Фракционирование при очистке ферментов

Большинство ферментов являются лабильными белками. При переводе их в экстракт они лишаются своего естественного (в клетке) окружения и легко подвергаются денатурации и инактивации под влиянием различных факторов. В связи с этим при выделении и очистке ферментов необходимо соблюдать целый ряд предосторожностей. Как правило, все операции следует проводить при 2—4° С (лучше — в холодной комнате), а фракционирование органическими растворителями — при температуре ниже О С. [c.196]

При выделении фермента используют метод фракционирования белков путем изменения pH. Очистка фермента на этой стадии достигается за счет денатурации белков, которые отделяют центрифугированием. Изменение pH белкового раствора следует осуществлять осторожно, по возможности не использовать сильные кислоты и щелочи. Рекомендуется добавлять уксусную кислоту, трис-буфер, карбонат натрия и др. Добавление соответствующего буфера или кислоты проводят на холоде. Их вносят по каплям, по стенке сосуда, при постоянном перемешивании. После нейтрализации раствора проводят короткую инкубацию при 25—30° С, чтобы перед центрифугированием произошла полная агрегация денатурированных белков. [c.199]

Фракционирование сульфатом аммония. К прозрачному супернатанту медленно добавляют сульфат аммония (40 г на 100 мл). После добавления последней порции раствор перемешивают в течение часа и вновь центрифугируют (30 мин при 20 ООО ). Осадок отбрасывают, а к супернатанту снова добавляют сульфат аммония (11,6 г на 100 мл). Спустя час после добавления последней порции центрифугируют (30 мин при 20 ООО ). Полученный осадок используют для дальнейшей очистки фермента. [c.263]

Для очистки ферментов применяют осаждение их из водных растворов органическими растворителями такими, как метиловый, этиловый, изопропиловый спирты, ацетон высаливание сульфатами аммония, натрия, цинка, хлоридом натрия фракционирование. Высушивание предварительно очищенных и сконцентрированных препаратов осуществляют в распылительных сушилках или методом сублимации. [c.89]

Преимуществом колоночной хроматографии является возможность количественного фракционирования больших количеств веществ без превращения их в какие-либо производные. Однако хорошее разделение часто возможно лишь при малых скоростях элюирования, поэтому были разработаны новые виды колоночной хроматографии. Методы аффинной и адсорбционной хроматографии основаны на избирательной адсорбции молекул на нерастворимом адсорбенте, который содержит группы (молекулы), специфически взаимодействующие с молекулами подлежащих очистке соединений, например ингибиторы (для очистки ферментов) или антитела (для очистки антигенов) в настоящее время эти методы нашли широкое применение и для разделения углеводов. Невзаимодействующие с адсорбентом примеси удаляются, а связанный с адсорбентом сахар затем десорбируют способом, не приводящим к его разрушению. Десорбцию можно осуществить, изменяя pH, ионную силу среды или применяя соответствующий ингибитор взаимодействия, удерживающего вещество на адсорбенте. Для разделения ряда полисахаридов были использованы иммобилизованные формы (см. разд. 26.3.7.6) конканавалина А [40], являющегося фитогемагглютинином (лектином), который специфически взаимодействует с разветвленными полисахаридами определенного строения в настоящее время применяют и другие иммобилизованные фитогемагглютинины. Колоночная хроматография на носителях, покрытых полиароматическими соединениями [41], также находит применение для разделения полисахаридов. Благодаря достижениям в производстве носителей для жидкостной хроматографии под высоким давлением можно осуществить хроматографическое разделение быстро и избирательно описаны методы фракционирования небольших олигосахаридов, продолжающегося менее 1 ч [42]. [c.224]

Фракционирование и очистка ферментов с помощью органических растворителей — один из основных методов очистки белковых веществ. Чаще всего используются этанол, изопропанол, ацетон, метанол, диоксан и реже — эфир, диэтилкарбинол, коллидин, некоторые ароматические и гетероциклические амины. Большинство ферментов при комнатной температуре легко денатурируется органическими растворителями, в особенности в присутствии заметных количеств ионов солей. Поэтому на всех этапах работу следует проводить в условиях значительного охлаждения при температурах, близких к точкам замерзания обрабатываемых смесей. Прибавлять растворитель начинают при 0°С, а разделение (фракционирование) смеси ведут при —5°, —6°, до —10°С и даже до —20°С. Раствор не должен нагреваться от выделения тепла при смешивании растворителя с водой. Полученные фракции не должны нагреваться даже на несколько градусов, пока растворитель не будет удален, или пока его концентрация не станет безопасной при разбавлении. [c.145]

