Элюирование скорость

На эффективность разделения компонентов в хроматографическом процессе влияет очень много факторов. Сорбент (твердый или жидкий) должен обладать определенной селективностью. Элюент должен быть инертным по отношению к компонентам и сорбенту, обладать малой вязкостью, обеспечивать высокую чувствительность детектора. При хроматографировании растворов часто применяют комплексообразующие вещества, которые способствуют разделению компонентов (разное вымывание компонентов с сорбента — изменяются константы Генри). Уменьшение скорости элюирования приближает процесс к равновесному и улучшает разделение компонентов. Если с увеличением длины колонки растет степень разделения, то увеличение ее диаметра приводит, как правило, к ухудшению разделения вследствие конвекционного перемешивания разделяемой смеси. [c.182]

Фракционирование полисахаридов на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой (31] проводят следующим образом. В колонку полисахариды вводят в виде водного раствора максимальной концентрации. Вначале ДЭАЭ-целлюлозу в колонке промывают водой, чтобы определить, удерживаются ли полисахариды этой целлюлозой. После этого проводят ступенчатое или непрерывное градиентное элюирование. Непрерывное градиентное элюирование позволяет определить число фракций и концентрации электролитов, необходимые для ступенчатого элюирования каждой из этих фракций. Ступенчатое вымывание позволяет лучше разделить полисахариды на фракции, чем непрерывное градиентное элюирование. Скорость протекания элюента через колонку не должна превышать 1,5 мл в минуту. Фракции объемом 10—20 мл собирают обычно с помощью автоматического коллектора. [c.47]

Устройство приборов для хроматографии и осуществление самого эксперимента сравнительно просты. Выбрав подходящую систему ионного обмена и проведя рекомендованную обработку (регенерацию) ионообменника, при идентичных условиях элюирования (скорость потока, температура и т. д.) можно получать хорошо воспроизводимые хроматограммы. Благодаря этому фракционирование белков с помощью ионообменной хроматографии имеет широкое распространение. [c.23]

Химическое освобождение связанного олигомера протекает за 10 мс, это достаточно быстро по сравнению с временем диффузии внутрь геля при скорости потока 5—40 мл/ч. Поэтому предположение, что устанавливается химическое равновесие, справедливо. Хотя нельзя считать, что при элюировании скорость потока [c.56]

Ai K l, 20 мл НгО. Затем около 4 мл разделяемой смеси ионов меди и кобальта пропускают через смолу и колонку промывают небольшим количеством (10—15 мл) воды. При этой операции ионы Си + и Со + поглощаются в верхней части катионита (этот слой приобретает бурую окраску). В емкость 2 (см. рис. 16) наливают раствор цитрата калия, открывают крап колонки и собирают элюат в пробирки по 4,0—4,5 мл. Скорость элюирования должна соответствовать 1 капле в 1 с. [c.57]

Все рассмотренные детекторы чувствительны к изменению скорости потока, что требует соблюдения ее постоянства при элюировании. [c.97]

В колоночной хроматографии проводят разделение макроколичеств веществ, при этом пробу в виде раствора отмеряют обычной мерной посудой. Подвижную фазу вводят в верхний конец колонки из резервуара, используя способ нисходящей хроматографии, при которой подвижная фаза движется под действием поля земного притяжения. При небольшой скорости передвижения жидкости в колонке продолжительность анализа сокращают, повышая давление. Обычно непродолжительным считают разделение со скоростью 1—20 мм мин- или 1—10 мл-мин . При проведении градиентного элюирования или при проявлении хроматограммы (см. стр. 344) применяют простую установку, приведенную на рис. 7.9. Она состоит из двух склянок с тубусами. В сосуд А вводят чистый растворитель Ьд, в сосуд Б — растворитель Ьб- При переходе растворителя Ьд в сосуд Б с одновременным переходом подвижной фазы из сосуда Б в разделительную колонку концентрация вещества А в подвижной фазе постоянно возрастает. [c.352]

