Специальные методы определения а-аминокислот

Точность определения сильно зависит от природы анализируемого соединения и особенностей применяемого метода. Это можно показать на примере обычных аминокислот из белкового гидролизата методами одномерной хроматографии на бумаге эти соединения можно определить с точностью до 1—2%, но при использовании специальных методов, как утверждают некоторые исследователи, точность можно повысить до 0,27о- Сахара на хроматограмме можно легко и быстро определить с точностью до 3%. [c.34]

Для анализа редких аминокислот из некоторых источников разработаны специальные условия элюирования. Системы, предназначенные для анализа аминокислот из животных тканей, приходится модифицировать при анализе аминокислот растительного происхождения, что связано с разным количественным и качественным составом экстрактов [44—46]. Разработаны также таблицы для идентификации компонентов, содержащихся в экстрактах из насекомых [47]. Для контрольных анализов изделий пищевой промышленности разработан специальный метод аминокислотного анализа гидролизатов пищевых продуктов и муки [48, 49], пива и солода [50]. Метод определения аминокислотного состава травы и силоса разработан с целью определения их кормовой ценности [51]. Для промышленных целей раз- [c.348]

Примечание. В связи с возможными потерями аминокислот при гидролизе и других химических операциях становится понятным стремление исследователей к разработке методов определения аминокислот в нативной или только слегка измененной белковой молекуле. Однако, несмотря на большие перспективы, спектрофотометрические методы, требующие очень специального оборудования, не дают в настоящее время более точных результатов, чем химические методы [c.130]

Хроматография — метод разделения и анализа смеси веществ, основанный на различной сорбции компонентов анализируемой смеси определенным сорбентом. Впервые X. предложена в 1903 г. русским ученым М. Цветом. Разделение ведут в колонках, наполненных силикагелем, оксидом алюминия, ионообменными смолами (ионитами) и др., или же на специальной бумаге. Вследствие различной сорби-руемости компонентов смеси (подвижная фаза) происходит их зональное распределение по слою сорбента (неподвижная фаза) — возникает хроматограмма, позволяющая выделить и проанализировать отдельные вещества (процесс подобен многоступенчатой ректификации). В зависимости от агрегатного состояния подвижной фазы различают газовую и жидкостную X. по механизмам разделения — ионообменную, осадочную, распределительную и молекулярную (адсорбционную) X. в зависимости от техники проведения разделения в X. различают колоночную (колонки сорбентов), бумажную (специальная фильтровальная бумага), капиллярную (используют узкие капилляры), тонкослойную X. (применяют тонкие слои сорбентов). Методами X. анализируют смеси неорганических и органических соединений, концентрируют следы элементов. В химической технологии X. применяют для очистки, разделения веществ. X. позволяет разделять и анализировать смеси веществ, очень близких по свойствам (напр,, лантаноиды, актиноиды, изотопы, аминокислоты, углеводороды и др.). [c.151]

Специальные методы определения а-аминокислот. Некоторые а-аминокислоты количественно превращаются в альдегиды под действием нингидрина. Эта реакция была использована для газохроматографического определения нелетучих аминокислот Ч Другой возможностью для разработки метода определения могло бы быть разложение аминокислот в соответствующие амины, но эта реакция не количественна. [c.161]

Ж. Специальные методы определения а-аминокислот [c.224]

В то же время наличие в молекулах аминокислот и пептидов таких различных функциональных групп, как карбоксильная, сульфгидрильная, имидазольная, гуанидиновая, индольная, амино-, имино- и оксигруппа, весьма затрудняет разработку единой универсальной методики, обеспечивающей воспроизводимое, количественное и одновременное превращение всех аминокислот в летучие и стабильные производные, пригодные для разделения методом газовой хроматографии. Перечисленным требованиям не удовлетворяет ни одна из разработанных к настоящему времени методик. Таким образом, газовая хроматография не является рутинным методом определения аминокислот и пептидов, хотя она представляет собой чрезвычайно полезный и чувствительный метод специального анализа. С помощью этого метода — особенно в сочетании с масс-спектрометрией и методами, основанными на использовании стабильных изотопов, — можно, например, следить за превращениями определенного числа аминокислот, изучать пути их метаболизма, разделять оптические изомеры. Эти области применения газовой хроматографии рассмотрены в обзорах [179—181] и [2, 182]. [c.68]