Адсорбционные методы фракционирования и очистки ферментов, несомненно, имеют наибольшее будущее области их применения стремительно расщиряются. В качестве адсорбентов чаще всего используются гидроокись алюминия, гель трифосфата кальция, каолин, целлюлоза, крахмал, гидроокиси цинка, меди, магния, реже — бензойная кислота, древесный уголь и бентонит, применяемые обычно для удаления нежелательных примесей. [c.149]

У авторов была счастливая возможность одновременно решать фундаментальные и прикладные проблемы при изучении систем, включающих синтетические полимеры (особенно полиэлектролиты) и органические физиологически активные вещества (особенно ионы), а также принимать участие в выполнении научных и прикладных исследований по выделению, очистке и фракционированию антибиотиков, ферментов, гормонов, аминокислот, нуклеотидов и многих других групп органических веществ. [c.3]

Методы получения и очистки ферментов. Ферменты получают обычно путем извлечения их из органов и тканей при помощи воды или глицерина. Если же они оказываются нерастворимыми, то материал тонко измельчают и сохраняют в виде сухого порошка. Следовательно, н вытяжки, и порошки содержат большое количество всевозможных примесей. Чтобы освободиться от низкомолекулярных веществ, например солей, аминокислот, сахаров, вытяжки подвергают диализу. Кроме того, в настоящее время используют фракционированное высаливание, адсорбцию с последующей элюцией, ультрацентрифугирование, электрофорез, а также хроматографическую абсорбцию. [c.339]

Электрофорез используется для выделения и разделения ферментов на конечных стадиях очистки, а также для препаративных и аналитических целей. Для препаративного выделения и очистки ферментов проводят зонный электрофорез па бумаге и в блоках или на колонках с различными наполнителями (целлюлозным порошком, крахмалом и другими), а также электрофорез в гелях — агар-агаровом, крахмальном, полиакриламидном. Электрофорез в гелях отличается от электрофореза на порошкообразных или пористых носителях. Здесь сочетаются два метода разделения ферментов — электрофоретический и метод, основанный на гель-фильтрации. Фракционирование ферментов на основе различной электрофоретической подвижности оказывается одним из самых эффективных методов. [c.201]

Теперь попытаемся ответить на вопрос, что же происходит с НАД-киназой после фракционирования на ионообменнике и очистки фермента до гомогенного состояния. [c.148]

В этой главе описаны основные приемы, используемые при очистке ферментов. В гл. 3, 4 и 5 подробно рассматриваются методы фракционирования, применяемые для выделения ферментов. Но прежде чем приступить к дальнейшей работе, необходимо приготовить экстракт исходного материала получение этого экстракта описывается в следующей главе. [c.33]

Всегда принималось как нечто само собой разумеющееся, что очистка ферментов должна выполняться на холоде из-за того, что ферменты весьма лабильны снижение температуры на 20 °С понижает скорость большинства процессов в 3—5 раз, и потому проведение операций с ферментами на холоде более целесообразно. Однако низкая температура замедляет также и процессы, связанные с разделением, например при ионообменной хроматографии следовательно, если при этом приходится увеличивать время разделения в той же самой степени, то никакого выигрыша е достигается. Это не относится к денатурации, так как она очень сильно зависит от температуры (см. разд. 3.5). Но большинство белков, особенно у теплокровных млекопитающих, проявляет незначительные признаки тепловой денатурации при температуре ниже 40°С, если значение pH близко к физиологической величине, они сохраняются в этих условиях в течение нескольких дней. Только у видов с постоянно холодными тканями, например у рыб, обитающих в холодной воде, тепловую денатурацию может вызвать и комнатная температура. Некоторые ферменты даже денатурируют (изменяют свои естественные свойства) под воздействием холода — явление, известное как холодовая денатурация, — в результате ослабления гидрофобных взаимодействий, стабилизирующих структуру молекулы. Поэтому, хотя обычно и рекомендуется держать растворы на льду в то время, когда они не подвергаются фракционированию, иногда при проведении фракционирования их лучше подогреть. Часто нет необходимости работать в холодной комнате всегда удобнее этого не делать. [c.252]