Концентрирование цинка (II). Через колонку, заполненную полисорбом-1 с нанесенным на его поверхность диантипирилметаном, пропускают 250—500 мл воды, содержащей 0,25— 0,5 мг цинка. Высота слоя сорбента 50 мм. Скорость пропускания воды через колонку 1 л/ч. Для элюирования цинка через колонку пропускают 30 мл 2,5 М НС1. Элюат собирают и определяют в нем цинк по приведенной выше методике. Колонка может быть использована только для одного определения. [c.336]

Скорость элюирования выражают как линейную (см/ч, см/мин) или как объемную [мл/ (см мин) ]. На скорость элюирования влияют размер частиц ионита, вязкость раствора, температура и давление. [c.360]

Разделяющий эффект гель-хроматографии обусловлен тем, что молекулы малых диаметров способны проникать в гель глубже и удерживаться там дольше, поэтому при элюировании они выходят из колонки после более крупных молекул. Происходит как бы просеивание молекул. Слой геля в хроматографической колонке характеризуют высотой к и диаметром с1. При больших диаметрах скорость потока и разделения больше, чем при малых диаметрах. Однако разделение сложных смесей производят на узких и длинных колонках. [c.361]

Эффективность разделения в газовой хроматографии зависит от скорости миграции молекул исследуемого соединения через колонку и от распределения компонента между неподвижной и подвижной фазами, т. е. от наклона изотермы или константы распределения. Количественным выражением первого явления служит время удерживания (время элюирования) tr или удерживаемый объем Уг, второго явления — число теоретических тарелок N (безразмерная величина) или высота, эквивалентная теоретической тарелке, Н, мм. Кроме того, большое внимание уделяется изучению факторов и явлений, непосредственно воздействующих на [c.226]

В настоящее время известен метод с программированием газового потока , в котором в ходе элюирования непрерывно повышается скорость газа-носителя. Этот метод, так же как и программирование температуры, ведет к сокращению времени анализа. Комбинированием данных методов можно получить оптимальные условия проведения анализа. Для работы с программированием газового потока целесообразно применять капиллярные колонки. [c.370]

Основные требования, которыми должны обладать носители, следующие используемый носитель должен содержать поры с точно заданной величиной, что позволяет подбирать для каждой конкретной задачи оптимальный носитель и получать четкую калибровочную кривую носитель не должен содержать никаких ионогенных группировок, т. е. сродство носителя к анализируемым веществам должно быть минимальным только в этом случае вещества будут продвигаться по колонке в соответствии с размерами их молекул гранулы носителя должны иметь минимальные размеры и сферическую форму, так как эти свойства обеспечивают быстрое установление диффузионного равновесия и минимальное сопротивление колонки потоку гранулы носителя должны обладать достаточной механической прочностью, иначе их деформация в колонке приведет к падению скорости элюирования носитель должен быть достаточно термостойким. [c.74]

При элюировании чистым растворителем Е компоненты А и Б перемещаются вдоль сорбента (НФ) с различной скоростью. Компонент А, обладающий меньшим сродством к НФ, переносится быстрее компонента Б, обладающего более высоким сродством к НФ. При достаточной длине колонки компоненты А и Б полностью разделяются вначале элюируется зона компонента А, затем — зона чистого растворителя Е и, наконец, зона компонента Б. [c.268]

Эти недостатки моншо устранить очень простым способом — непрерывным повышением температуры колонки в процессе опыта в соответствии с определенной программой. Если начальная температура Го. т. е. температура колонки в момент ввода пробы, является оптимальной для наиболее летучих компонентов смеси, то они выделяются из колонки в приемлемое время и при этом хорошо разделяются, а высококипящие компоненты смеси удерживаются в начале колонки. При повышении температуры условия элюирования последовательно становятся оптимальными для компонентов с более высокими температурами кипения и они начинают значительно быстрее двигаться вдоль колонки. Каждый компонент при повышении температуры колонки имеет оптимальную для него область температур и элюируется примерно с той же скоростью, что и другие, но в другое время. Поэтому компонепты смеси, резко различающиеся по температурам кипения, дают пики примерно одинаковой формы и ширины. [c.394]

Если на неподвижный слой адсорбента поступает раствор, содержащий компоненты А и В, то эти компоненты при элюировании жидким десорбирующим агентом С перемещаются к выходу аппарата и удаляются в виде экстракта (А+С) и рафинада (В+С). Скорость перемещения компонентов А и В через слой адсор- [c.141]