Для иллюстрации преимуществ применения кислых растворителей рассмотрим возможности определения аминогруппы в аминокислоте, настолько слабо проявляющей основные свойства, что титрование в водной среде осуществимо только при использовании специальных методов обнаружения конечной точки (например, кондуктометрического метода). Карбоксильная группа [c.121]

Если вещества бесцветны, они могут быть обнаружены на фильтровальной бумаге только при помощи специальных физических или химических методов. Все аминокислоты дают, например, окраску с нингидрином. Поэтому при определении аминокислот их проявляют , смачивая раствором нингидрина фильтровальную бумагу. На бумаге появляются окрашенные пятна, расположенные на разной высоте, в соответствии с тем, как распределились аминокислоты в токе жидкости. По месту положения пятна и интенсивности его окраски можно определить наличие той или иной аминокислоты и ее концентрацию в исследуемой смеси аминокислот (рис. 7). [c.35]

Одно из специальных приложений метода газо-жидкостной хроматографии в химии аминокислот и пептидов связано с разделением и аналитическим определением диастереомеров. [c.269]

Начальный этап в изучении первичной структуры пептида или белка состоит в определении N-концевой аминокислоты, т. е. той, которая находится на конце цепи и имеет свободную а-аминную группу. Ее можно при помощи специальных методов отщепить и точно идентифицировать. Затем то же самое можно повторить с концевой группой, оставшейся на конце цепи после отщепления первой. Повторяя операции несколько раз и осуществляя ступенчатый гидролиз цепи, возможно определить в нем аминокислотную последовательность с N-конца. Возможно подобное определение и аминокислоты со свободной а-СООН-группой (С-конце-вой), но при помощи иных методов. Этим способом можно определить лишь по несколько звеньев с обоих концов, так как повторные операции удается повторять не более чем 5— 12 раз. Однако таким путем не трудно расшифровывать строение пептидов — продуктов гидролиза белка. [c.24]

Последовательность нуклеотидов и генетический код. Методы определения последовательности аминокислот в полипептидной цепи были известны еще в 50-х гг. Теоретически это относительно легкая проблема, поскольку все 20 аминокислот, встречающиеся в природных белках, имеют разные свойства. С другой стороны, нуклеотидная последовательность ДНК относительно однородна по составу элементарных звеньев, так как содержит только четыре типа азотистых оснований-гуанин, цитозин, аденин и тимин. Когда еще в 60-х г. был расшифрован генетический код, появилась возможность восстанавливать (дедуцировать) нуклеотидную последовательность транскрибируемой ДНК по аминокислотной последовательности соответствующего белка. Однако генетический код является вырожденным, то есть одной и той же аминокислоте соответствуют несколько разных нуклеотидных триплетов. Следовательно, суждения о нуклеотидной последовательности, основанные на последовательности аминокислот в белке, не однозначны. Кроме того, последовательности аминокислот не содержат никакой информации о последовательности некодирующих участков ДНК. В настоящее время разработаны методы непосредственного секвенирования ДНК [117]. Принцип состоит в следующем длинную молекулу ДНК фрагментируют при помощи агентов, расщепляющих ее в специфических сайтах. Затем определяют последовательность нуклеотидов в каждом из этих фрагментов. Очередность фрагментов в целой молекуле восстанавливают, используя перекрывающиеся концы идентичные цепи разрезают повторно другой рестриктазой, а затем последовательности перекрывающихся фрагментов, образующихся при обработке двумя рестриктазами разной специфичности, сравнивают. Так может быть реконструирована полная последовательность. В пределах отдельных фрагментов порядок нуклеотидов определяют с помощью специальных методов. Раньше секвенирование ДНК было весьма трудным делом, теперь же оно [c.131]