Многие из приведенных ниже замечаний касаются достижения намеченной цели более прямым или коротким путем, а также способов экономии времени или реактивов при точном соблюдении необходимых требований в процессе очистки ферментов. В большинстве случаев эти рекомендации не предназначены для пуристов, так как означают отход от идеальной схемы очистки. Быстрота проведения операций может иметь важное значение в свете решения проблем, обсуждавшихся в разд. 6.2. Поэтому, даже если процедура фракционирования выполняется не совсем идеально, но зато быстро, качество конечного продукта может оказаться выше. [c.262]

Пробные опыты выполняют обычно с небольшим количеством материала, с тем чтобы увеличить их масштабы, когда методика будет разработана. Исследователи, занимающиеся очисткой ферментов, часто испытывают чувство разочарования из-за того, что при увеличении масштабов работы что-то не ладится и результаты не получаются такими, как ожидалось. Это особенно досадно, когда на получение сырья затрачено много усилий, а в итоге приходится отказываться от всей методики фракционирования. Полезно обсудить, какие параметры могут изменяться при проведении очистки белков в больших масштабах и что следует делать в таких случаях по крайней мере теоретически, чтобы свести к минимуму эти изменения. [c.270]

Этот вводный параграф включен в данный раздел, чтобы показать, что очистку фермента можно проводить рутинным способом, совсем не измеряя содержание белка или измеряя его лишь в конечном препарате. Определение количества белка в ходе самого фракционирования нужно делать только в том случае, если знание концентрации белка имеет решающее значение для процесса очистки. Если же это не важно, то можно отобрать небольшие пробы и определить в них белок позже. [c.310]

Можно указать на некоторые другие применения ультрафильтрации в промышленности и фармакологии очистка антибиотиков, концентрирование и диафильтрация альбумина, процесс непрерывного сбора продуктов ферментации, очистка кристаллизационных растворов и кондиционирование поверхности кристаллов, очистка сывороток диафильтрацией при получении диагностических реактивов концентрирование и очистка ферментов, фракционирование макромолекул, концентрирование гормональных препаратов, стерилизация растворов для внутривенного введения, удаление пирогенных веш,еств, концентрирование вирусов, регенерация масляно-эмульсионных смесей, очистка стоков и регенерация растворов гальванических производств. [c.366]

Среди лабораторных методов очистки, фракционирования и анализа структуры белков, нуклеиновых кислот и их компонентов совокупность различных хроматографических методов занимает центральное место. Ни один другой метод не может сравниться с хроматографией по широте количественного диапазона. Начиная от препаративных колонок объемом в несколько литров, на которых можно вести фракционирование граммовых количеств препарата на первых этапах выделения фермента, через разделение близких по своей природе компонентов очищенной смеси веществ, количество которых измеряется миллиграммами или долями миллиграмма, этот диапазон простирается до микроанализа аминокислотного состава белка, когда на колонку вносят сотые доли микрограмма исходного гидролизата. Вне конкуренции остается и разнообразие физико-химических параметров, по которым может осуществляться хроматографическое фракционирование молекулярные размеры, вторичная или третичная структура биополимеров, растворимость, адсорбционные характеристики молекул, степень их гидрофоб-ности, электрический заряд и, наконец, биологическое сродство к другим молекулам. [c.3]

Чаще всего об этом приходится заботиться при очистке или фракционировании ферментов. Нередко их хроматографию приходится вести на холоду, хотя для целей самого хроматографического процесса это и невыгодно — увеличивается вязкость элюента, ухудшается разрешение пиков (низкомолекулярные вещества хроматографируют при комнатной, а иногда и при повышенной, до 50—60°, температуре в этом случае особое внимание должно быть уделено деаэрации обменника н элюента и опасности смены температур из-за возможности появления пузырей газа, как было подробно сказано в гл. 3). [c.292]

Для окончательного фракционирования белков используют также электрофорез, в основе которого лежит разделение кислых и основных молекул белков по их заряду в электрическом поле. Ферменты при достаточной степени очистки их раствора можно получить и в кристаллическом виде. Кристаллизацию ферментов проводят из растворов сульфата аммония, спирта или органических растворителей. К концентрированному раствору фермента осторожно по каплям добавляют насыщенный раствор сульфата аммония или спирт до появления едва заметной мути. Затем раствор на несколько дней оставляют на холоде. Выпавшие кристаллы отделяют и ведут перекристаллизацию до тех пор, пока продолжает увеличиваться активность фермента. [c.203]