Элюирование белков. Скорость протекания растворов через колонку не должна превышать 15—20 мл/ч, Элюат собирают порциями по [c.112]

Точные количественные измерения проводят в изократическом режиме. Градиентное элюирование применяют, когда провести изократическое разделение невозможно. Хотя при градиентном режиме получают воспроизводимые результаты, но при градиентном элюировании иногда наблюдается смещение базовой линии и появление ложных пиков из-за наличия в растворителях воды. Кроме того, градиентное элюирование удлиняет время анализа. При количественном анализе в режиме градиентного элюирования необходимо тщательно контролировать скорость потока, если измеряют площади пиков, и соблюдать постоянство градиентного изменения состава подвижной фазы, если измеряют высоты пиков. Для анализа смесей компонентов, характеризующихся широким диапазоном значений к, предпочтение следует отдавать изократическому разделению с переключением колонок, а не градиентному. [c.179]

В качестве исходных данных для конструкции реактора послужили условия реакции аминокислот с нингидриновым реагентом и скорость элюирования. Скорость подачи реагента (15 мл/ч) определяется скоростью подачи элюата (30 мл/ч) и соотношением объемов элюата и реагента (2 1). Суммарная скорость потока (45 мл/ч) и время инкубации смеси при 100 °С (15 мин) позволяют рассчитать объем реактора (равный 11,5 мл). Однако при таком объеме реактора неизбежно должно наступить смешивание зон, если использовать трубку слишком большого диаметра. Опытным путем было показано, что перекрывание зон наступает лишь при внутреннем диаметре более 1 мм. Поэтому спираль реактора представляет собой тонкий тефлоновый капилляр с внутренним диаметром 0,7 мм и длиной 30 м. Электрические нагревательные элементы термостата обеспечивают равномерное кипение воды, а конденсация паров осуществляется в обратном воздушном холодильнике. [c.317]

Колонка 10X97 см (1 ,=9100 мл) элюент —0,1М раствор ацетата натрия с добавкой 0,01% азида натрия восходящее элюирование скорость потока 200 мл/ч проба — 55 мл экстракта отбор фракций каждые 30 мин температура хроматографирования 5 °С обнаружение— по поглощению при 280 и 410 нм. Ферментативная активность / — катепсн-на С (410 нм), 2 —катепсина В (280 нм), 3 —катепсина В1 (410 нм). [c.384]

Для уменьшения ширины пика америция и изучения влияния на его элюирование скорости потока ширину пика элюирования америция на половине его высоты измеряли при определенных скоростях потока как функцию температуры, размера частиц сорбента и количества его поперечных связок. Результаты этих опытов представлены на фиг. 1. Ширину пика опре деляли на половине его высоты и выражали в объемных процентах элюата, необходимого для получения раствора максимальной концентрации. [c.41]

Полисахариды наносят на колонку в виде концентрированных растворов. Вначале обычно колонку промывают водой, чтобы определить, удерживаются ли полисахариды. Далее можно использовать и ступенчатое, и непрерывное градиентное элюирование (см. стр. 272). Желательно провести сначала непрерывное градиентное элюирование, чтобы оценить примерно число фракций и концентрации электролита, необходимые для ступенчатого элюирования каждой из этих фракций. Ступенчатое вымывание обычно дает лучшее разделение и более компактные фракции, чем непрерывное градиентное элюирование. Скорость протекания через колонку не должна превышать 1,5 мл1мин. Фракции объемом 10—20 мл собирают обычно с помощью автоматического коллектора. [c.270]

Колонка ЗО Кб мм (внутр. диаметр) неподвижная фаза микросил Са 0,02 М подвижная фаза раствор ацетата натрия (pH 5) — тетрагидрофуран — метанол, ступенчатое градиентное элюирование скорость потока 2 мл/мин обнаружение по флуоресценции. Идентифицированы производные следующих соединений 1 — аспарагиновой кислоты 2 — треонина 3 серина 4 — глутаминовой кислоты 5 — глицина 6 — аланина 7 — тирозина 8 валина 9 — цистеина 10 гистидина 11 — метионина 12 — глутамина 13 изолейцина 14 — лейцина 15—фенилаланина 16—аргинина 17 триптофана 18 — ам- [c.46]

