипсином, не является, как показывает проба на постоянство растворимости, чистым, хотя токсином можно осадить 95% его. Этот препарат был разделен [c.79]

В методе иммуноэлектрофореза для определения положения индивидуальных белков на электрофореграмме применяют реакцию преципитации с антисывороткой, помещенной вдоль направления миграции. Более эффективного разделения компонентов можно добиться с помощью метода перекрестного-иммуноэлектрофореза, суть которого сводится к следующему. Узкую полоску геля с разделенными в одном направлении антигенами переносят на пластинку с гелем, содержащим антитела, и проводят дополнительный электрофорез в перпендикулярном направлении. Образующиеся при этом зоны преципитации имеют форму ракет, высоту которых можно использовать для оценки количества антигена (методы электроиммунотестирования и ракетного электрофореза). [c.29]

Носителями в данном случае чаще всего служат ацетат целлюлозы [26] и гели агарозы [4]. Разрешающая способность таких систем очень низка из-за чрезмерного диффузионного размывания зон. Применение в качестве носителя крахмального или полиакриламидного геля значительно повышает разрешающую способность прежде всего благодаря молекулярно-ситовому эффекту. Иммуноэлектрофорез [56] является одной из разновидностей зонного электрофореза при постоянном значении pH после разделения белки диффундируют навстречу специфическим антителам и их взаимодействие приводит к образованию дуг иммунопреципитации. Полуколичественную оценку каждого антигенного компонента можно выполнить методом электроиммунодиффузии [57]. После разделения методом зонного электрофореза антигенные белки электрофоретически мигрируют в направлении, перпендикулярном прежнему пути, в гель, содержащий равномерно распределенные антитела. Высота образующихся пиков преципитации является мерой относительной концентрации белков в смеси. [c.120]

Аффинная хроматография основана на использовании равновесного состояния высокоспецифического связывания, встречающегося в биологических системах. Этот метод позволяет осуществлять такое разделение веществ, которое невозможно достичь с помощью других способов [19, 20, 22]. Суть метода заключается просто в иммобилизации одного из компонентов обратимо связывающейся системы на твердом носителе и последующем его взаимодействии с другим компонентом (компонентами) этой равновесной системы, приводящем к отделению сопутствующих примесей. Таким образом, разделение основано на специфическом связывании компонентов данной системы, а не на различиях в их физических и химических свойствах. Методы аффинной хроматографии хорошо разработаны. Они используются для разделения и очистки компонентов таких высокоспецифически связывающихся комплексов, как антиген— антитело, гормон—связывающий белок, фермент— лиганд. Основными факторами, определяющими процесс разделения, являются природа и химическая струк- [c.216]

Одним из важных моментов в проведении иммуноферментного анализа является разделение свободных и связанных с антителами меченых компонентов. В настоящее время разработано несколько вариантов решения данной проблемы. Наиболее распространен метод, основанный на иммобилизации антител на твердой подложке (стеики полистирольных пробирок или шариков, целлюлозные диски, гранулы макропористых носителей для хроматографии). Особенно перспективными оказались полистироло-вые пробирки или планшеты, содержащие 96 лунок. Сущность методов разделения основана на том, что одни из компонентов, например антитела, могут быть сорбционно иммобилизованы на поверхности измерительной кюветы. После проведения инкубации с образцом антиген сорбируется на поверхности, а все остальные компоненты остаются в растворе и могут быть легко отделены, например, с помощью пористых частиц под действием магнитного поля. Основными проблемами, возникающими при реализации твердофазных методов разделения, являются стандартизация поверхности и уменьшение неспецифического связывания меченых компонентов с носителем. [c.114]