Применяется для фракционирования и очистки белков, ферментов, вирусов, пептидов, нуклеиновых кислот, нуклеотидов и других веществ среднего и высокого молекулярного веса. Главная область применения — препаративная биохимия. [c.280]

Для иллюстрации изложенных в предыдущем разделе обш их соображений и возможностей использования различных аффинных сорбентов рассмотрим определенное число примеров, отобранных из периодической научной литературы последних трех лет. Большая их часть относится к очистке ферментов клеточного метаболизма (и отдельно — белков, регулирующ,их активность нуклеиновых кислот). Далее будут приведены примеры аффинного фракционирования и очистки самих нуклеиновых кислот, в том числе на иммуносорбентах. Основное внимание уделим более простому и универсальному методу — неспецифической элюции, однако био-снецифическая аффинная элюция белков тоже будет представлена несколькими типичными примерами. Рассмотрение начнем с использования сорбентов с индивидуальной специфичностью, ограничившись здесь тремя примерами, поскольку нет смысла пытаться сколько-нибудь полно иллюстрировать бесчисленное разнообразие возможных сорбентов этого типа. Аффинная хроматография белков клеточного метаболизма на сорбентах с групповой специфичностью будет иллюстрирована подробнее, а затем последуют два примера использования ковалентной хроматографии. [c.412]

Фракционирование сульфатом аммония. К полученному экстракту, (рН 7,0) добавляют при постоянном перемешивании небольшими порциями мелкоизмельченный сульфат аммония (50,5 г на 100 мл раствора). Доводят pH до 7,0—7,5 добавлением концентрированного аммиака. Через 30 мин выпавший осадок удаляют центрифугированием (60 мин при 30 ОООg). Доводят pH раствора до 7,8—8,0 и оставляют на ночь. Кристаллизация начинается сразу и продолжается в течение нескольких дней. Кристаллы отделяют центрифугированием (60 мин при 30 000g ) и суспендируют в растворе сульфата аммония насыщения 0,5, содержащем 5 мМ ЭДТА и 10 мМ дитиотреитол. Дальнейшая очистка фермента может проводиться следующими методами. [c.255]

После выделения и операций предварительной очистки ферменты фракционируют и получают высокоочищенные препараты. Наиболее распространенными способами более высокой очистки являются фракционирование действием органических растворителей, нейтральных солей, при помощи адсорбционных методов, ионообменной хромотографии, очистка ферметных белков кристаллизацией. Менее употребительны — фракционирование с помощью ионов тяжелых металлов, гельфильтрации, электрофореза, а также некоторые другие способы. [c.145]

Нужно отметить, что между этими двумя очень сходными реакциями нельзя провести резкой грани. В присутствии некоторых субстратов, папример спиртов, каталаза действует подобно пероксидазе [116]. Кристаллическая пероксидаза была выделена из хрена Теореллом [117]. Для очистки фермента им было использовано несколько методов адсорбция на алюминии, осаждение пикриновой кислотой, электрофорез и фракционированное осаждение сернокислым аммонием. Молекулярный вес полученной пероксидазы оказался равным 44 000 [пН Из молока была выделена другая пероксидаза с молекулярным весом 93 ООО, получившая название лактопероксидазы [118]. Молекула пероксидазы имеет резко выраженное асимметрическое строение (отношение осей 7 1) [117]. Простетическая группа может быть отщеплена от пероксидазы под действием ацетона и соляной кислоты при —15°. На основании данных, полученных при электрометрическом титровании и при изучении зависимости активности фермента от pH, было сделано заключение, что простетическая группа пероксидазы соединена с апоферментом не только посредством атомов железа, но также при помощи двух карбоксильных групп протогемина. Фермент-субстратные комплексы каталазы и пероксидазы были рассмотрены выше. [c.298]

Мураками и Эйлар [94] недавно описали очистку фермента, выделенного из придатка яичника овцы, который расщепляет 2-ацетамидо-1-(т.-р-аспарта-мидо)-1,2-дидезокси-р-в-глюкозу. Они использовали фракционирование сульфатом аммония и зонный электрофорез, в результате чего была достигнута 28-кратная очистка. Фермент был полностью отделен от N-aцeтил-P-D-глюкозаминидазы, которая встречается в той же ткани и от которой он отличается кривой зависимости активности от pH. Оптимум pH нового фермента 7,7. [c.297]