На основе нингидриновой реакции были разработаны методы количественного определения аминокислот, в частности метод распределительной хроматографии на бумаге, впервые внедренный в 1944 г. (А. Мартин и Р. Синдж). Эта же реакция используется благодаря своей высокой чувствительности в автоматическом анализаторе аминокислот. Впервые такой прибор сконструировали Д. Шпакман, С. Мур и У. Стейн (рис. 1.7). После разделения смеси аминокислот в колонках, заполненных специальными ионообменными смолами (сульфополистирольный катионит), ток элюента из колонки поступает в смеситель, туда же поступает раствор нингидрина интенсивность образующейся окраски автоматически измеряется на фотоэлектроколориметре и регистрируется самописцем. Этот метод нашел широкое применение в клинической практике при исследовании крови, мочи, спинномозговой жидкости. С его помощью за 2—3 ч можно получить полную картину качественного состава аминокислот в биологи- [c.42]

Экспериментально метод исследовался на ДНФ-производных аминокислот. Процесс получения пятен с четкими границами представлял двойную последовательную контактную печать в проходящем ультрафиолетовом свете (> тах = 365 нм) на специальной рефлексной фотобумаге, имеющей сверхконтрастную характеристическую кривую. Ошибка определения абсолютного количества вещества для ДНФ-асп ДНФ-тре ДНФ-гли ДНФ-ала ДНФ-фал ДНФ-илей составляет 6—8%. В случае измерения отношения количеств этих веществ ошибка бы равнялась 4—5%. [c.90]

Для определения размеров полипептидных цепей белковой молекулы разработаны специальные химические методы. Эти методы основаны на использовании особого реагента (динитрофторбензола), который соединяется со свободной аминогруппой аминокислотного остатка на конце полипептидной цепи с образованием окрашенного комплекса этот комплекс можно выделить и идентифицировать после того, как белок подвергнется гидролизу и распадется на составляющие его аминокислоты (в том числе и на концевую аминокислоту с присоединенной к ней окрашенной группой). Так, было показано, что один из типов молекул гемоглобина, обнаруженный в красных кровяных тельцах большинства взрослых людей (называемый гемоглобином А), содержит четыре полипептидные [c.680]

На практике применяют различные виды элюирования восходящее, нисходящее, горизонтальное, круговое (центрифужное). При нисходящем хроматографировании следует тщательно уложить край бумаги в лоток и прижать ее тяжелой стеклянной палочкой или узкой пластинкой, чтобы бумага не могла соскользнуть в процессе элюирования. Во время работы не следует касаться бумаги пальцами, особенно если хроматографируются аминокислоты. Закрепленную в лотке полоску или лист бумаги помещают на подставку внутри камеры, закрывают камеру крышкой и выдерживают в атмосфере паров неподвижной фазы в течение определенного времени — от 5 мин до 16 ч, т. е. до следующего дня. При работе с сильно летучими растворителями типа растворителей Буша (см. разд. 3.5.6 Стероиды и терпеноиды ) бумагу следует выдерживать над неподвижной фазой не менее 3 ч, а лучше до следующего дня, если неподвижная фаза не наносилась на бумагу посредством одного из указанных выше методов. По окончании выдержки наливают в лоток подвижную фазу и дают ей передвигаться в бумаге под действием капиллярных сил почти до самого края. После этого осторожно вынимают хроматограмму из камеры, сразу же отмечают положение фронта растворителя и дают листку высохнуть. При работе с большими листами удобно пользоваться специальными широкими щипцами. [c.92]

Как известно, первым листовым вариантом хроматографии явилась распределительная хроматография на бумаге, предложенная в 40-х годах для разделения смесей аминокислот [19]. В этом варианте, в котором, как и обычно, разделение является результатом различий в скоростях перемещения компонентов по сорбенту, разделяемые компоненты четко локализуются на хроматограмме после проявления ее специально подобранными реагентами. Природа компонента характеризуется при этом расположением зоны (часто уточняемым по положению зоны стандарта), а количество — размером пятна. Количество устанавливают более точно обычными химическими методами после десорбции компонентов с хроматограмм. В неорганическом анализе хроматография на бумаге оказалась полезной для определения состава смесей предельно близких по свойствам редкоземельных элементов, актинидов и металлов платиновой группы. Во всех этих системах эффективное хроматографическое разделение, как было показано, обусловлено процессом комплексообразования. [c.233]