Элюирование. Скорость элюции можно регулировать с помощью гидростатического давления в колонке. Для строго постоянного тока жидкости )екомендуется использовать сосуд Мариотта. В этом случае рабочее давление соответствует разности по вертикали между нижним уровнем в сосуде и выходным отверстием колонки. [c.135]

Большую роль в повышении эффективности фракционирования слоншых смесей сыграло создание жидкостной хроматографии высокого давления (ЖХВД). Высокая скорость разделения, возмож ность реализации любого из отмеченных выше механизмов сорбции, применимость для разделения любых растворимых в элюенте соединений, независимо от их молекулярной массы, возможность непрерывного контроля элюирования с помош ью высокочувствительных детекторов, управления процессом разделения путем программирования температуры, скорости потока и состава элю-ента, автоматическая регистрация результатов обеспетали широчайшее распространение ШХВД для решения препаративных задач, количественного анализа и идентификации компонентов анализируемых смесей [109, 111, 122 и др.]. [c.17]

Благодаря высокой чувствительности детекторов, применяемых в современных жидкостных хроматографах, для анализа достаточно нескольких микролитров вещества. Разделение осуществляется в короткие промежутки времени за счет использования колонок малых размеров и высоких скоростей элюирования (давления на входе в колонку до нескольких сотен атмосфер). При применении некоторых типов детекторов (спектрофотометрических, транспортных и др.) можно управлять ходом разделения путем регулируемого изменения температуры, давления или состава элюента в ходе анализа. Программируемое изменение состава элюента (градиентное элюирование) плодотворно реализовано, например, в уже отмечавшейся методике ЛЭАХ [123, 124] (см. рис. 1.1). На применении транспортного детектора и смеси трех растворителей в качестве подвижной фазы основан способ [c.33]

Самым эффективным из современных методов исследования состава слоншых смесей и структуры присутствующих в них компонентов можно считать хроматомасс-снектрометрию, сочетающую огромную разделительную способность газовой хроматографии с высокой чувствительностью и идентификационной мощью масс-снектрометрии (метод ГХ — МС). Для создания этого метода потребовалось решить две главные технические задачи разработать быстродействующие масс-спектрометры с очень большой скоростью развертки спектров (за время, меньшее времени элюирования любого соединения из ГХ колонки) и специальных сепарирующих устройств для концентрирования элюатов. Современные масс-спектрометры позволяют получить спектр вещества в интервале массовых чисел 50—500 за время, меньшее 1 с, при разрешении т/Ът= 500 и более [328, 329]. Отделение большей части (80— 90%) газа-носителя от элюирующихся органических соединений, необходимое для поддержания в масс-спектрометре низких остаточных давлений, возможно с помощью молекулярных сепараторов различных типов струйных [330, 331], эффузионных с тонконорис-тыми стеклянными трубками [332] или металлическими мембранами [333, 334], сепараторов с полупроницаемыми полимерными мембранами (тефлоновой [335], силиконовой [336]) и др. [c.40]

ДЛЯ определения значений В12 различных смесей [201, 202]. Метод основан на измерении объемов, удерживаемых газом-носителем при различных давлениях газа-носителя, с последующей экстраполяцией на нулевое давление газа. Для такой экстраполяции предложены два метода приближенного описания процесса элюирования [201, 203], которые, к сожалению, дают различные значения В12 при обработке одних и тех же экспериментальных данных. Недавно Крюикшанк, Виндзор и Янг [202] сформулировали задачу по-новому с использованием местного давления и скорости на выходе газа-носителя. Это позволило более успешно производить экстраполяцию на нулевое давление. [c.117]

Предварительно переводят ионогенные группы катионита в П+-форму, пропуская через колонку 40 мл 3 М раствора НС1. Для этого 20 мл кислоты наливают в емкость 2 и через несколько секунд (после полного выхода пузырьков воздуха из трубки 4) открывают кран 6 и устанавливают необходимую скорость вытекания раствора (I капля в 1 с). Когда уровень раствора опустится до нпжней частп трубки 4, закрывают кран 6 н наливают в емкость 2 новую пор-цртю кнслоты. Снова устанавливают оптпмальиую скорость элюирования. [c.55]

Через колонку пропускают 4 мл раствора соли меди или 2,5 мл раствора соли кобальта. Затем через К13Л0Н-ку пропускают 3 М НС1 со скоростью 1 капля за 2 с для элюирования адсорбированных в верхней части слоя смолы ионов М2+. Порции элюата по [c.56]

В хроматографическую колонку, представляющую собой стеклянную трубку диаметром 4 мм, высотой 15 мм, помещают 1 г ГДЦ с размером зерен 0,20—0,25 мм. Колонку промывают 10 мл дистиллированной воды, после чего вносят в нее раствор, содержащий от 0,2 до 15 мг молибдена (VI) и вольфрама (VI). Позволяют раствору вытекать из колонки со скоростью 1 м/ч. Далее промывают колонку 5 мл воды, а затем элюируют молибден (VI) 0,3 М раствором гидроксида натрия в 0,15 М сульфате натрия, а вольфрам (VI) 0,1 М раствором гидроксида натрия. Скорость протекания элюентов 0,2 м/ч. Для того, чтобы подготовить колонку к следующему циклу сорбция-десорбция, ее после элюирования вольфрама(VI) промывают водой до рН-10. Вольфрам(VI) и молибден(У1) в элюа-тах определяют фотометрически. [c.332]

Концентрирование меди (II). Через колонку, заполненную полисорбом-1 с нанесенным на его поверхность РЬ(ДДК)2> пропускают 100—200 мл анализируемого раствора со скоростью 1 мл/мин. Затем для десорбции поглощенной меди с такой же скоростью пропускают через колонку 0,1 М раствор азотной кислоты. В делительную воронку собирают 20 мл элюата, до бавляют 0,1 мл раствора РЬ(ДДК)г, 5 мл хлороформа и встря хивают 3 мин. Далее измеряют оптическую плотность хлоро формного экстракта и по градуировочному графику опреде ляют содержание меди в растворе. При элюировании меди 0,1 М раствором азотной кислоты одна и та же колонка может быть использована в трех циклах сорбция-десорбция. [c.336]

Для проведения ионного обмена, промывания колонки до нейтральной реакции промывных вод и элюироваиия применяют приспособление, схематически изображенное на рис. Д.83. Оно позволяет получить постоянную скорость капания и проводить элюирование в отсутствие экспериментатора (например, в ночное время). [c.254]

Часто в качестве вытеснителя используют вещество, сорбирующееся несколько слабее поглощенных на колонке компонентов. Вследствие того, что раствор такого вещества подается на колонку непрерывно и в большом количестве, под его воздействием зоны отдельных компонентов анализируемой смеси перемещаются вниз по колонке, причем с различной скоростью, зависящей от их сорбируемости. Таким образом получают кривые вымывания (элюирования), аналогичные кривым, полученным при анализе промыванием (см. рис. I, в), только во фракциях веществ А, В и С содержится также вещество-вытеснитель. Этот способ извлечения сорбированных на колонке веществ часто называют элюитивным, хотя по своей физической сущности его следует отнести к вытеснительному анализу. [c.12]

Уравнение (140) применимо для расчета тах ТОЛЬКО ПрИ небольших скоростях потока раствора через колонку, когда в элементарных слоях сорбента практически устанавливается равновесное состояние. Чем больше разница Утах двух ионов, тем полнее будет их разделение. На основе величин Утях невозможно предвидеть наличие или отсутствие перекрывания кривых элюирования различных ионов. [c.183]

В простейшем варианте хроматографирование осуществляют на колонках, в которые помещают сорбент, служащий стационарной фазой. Раствор, содержащий смесь веществ, которые надо разделить, пропускают через колонку. Компоненты анализируемой смеси перемещаются через стационарную фазу вместе с подвижной фазой под действием силы тяжести или под давлением. Разделение осуществляется благодаря перемещению компонентов смеси с различной скоростью вследствие их взаимодействия с сорбентом. В результате вещества распределяются на сорбенте, образуя адсорбционные слои, называемые зонами. В зависимости от целей разделения или анализа могут быть разные варианты последующей обработки. Наиболее распространенный способ — элюирование. Через колонку с адсорбированными на ней веществами пропускают подходящий растворитель — элюент, который вымывает из колонки один или несколько сорбированных компонентов их затем можно определить в полученном растворе — элюате. Можно пропустить через колонку реагент-проявитель, благодаря которому сорбированные вещества становятся видимыми, т. е. слой сорбен- [c.107]

Мягкие гели обладают невысокой механической прочностью. Жидкая ПФ проходит между фанулами геля под действием силы тяжести. В хроматофафической колонке с виут]1енним диаметром около 2,5 см скорость движения жидкой ПФ обычно невелика и составляет около 16 мл/ч. Из-за малых скоростей движенш ПФ время элюирования самых малых частиц достигает 16 ч. [c.284]

Для данной колонки предварительно строят кривую зависимости количества элюированного сульфида от объема элюента. Элюент - гексан, скорость элюирования - 26 капель в 1 мин. Разделение смеси стереоизоме- [c.133]

Разнообразны техн. приемы, используемые в БХ. Бумаге придают любую форму, удобную для техн. осуществления элюирования компонентов, что обеспечивает определ. скорость протекания р-рителя. БХ можно проводить в центробежном поле нлн в условиях градиента т-ры, что увеличивает эффективность и скорость разделения. [c.669]

Фракционирование белков сыворотки крови на КМ-целлюлозе осуществляют с помощью ступенчатого элюирования, подавая на колонку последовательно следующие растворы 0,02 М натрий-ацетатный буфер, pH 4,6 ( стартовый буфер), затем 0,05 М натрий-ацетатный буфер, pH 5,2 0,08 М натрий-ацетатный буфер, pH 6,0 0,1 М фосфатный буфер, pH 7,0 и, наконец, 0,1 М фосфатный буфер, содержащий 0,5 М Na l, pH 8,3. Каждый новый раствор подают на колонку только после того, как полностью элюируется пик, вымываемый предыдущим раствором. Скорость тока приблизительно составляет 50 мл/ч. Элюат собирают порциями по 2—3 мл. Обработку результатов см. на с. 108. Идентификацию белков осуществляют методом электрофореза на бумаге или в полиакриламидном геле (с. 112). Регенерацию КМ-целлюлозы проводят вне колонки. [c.113]

Высокая стабильность скорости потока. Точность поддержания скорости потока в колонке во многом определяет результаты как качественного, так и количественного анализа. Для основных вариантов ВЭЖХ нестабильность потока не должна превышать 0,5—1%. В эксклюзионной хроматографии при анализе молекулярно-массового распределения полимеров требования еще выше—0,1—0,3%. Кроме того, весьма желательно, чтобы насос не давал пульсации потока и имел малый рабочий объем для быстрой смены растворителя в режиме градиентного, элюирования. [c.139]

В описанной системе достигнуты поистине уникальные характеристики при скорости потока от 1 мкл/мин до 5 мл/мин нестабильность потока составляет менее 1%, а воспроизводимость результатов в режиме градиентного элюирования лучше 1%. Такие параметры позволяют успешно работать с колонками любых типов, применяемыми в аналитической ВЭЖХ. [c.142]

Компьютерные системы обработки данных являются наиболее сложными и дорогими. Они делятся на две группы. Устройства первой группы предназначены только для обработки данных и представляют собой малогабаритные вычислительные машины с большим объемом памяти, которые выполняют разнообразные сложные расчеты (например, в эксклюзионной хроматографии) и представляют результаты в цифровой и графической форме. Устройства, относящиеся ко второй группе, кроме обработки данных, осуществляют управление различными элементами хроматографической системы. К тагим элементам относят, в частности, установку параметров процесса (температура, скорость потока, условия детектирования и др.) и состав подвижной фазы в изократическом и градиентном элюировании, режим работы автоматического дозатора и т.п. Все необходимые параметры постоянно контролируются, что гарантирует их стабильность в процессе разделения. [c.160]