Рис. 4-50. Анализ образнов белка методом электрофореза в ДСП-полиакриламидном геле. Па фотографии показан гель, использованный для выявления белков, присутствующих на последующих стадиях очистки фермента. Самая левая дорожка (дорожка 1) содержит сложную смесь белков исходного клеточного экстракта, каждая из последующих дорожек содержит белки, полученные после хроматографического фракционирования белковых образцов, анализированных на предыдущей дорожке (см. рис. 4-47). В лунку каждой дорожки на гель наносили одинаковое количество белка (10 мкг). Отдельные белки в норме проявляются в виде узких окрашенных полос полосы расширяются, если в них присутствует слишком много белка. (С любезного разрешения Tim

Очистка фермента до гомогенного состояния сопровождается полным разрушением четвертичной структуры НАД-кииазы из сердца голубя.. Фермент из печени кролика после фракционирования на ионообменнике сохраняет четвертичную структуру, но получаемые при этом отдельные олигомеры утрачивают способность к взаимным переходам и представляют собой десенсибилизированные формы фермента. [c.159]

Эта книга —итог двадцатилетних исследований, связанных с очисткой ферментов. Они были начаты отчасти потому, что в то время, когда я работал над докторской диссертацией и мне понадобилась креатинкиназа для регенерации АТР, мы не могли позволить себе покупать препараты очищенных ферментов, да и вряд ли они были тогда в продаже. Я до сих пор испытываю удовольствие, если мне удается выделить достаточно чистый фермент из сложной смеси белков движимый лищь желанием испытать свои силы и из чисто академического интереса я и теперь провожу много времени за очисткой ферментов, даже если конечный продукт мне, по существу, и не нужен. В те дни все приходилось проверять опытным путем подбирали условия фракционирования белков сульфатом аммония и органическими растворителями, пробовали, адсорбируется ли фермент на кальций-фосфатном геле. Больще практически ничего и не было. В настоящее же время мы располагаем огромным разнообразием методов, материалов и подходов к проблеме очистки ферментов. Трудности сейчас заключаются не в том, чтобы умело манипулировать несколькими доступными приемами, а в том, чтобы суметь выбрать наиболее подходящий метод из огромного их множества. [c.6]

Снижение эффективной активности воды, как правило, бывает полезным для ферментов, если оно осуществляется способами, не оказывающими дестабилизирующего действия на белок. Высокие концентрации сернокислого аммония, при которых фермент осаждается, проявляют сильное стабилизирующее влияние, и фактически большинство ферментов, имеющихся в продаже, представляют собой суспензии в 2—3 М сернокислом аммонии. Кроме того, для сох ранеиия активности ферментов, а также для предотвращения бактериального загрязнения используется 50%-ный глицерин или лиофилизация. Во время очистки ферментов обычно необходимо оставлять фракции на ночь или даже на более длительное время, и в данном случае следует уделять особое внимание оптимизации условий хранения. При фракционировании сернокислым аммонием фермент нужно оставлять в системе, содержащей как можно более высокую концентрацию сернокислого аммония, например в виде осадка, а не раствора, полученного после его повторного растворения. Если нельзя избежать хранения ферментного раствора в отсутствие защитных агентов, то следует оценить относительные преимущества кратковременного замораживания этого раствора или хранения его при температуре около 0°С в присутствии протеолитических ингибитаров. Замораживание может инактивировать ферменты. Чувствительность различных ферментов к замораживанию очень сильно варьирует. Потери всегда будут меньше, если начальная концентрация белка высока. Не рекомендуется замораживать раствор с концентрацией белка ниже чем около 2 мг-мл . Следует помнить, что во время замораживания сначала заме рзает чистая вода, что сопровождается повышением концентрации белка и других растворимых веществ. Затем выпадают в осадок наименее растворимые ве- [c.259]

Сведения о возможном участии гидрофобных взаимодействий с углеродной частью w-аминопентилсефарозы в хроматографическом фракционировании рестриктаз, описанном в цитированных выше работах, отсутствуют. Таким образом, амино-пентилсефарозу можно рассматривать как второй (после ДЭАЭц) анионит, используемый для очистки ферментов рестрикции, что расширяет возможности варьирования процедур выделения целевых ферментов. [c.158]