По разделению и определению производных аминокислот методом ГЖХ проведено сравнительно мало работ, несмотря на очевидные преимущества этого метода. В настоящее время широко применяют методы хроматографии на бумаге и ионного обмена, но они не имеют достоинств, присущих методу ГЖХ, таких, как быстрота, доступность автоматизации процесса или возможность разделения близких по свойствам компонентов. Так, для разделения лейцинов методом хроматографии на бумаге необходимы специальные растворители, а полный анализ гидролизата белка. методом ионного обмена, по Муру и Штейну, занимает 22 час и требует специального оборудования, применяемого в основном только для данного метода. Тех же результатов [c.528]

Работая над настоящей книгой, автор стремился при изложении в ней новых методов по возможности не увеличивать объем книги. Во избежание увеличения объема книги были опущены такие широко известные и редко используемые специальные методы как определение азота аминокислот по Ван-Слайку, исследование дыхания манометрическим способом (по Баркрофту и Варбургу), а также некоторые другие методы, описанные в первом издании (см. Петров К- П. Практикум по биохимии пищевого растительного сырья. М., Пищевая промышленность , 1965). [c.3]

При работе с микроколичествами надо точно соблюдать все специфические для микроопределений условия. В противоположность макроопределению в данном случае конечную точку титрования (появление светло-синей окраски) определяют сравнением с окрашенным стандартным раствором — 0,0025 н. раствором хлорида меди. (И) в избытке аммиака. Титрование методом сравнения необходимо потому, что изменение окраски в спиртовом растворе происходит не так резко, как при титровании водным раствором щелочи. Хорошие результаты получаются при проведении титрования в специальной камере, освещенной лампой дневного света мощностью в 200 свечей, защищенной от других источников света и окрашенной внутри в белый цвет. Для появления нужной окраски расходуется больше щелочи, чем ее требуется по расчету. Кроме того, окраска зависит также от количества присутствующего спирта. Так как при данном определенном объеме спирта безразлично, титруется ли аминокислота или минеральная кислота, то для завершения анализа надо провести контрольный опыт с таким же количеством спирта и из количества щелочи, израсходованного для титрования исследуемого вещества, вычесть ее количество, израсходованное на титрование контрольного опыта. [c.714]

Теоретически можно оценить точность каждого метода однако маловероятно, чтобы на практике когда-нибудь реализовались идеальные условия. В связи с этим каждый метод необходимо проверить и установить определяемые процентные количества аминокислот в смесях, аналогичных гидролизатам анализируемого белка. Оценка специфичности и точности может быль произведена при помощи анализа специально составленных аминокислотных смесей и сравнения одного метода с другим [38]. Если сравниваются два или большее число методов, основанных на использовании различных свойств или функций аминокислот (например, методы выращивания бактерий, определения коэффициента распределения и содержания изотопов), то предполагается, что свойственные этим методам ошибки неодинаковы. [c.227]

Нужно помнить, что методы определения аминокислот в белковых гидролизатах далеко не идеальны. Во время самого гидролиза при освобождении аминокислот происходят изменения разной глубины. Кроме того, в случае важных для питания белков, особенно растительного происхождения, следует помнить, что мог т иметь место большие колебания в составе в зависимости от вида растения или животного. Подобно тому как при псшощи отбора и культивирования можно изменить содержание витаминов и минеральных составных частей растения, так же можно, вероятно, изменять и аминокислотный состав белк( в в нем. Придет время, когда будут специально выращивать определенные растения из-за содержащихся в них незаменимых аминокислот, точно так же как сейчас их выводят из-за содержащихся в них витаминов. [c.366]

Указанные ограничения фишеровской системы, а также тот факт, что в 1951 г. появился рентгеноструктурный метод определения истинного расположения групп вокруг хирального центра, привели к созданию в 1966 г. новой, более строгой и непротиворечивой системы описания стереоизомеров, известной под названием R,. У-номенклатуры Кана-Ингольда-Прелога (КИП), или правил последовательного старшинства. Эта система в насто-яшее время практически вытеснила D, -систему Фишера (последняя, однако, все еше употребляется для углеводов и аминокислот). В системе КИП к обычному химическому названию прибавляются специальные дескрипторы R или S, строго и однозначно определяюшие абсолютную конфигурацию. [c.38]

С введением газожидкостной хроматографии (ГЖХ) в качестве метода анализа аминокислот, пептидов и родственных соединений значительно возросли возможности новых достижений в области пептидной химии. Значительные усилия были направлены на развитие аминокислотного анализа методом ГЖХ, для чего исследовались различные типы производных. Однако в количественном анализе всем ГЖХ методам приходилось конкурировать с хорошо разработанными методами ионнообменной хроматографии, отличающимися высокой степенью автоматизации, точности и даже скорости анализа (например, метод ли-гандного анализа). По этой причине ГЖХ аминокислот в последние годы нашла практическое применение в большей мере для некоторых специальных задач, где она могла даже превосходить другие хроматографические методы, а не для количественного определения аминокислот в сложных смесях. Однако теперь ГЖХ можно использовать в качестве дополнительного метода и для этой цели благодаря аналитическому подходу, разработанному главным образом Герке и сотр. [1]. [c.142]

Данные по аминокислотному составу, включенные в настоящие таблицы, получены в основном с помощью ионообменной хроматографии на колонках (ИОХ) [1, 9, 54, 55] и микробиологического метода [11, 25, 30, 70], основанного на ограничении роста специально подобранных микроорганизмов на питательной среде, не содержащей той или иной аминокислоты, которая в этом случае становится лимитирующим фактором [И, 25. 30]. При определении какой-либо аминокислоты к питательной среде, не содержащей ее, добавляют исследуемый гидролизат. Об интенсивности роста микроорганизма судят по нарастанию кислотности среды (или по степени помутнения последней), которое измеряют соответствующим способом (титрование, нефелометрия). Основываясь на зависимости ростопой реакции от содержания в среде лимитирующей аминокислоты, строят графики для количественного определения аминокислот. [c.188]

Эту процедуру ступенчатого расщепления пептида с N-конца можно повторять многократно, идентифицируя последовательно одну аминокислоту за другой. Метод Эдмана используется в качестве химической основы для определения первичной структуры белков и пептидов. Он реализован в специальном приборе-секвенаторе (от англ. sequen e - последовательность), работающем в автоматическом режиме и позволяющем определить последовательность аминокислот с N-конца пептида до 50-60 аминокислотных остатков. [c.54]

Поглощение ультрафиолетового излучения. Большинство белков поглощает ультрафиолетовое излучение с длиной волны около 280 тр. Было показано1 [91—94], что это поглощение обусловлено тирозином, триптофаном и (в меньшей степени) фенилаланином. Таким образом, величина поглощения зависит от содержания этих аминокислот в белке. Измерение оптической плотности белкового раствора при 280 пу служит удобным и точным методом определения концентрации белка [95], если известен коэффициент экстинкции и в растворе нет других веществ, поглощающих свет с этой длиной волны. Рассматриваемый метод можно также применять для приближенного измерения общего содержания белков в смеси в тех случаях, когда допустимо использование среднего коэффициента экстинкции. Метод имеет то преимущество, что на поглощение света не влияют растворенные соли и многие другие вещества и что, следовательно, определение можно производить на образцах белковых фракций без всякой специальной их подготовки, Анализ производится быстро, причем требуются всего лишь доли миллиграмма белка. [c.20]

Работы ло качественному и количественному определению аминокислот, входящих в состав белка, проводились в течение многих лет. Большинство классических методов, основанных на оригинальных исследованиях Косселя, Фишера, Осборна, Форе-мана и других, были правиметрическими и требовали выделения аминокислоты ли одного ив ее производных. Обширная литература по этому вопросу свидетельствует о громадных трудностях, сопутствующих таким исследованиям. Применение классических методов ограничивалось в значительной степени тем, что для исследований требовались большие количества белка (100 г или более). Существовавшие в то время колориметрические методы нельзя было проверить путем анализа аминокислотных смесей, составленных специально для данной цели ввиду отсутствия чистых аминокислот (не было методов для надежной оценки их чистоты). [c.209]

В статьях настоящего сборника представлены основные современные методы анализа белков и аминокислот. Сводные обзоры этих методов даны в статьях П. Кирка Химическое определение белков и особенно А. Мартина и Р. Синджа Аналитическая химия белков . Последующие три статьи Э. Снелла Микробиологические методы анализа аминокислот , А. Тизелиуса Адсорбционный анализ смесей аминокислот и Г. Свенссона Препаративньи электрофорез и ионофорез , специально посвящены трем группам методов, получившим за последние годы особенно большое значение. Необходимо, однако, отметить, что теория хроматографических и электрофоретических методов анализа разобрана в этих статьях недостаточно. Кроме того, в статьях сборника неполно представлены изотопный и спектрофотометрические методы анализа. В статье С. Фокса Конечные аминокислоты в пептидах и белках рассматривается весьма важный для изучения структуры белков, но, как видно из материала статьи, еще очень слабо изученный вопрос о конечных группировках полипептидных цепей. Две заключительные статьи сбор- [c.10]

Методы, основанные на анализе составных частей молекул белка, включают определение элементов азота и углерода, некоторых аминокислот, например тирозина, биуретовой и фор1-мольной группировок. Отдельные белки могут быть иногда определены по специальным группам, например по железу в гемоглобине [2, 3] или иоду в тиро-глобулине. Все эти методы требуют, чтобы определяемая составная часть находилась в испытуемом образце исключительно в белковой части. Поэтому белок должен быть отделен от всех других органических веществ и карбонатов, если он определяется по углеродному составу, и от всех других азотсодержащих составных частей, если основой анализа является метод Кьельдаля. Обычная практика анализа кормов и овощей на белки на основании определения общего азота в этом отношении всегда внушает сомнения. Наличие алкалоидов, аминокислот или других азотсодержащих веществ в таких веществах достаточно вероятно, хотя, как правило, их количества малы по сравнению с содержанием белка. Вследствие изменчивости свойств различных белков нет общих методов их выделения из сложных смесей. В хорошо изученных системах могут применяться специальные методы выделения. [c.15]

Существуют два принципиально различных подхода, позволяющих провести расшифровку спектров. Сюда следует отнести возможность использования всей имеющейся информации для расщифровки экспериментальных спектров. Если известны физические взаимодействия, то существует возможность проведения моделирования любого двумерного эксперимента в случае, если достаточно хорошо проведено отнесение спиновой системы к определенному типу, гравда, при этом релаксационные процессы описываются лишь весьма приближенно. Спиновая система определяется исходя из принципиальной структуры аминокислот. Соответствующие константы спин-спинового взаимодействия и химические сдвиги являются при это свободно варьируемыми параметрами, которые согласовываются со значениями, определяемыми экспериментально, и затем могут быть использованы для полного описания спектров. Однако на практике этот метод требует слишком много времени. Можно несколько улучшить этот подход, если провести серию специальных дополнительных экспериментов. На рис. 3.28 показано, что таким методом, по крайней мере для небольших молекул, а о [c.136]

Для быстрых предварительных и сравнительных оценок может быть полезным определение белка по поглощению ультрафиолетового света при Я = 280 ммк, обусловленному входящими в его состав ароматическими аминокислотами. Чувствительность его довольно велика — около 0,2 мг/мл. Однако в присутствии нуклеиновых кислот результаты существенно искажаются. Частично С1 орректировать эти искажения можно, определяя поглощение не только при 280 но и при 260 ммк — в области максимального поглощения света нуклеиновыми кислотами. Существуют специальные таблицы и формулы, позволяющие по этим данным оценить соотношения содержания белка и нуклеиновых кислот. Однако для точных количественных определений малоизученных белков этот метод не может быть рекомендован. [c.34]

Использование иммерсионного метода и элементарных кристаллооптических определений повышает надежность и в ряде случаев упрощает методику качественного микрохимического анализа. Внешний облик кристаллов часто меняется в зависимости от примесей, условий кристаллизации и т. п. Проверка показателей преломления и других кристаллооптических свойств продуктов микрохимических реакций дает возможность их идентификации независимо от формы кристаллов и в ряде случаев позволяет обойтись без разделения элементов на аналитические группы. Опыт применения иммерсионного метода к микрохимическому анализу излагается в работах Аншелеса и Бураковой [47, 48, 49], к открытию и определению алкалоидов — в книге Поздняковой [50], к идентификации аминокислот — в статье [51]. Статьи [52—55] дают примеры использования иммерсионного метода в некоторых специальных исследованиях. [c.282]

Ионообменная хроматография — развитие того простого метода ионного обмена, о котором говорилось выше как о методе отделения ионогенных веществ от нейтральных. Ионообменная хроматография проводится на тз[ких же полимерных ионообменных смолах, но более тщательно подготовленных (полученных по строго определенной методике из очень чистого сырья, с одинаков й величиной зернения и т. д.). В таких условиях можно проводить разделение близких веществ, используя сравнительно небольшие различия в свойствах разделяемых соединений. Одно из очень важных для биоорганической химии приложений ионообменной хроматографии — ко-яичественный аминокислотный анализ, производимый иа специальных автоматических анализаторах. При этом благодаря строгой стандарт-ности всех операций каждая. 22 аминокислота всегда элюи- руется в определенный мо- мент (см. рис. 4, где в каче-стве примера указано разделение основных аминокислот и аммиака). Измеряя объем пика каждой аминокислоты, можно количественно определить соотношение различных аминокислот в данном образце (т. е. провести аминокислотный анализ). [c.25]

Энзиматические методы. Так как многие а-аминокислоты биологически активны, существуют различные биологические методы анализа, однако большую часть из них можно использовать для определения только некоторых специфических соединений, но не для анализа какой-либо определенной органической функции . Кроме того, для биоаналитических методов необходимы специальное оборудование и особая техника работы. [c.225]

Азотистые соединения включают амиды, анилиды, амины, алкалоиды, протеины, аминокислоты (рассмютрены вместе с кислотами), карбаматы или уретаны (рассмотрены со сложными эфирами), лактамы, циангидрины, нитрилы, нитро-, нитрозо- и азосоединения, азолы, оксимы, гидразины, гидроксамовые кислоты, аминоспирты, изоцианаты, пурины или диуреиды, амидины и производные циановой кислоты. Число методов, применимых для определения воды в органических азотистых соединениях, весьма ограниченно. Иногда применимы химические методы, основанные на гидролизе хлорангидридов или ангидридов кислот. Однако они непригодны для перечисленных веществ (особенно для аминов и амидов), которые вступают в реакцию аци-лирования или в присутствии которых ацидиметрическое определение конечной точки затруднено. (Для всех аминов, за исключением низших, может быть применен метод Смита и Брайанта [26] с хлористым ацетилом, характеризующийся сравнительно мягкими условиями.) Для специального случая с анилином описаны методы, основанные на появлении точки помутнения [45-47]. [c.127]

Как видно из приведенной выше формулы, открытые пептиды и аминокислоты должны иметь ряд общих свойств. Во-первых, поведение концевых NH2- и СООН-групп открытых пептидов должно быть подобно в химическом отношении поведению соответствующих групп в аминокислотах. И только те свойства, которые обусловлены сосуществованием обеих этих групп в а-тюложении, в пептидах не повторяются или, по крайней мере, ослабевают по мере возрастания расстояния между группами. Во-вторых, функциональные группы в боковых цепях Ri, R2.. . сообщают пептидам свои индивидуальные свойства, которые выше уже обсуждались. Таким образом, нет необходимости посвящать специальный раздел химическим свойствам пептидов , и в следующих разделах будут рассмотрены только методы систематического их разделения и определения их структуры. [c.147]

Успешное применение любой из описанных многочисленных модификаций (см. стр. 136) метода анализа смесей аминокислот ионообменной хроматографией зависит главным образом от тщательного выполпепия экспериментальной процедуры. Подробности эксперимента описаны в оригинальных работах, и целесообразно посвятить определенное время отработке выбранного метода, прежде чем переходить к модификациям. Описание деталей выполнения анализа выходит за рамки этой главы, целью которой является обсуждение специальных проблем, возникающих ири аминокислотном анализе гликонротеинов, и связанных с ним структурных соображений. Многие из этих трудностей возникают не нри самом анализе, а в процессе первоначальной обработки гликопротеина, особенно при гидролизе. При расщеплении иолипептидпых цепей белка на аминокислоты появляется возможность для многих побочных реакций, включающих разложение аминокислот. [c.121]