По своему существу аффинная хроматография — это особый тип адсорбционной хроматографии. В отличие от того, что было описано в гл. 6, адсорбция здесь осуществляется за счет биоспецифп-ческого взаимодействия между молекулами, закрепленными на матрице, т. е. связанными в неподвижной фазе, и комплементарными к ним молекулами, подлежащими очистке или фракционированию, поступающими, а затем элюируемыми с подвижной фазой. Биоспеци-фическое взаимодействие отличается исключительной избирательностью, а зачастую и очень высокой степенью сродства между партнерами. Оно лежит в основе множества строго детерминированных процессов, протекающих в организме. В качестве примеров можно назвать взаимодействия между ферментами и их субстратами, кофакторами или ингибиторами, между гормонами и их рецепторами, между антигенами и специфическими для них антителами, между нуклеиновыми кислотами и специфическими белками, связывающимися с ними в процессе осуществления своих функций (полимераза.мп, нуклеазами, гистонами, регуляторными белками), а также между самими нуклеиновыми кислотами-матрицами и продуктами их транскрипции. Наконец, многие малые молекулы (витамины, жирные кнслоты и др.) специфически связываются со специальными транспортными белками. [c.339]

Перед использованием колонки с аффинным сорбентом ее имеет смысл промыть раствором бычьего сывороточного альбумина (2 мг/мл). Было замечено, что в результате этого улучшается качество очистки и фракционирования методом конкурентной элюции целого ряда ферментов. По-видимому, БСА блокирует на сорбенте места неспецифической сорбции ферментов [Ramadoss et al., 19831. [c.368]

Клеточный экстракт наряду с интересующим ферментом содержит п другие вещества белковой и небелковой природы. От них избавляются с помощью различных методов фракционирования. Последовательность их применения может быть различной, но целесообразно, в частности, учитывать специфику фермента. Например, если фермент термостабилен, следует, очевидно, начать с термической обработки, что даст возможность сразу же избавиться от большинства термолабиль-пых белков. Обычно белки неустойчивы в кислых растворах, поэтому если фермент выдерживает подкисление, его очистку следует начинать именно с этой стадии и т. д. [c.199]

Сукцинат убихинон-редуктаза (СУР) катализирует окисление сукцината убихиноном. По данным электрофореза, в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия фермент состоит из 3 —4 полипептидов. Субъединицы с молекулярными массами 70 000 и 28 000 Да представляют собой собственно сукцинатдегидрогеназу, в субстратсвязывающем центре которой происходит дегидрирование сукцината низкомолекулярные компоненты комплекса И (м. м. ок. 15 000 Да) придают сукцинатдегидрогеназе реактивность по отношению к убихинону, чувствительность к специфическим ингибиторам и, по-видимому, принимают участие в связывании фермента с мембраной. Выделение препарата СУР основано на экстракции фермента из мембраны с помощью неионного детергента тритона Х-100 и концентрировании препарата охлажденным ацетоном. Дальнейшее фракционирование сульфатом аммония и очистка на кальдий-фосфатном геле позволяют получить фермент в высокоочищенном состоянии с каталитической активностью около 25 мкмоль окисленного сукцината в 1 мин на [c.423]

Для фракционной очистки с применением органических растворителей используют спирты (этанол, метанол, изопропанол, ацетон,реже—диоксан, диэтилкарбинол, ароматические и гетероциклические амины. Для уменьшения денатурирующего воздействия осаждение ведут при пониженных температурах [4, 6, 49]. При фракционировании ферментов под действием солей часто используют сульфат аммония, реже применяют сульфаты и ацетатьт натрия и магния. В отличие от органических растворителей, которые сравнительно легко удаляются цен-Т15ифугированием, солевые осадители из полу генного препарата можно удалить диализом, занимающим продолжительное время. [c.169]

Гель-фильтрация является наиболее мягким способом фракционирования целлюлаз. Метод наиболее эффективен для отделения целлобиаз, имеющих значительно более высокую молекулярную массу, чем эндоглюканазы и целлобиогидролазы, или низкомолекулярных эндоглюканаз с молекулярной массой менее 20000 Ла. Среди носителей наиболее эффективны сефакрил S-200, ультрагели (Pharma ia), биогели (Bio-Rad). Применение гель-фильтрации эффективно и для групповой очистки эндоглюканаз и целлобиогидролаз, однако низкая разрешающая способность полидисперсных носителей, как правило,не позволяет разделить множественные формы этих ферментов с близкими Mr (см. табл. 5.1). Недостатком метода является многократное увеличение объема наносимых образцов в ходе элюции, что требует последующего концентрирования, длительность процесса. [c.126]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология