Белки стехиометрия

Ферменты функционируют либо в растворах, либо в надмолекулярных структурах. Сорбция реагентов, именуемых субстратами, и реакция протекают на некоторой поверхности большой молекулы белка. В этом смысле ферментативный катализ сходен с гетерогенным. Однако белок-фермент и малые молекулы субстратов находятся в одной фазе в растворе. Имеется строгая стехиометрия взаимодействия — как правило, одна белковая глобула взаимодействует с одной молекулой субстрата или другого лиганда. При взаимодействии образуется фермент-субстратный комплекс (ФСК), строение и свойства которого изучаются физическими и химическими методами. Ферментативный катализ в растворе — гомогенный катализ. [c.177]

При связывании НАД-Н дисперсия оптического вращения алкогольдегидрогеназы становится аномальной благодаря появлению одного, ярко выраженного отрицательного эффекта Коттона [96]. Этот необычный в данном случае эффект происходит в результате образования оптически активного комплекса между ферментом и коферментом. Асимметрическое связывание хромофорной молекулы с молекулой нативного белка-фермента индуцирует появление оптически активной полосы поглощения хромофора. Точка перегиба на графике, иллюстрирующем эффект Коттона алкогольдегидрогеназы печени лошади при длине волны 327 нм, соответствует близко расположенному максимуму поглощения комплекса фермент — НАД-Н. Стехиометрия связывания НАД-Н или аналогов кофермента с алкогольдегидрогеназой печени может быть количественно оценена путем титрования с помощью метода дисперсии оптического вращения, используя изменение амплитуды эффекта Коттона после добавления НДД-Н [c.407]

Как только формирование полипептидной цепи закончено, она снимается с рибосомы в окружающую среду, принимая характерную пространственную конфигурацию, типичную для данного специфического белка. Рибосомная РНК участвует в этом процессе, по-видимому, по стехиометри-ческому а не по каталитическому типу. [c.346]

Рассмотрим применение кинетических методов для анализа процессов связывания органических лигандов с белками. При этом поставим перед собой следующие задачи а) выяснить стехиометрию процесса связывания, б) определить, какой простейшей кинетической схеме соответствует процесс, в) определить значения ки- [c.203]

Но, пожалуй, самое существенное отличие между гемэритрином и гемоглобином заключено в стехиометрии реакции этих белков с кислородом. Для того чтобы связать одну молекулу кислорода в гемэритрине, требуются два атома железа [2], тогда как гемоглобину достаточно одного. [c.380]

Кроме ферментов, в которых весь связанный металл либо его часть играют в большей степени структурную, чем каталитическую роль, известны ферменты, содержащие два различных металла, которые, по-впдимому, играют одинаковую каталитическую роль, например алкогольдегидрогеназа, выделенная из дрожжей, выращенных в присутствии СоСЬ [92] (разд. 5). В таких случаях смешанная стехиометрия может быть результатом либо наличия двух металлоферментов в соответствующем соотношении, либо образования истинного гибридного металлофермента. Нет простых методов, чтобы установить разницу между этими двумя возможностями, кроме тех случаев, когда в результате замещения металла происходит изменение свойств белка. И хотя включение нескольких металлов в фермент является обычно результатом заранее обдуманного введения этих металлов в пищу или в питательную среду, однако такие же ситуации могут иметь место и в природе, [c.459]

По количеству лиганда, обратимо или необратимо связанного с неизвестным количеством высокомолекулярного вещества, можно рассчитать их константу равновесия нли стехиометрию связывания [41] (рис. 16.7). Для этого проводят инкубирование данного вещества и лиганда с последующей гель-фильтрацией на сефадексе 0-50, причем уравновешивание и элюцию осуществляют с помощью раствора с такой же концентрацией лиганда, которая использовалась в эксперименте по связыванию. При элюировании концентрация лиганда в пике белка оказывается выше, чем в элюирующем буфере, за счет связывания лиганда с белком, который в этот момент находится в элюате. На участке кривой элюции, соответствующем общему, или солевому , объему элюата, образуется впадина. Здесь находится исходная инкубационная смесь, из которой удален лиганд, связавшийся с уже вышедшим из колонки белком. Площадь впадины равна площади пика. Определив количество лиганда, исходя из суммы площадей этих пиков, [c.223]

В соответствии с результатами работы [40] мы полагаем, что стехиометрия связывания 6-фосфофруктокиназы такова одна тетрамерная молекула фермента связывается димером белка полосы 3. Постулируемый гексамер белка полосы 3 должен связывать, таким образом, три молекулы 6-фосфофруктокиназы. [c.179]

Действительно, если контролировать солюбилизацию мембранных фосфолипидов детергентами с помощью высокочувствительных методов, можно убедиться, что повышение концентрации детергента экстрагирует из нативной мембраны все имеющиеся там липиды с одинаковой скоростью, не различая прочно связанные (аннулярные) и свободные липиды (рис. 19). Более того, использование спин-меченых фосфолипидов в процессе реконструкции различных мембранных ферментов позволило измерить скорость обмена молекул фосфолипидов между аннулярным слоем и окружающими липидами. Для разных белков обнаруживается своя доля иммобилизованного липида. По вытеснению метки из аннулярного слоя при добавлении немеченого липида можно определить сродство каждого липида к поверхности белка. Характерно, что значения стехиометрии связывания белком пограничных липидов, измеренные этим методом и рассчитанные из геометрических размеров молекулы белка, практически совпадали. [c.43]

Для расчета констант скорости из данных стационарной кинетики и определения стехиометрии связывания необходимо знать концентрацию активных центров ферментов. Рассчитать эту величину исходя из молекулярного веса белка и его концентрации нельзя, поскольку не всегда удается выделить абсолютно чистый фермент. Проблема определения концентрации была решена путем применения метода титрования активных центров и сочетанием исследования ферментативных реакций в стационарных и предстационарных условиях, позволяющих связать концентрацию активной формы фермента с начальным всплеском концентрации продукта. Начальный всплеск наблюдается в тех случаях, когда по ходу реакции происходит накопление связанного с ферментом промежуточного соединения. Первый моль субстрата быстро реагирует с ферментом с образованием стехиометрических количеств фермент-содержащего промежуточного соединения и продукта, а дальше реакция замедляется, поскольку идет медленный распад промежуточного соединения с высвобождением свободного фермента [c.152]

Если константа диссоциации комплекса достаточно мала, можно определить число эквивалентов лиганда, которое вызывает максимальное изменение в спектре это максимальное изменение имеет место в том случае, когда заняты все центры связывания. Например, к раствору белка, концентрация которого по крайней мере в 10 раз больше константы диссоциации, добавляются возрастающие количества субстрата. Для установления стехиометрии строят график, представленный па рис. 6.8. [c.207]

Рентгеноструктурный анализ низкого разрешения (6 А) показал, что трехвалентный гадолиний связывается в активном центре лизоцима между участками D и Е и блокирует обе каталитические группы фермента — карбоксильные группы остатков Asp 52 и Glu 35 [2]. Улучшение разрешения (до 2,5 А) показало, что в активном центре лизоцима имеются два участка связывания Gd (П1), которые отстоят друг от друга на 3,6 А [33] и находятся в непосредственной близости от каждой из указанных карбоксильных групп, причем с одной молекулой фермента связывается только один катион металла (связанный с одной из двух карбоксильных гру[ш или быстро обменивающийся между ними) [33]. Это согласуется с данными по лизоциму в растворе, где стехиометрия связывания фермента с Gd (П1) равна 1 1 [33, 46]. Тот факт, что Gd (HI) ингибирует активность лизоцима в растворе, также согласуется с данными рентгеноструктурного анализа [33]. Наконец, то, что локализация Gd (III), связанного в активном центре лизоцима, почти одинакова для тетрагонального и три-клиниого фермента [33], свидетельствует о сходстве третичной структуры белков в этих двух полиморфных состояниях, несмот- [c.157]

Ярким примером такого рода регуляторных переключений являются события, происходящие в ответ на тепловой шок. Процессы клеточной дифференцировки также сопровождаются включением в Т. новых мРНК, иногда накопленных в цитоплазме заранее, а также изменением скоростей Т. и выключением нек-рых мРНК из Т. Регуляция синтеза белков на Зфовне Т. играет важную роль у всех организмов, включая бактерии, в координации продукции разл. белков в клетке и поддержании их правильных стехиометрич. соотношений (это особенно касается поддержания стехиометрии синтеза субъединиц сложных белков). [c.622]

Поскольку ДФФ не является полным структурным аналогом нормальных субстратов этих ферментов, опасность присоединения метки не к активному центру, а к каким-то другим участкам молекулы фермента в этом случае, естественно, больше, нежели в случаях описанных выше. Однако скорость, стехиометрия и специфичность реакции присоединения ДФФ явно указывают, что метка действительно попадает в активный центр. Известно, например, что ДФФ специфически фосфорилирует один из двух остатков серина в химотрипсине. Химотрипсин может быть помечен и многими другими аналогичными агентами, в том числе и-нитрофенилацетатом, причем в каждом случае аципируется одна и та же гидроксильная группа серина, тогда как никакие другие группы не ацилируются. Во многих (хотя и не во всех) исследованных эстеразах и протеиназах ДФФ фосфорилирует гидроксильную группу только того серина, с К-концом которого связан либо аланин, либо глицин. Данные, характеризующие окружение реакционноспособного серина в некоторых белках, приведены в табл. 29. Из таблицы видно, что даже ферменты, сильно различающиеся по своей специфичности, могут иметь одинаковую последовательность аминокислот в участках, примыкающих к остатку серина, содержащему реакционноспособную гидроксильную группу. Это позволяет думать, что специфичность фермента и его способность ката- [c.198]

В работе ( а158ЫиШ, Gг eger, 1973) описана методика температурного скачка, позволяющая проводить кинетическйе. исследования при различных внешних давлениях, и исследована кинетика комплексообразования хромофорной метки бромфенолового голубого с р-лактоглобулином, который представляет собой протеин молока с молекулярной массой 17 750 дальтон. Бромфеноло-вый голубой является хромофорной меткой р-лактоглобулина, он связывается с белком в стехиометрии 1 1, при этом наблюдаются существенные спектральные изменения красителя. Кинетика комплексообразования характеризуется двумя временами релаксации, [c.221]

Многие из общих подходов к исследованию механизма действия ферментов также применимы и к изучению роли ионов металлов в ферментативном катализе. Схемы координации, описывающие взаимодействие фермента, металла и лиганда, могут быть изучены методами, применяемыми при определении стехиометрии и сродства связывания белками небольших молекул. Эти методы включают гель-фильтрацию в присутствии или в отсутствие небольших молекул [49], метод скоростного диализа [50], ультрафильтрацию, метод ультрацентрифугирования по Хейесу — Велику [52], равновесный диализ [53], а также методы для измерения только сродства взаимодействия [54—58]. Выбор схемы координации ионов металлов и лигандов с ферментами с помощью этих методов возможен только при отсутствии влияния других факторов. Например, если образуется комплекс Е — лиганд — М +, фермент должен проявлять значительное сродство к иону металла только в присутствии лиганда. И, наоборот, если образуется комплекс Е — М + — лиганд, то не должно происходить значительного связывания лиганда в отсутствие иона металла. Однако практически ферменты часто проявляют склонность к связыванию обоих компонентов комплекса, невзирая на выбранную схему координации. Следовательно, важны данные, полученные с учетом стехиометрических и кинетических критериев. Такие важные типы комплексов, как Е — лиганд — М + и Е — М + — лиганд, обычно содержат все три компонента в эквимолярных количествах. Более [c.449]

Наиболее благоприятные условия для проявления специфичности и предотвращения денатурации определяются стехиометри-чеоким уравнением. Определение этих условий основано на литературных данных и мнениях ряда авторов обзорных статей. Однако выше уже подчеркивалось, что поведение какого-либо одного белка по отношению к определенному реагенту или к определенным условиям денатурации не обязательно совпадает с поведением другого белка. Как правило, наиболее благоприятными являются реакции, быстро протекающие при малых концентрациях реагентов и температурах от 0 до 25°. Низкие температуры в этом случае более предпочтительны вследствие того, что температурный коэффициент процесса денатурации белка гораздо выше, чем температурный коэффициент обычных химических реакций. Важность контроля рН подчеркивается условиями, приведенными в сносках к табл. 1 и указываемыми соответствующими уравнениями. Большинство реакций протекает в почти нейтральной области, что требует соответствующего буфе-рировакия реагирующей системы. В целом ряде приведенных ниже случаев специфичность групповых реагентов при изменении рН пропадает. Кроме того, в ряде случаев выделяющиеся низкомолекулярные продукты реакции могут катализировать новые реакции, денатурировать белок или иным образом влиять на не-забуференную систему. Продолжительность реакций варьирует от нескольких минут до нескольких дней. Если желательно полностью блокировать одну группу без изменения других, то для определения оптимальных условий необходимы предварительные опыты с каждым белком. Обычно нужные сведения получают, наблюдая за ходом реакции с помощью количественного анализа функциональных групп. [c.285]

Данные рентгеноструктурного анализа показывают, что при комплексообразовании важную роль играют пептидные группы при этом атом азота иминофуппы не координирует ион металла. Наличие боковых радикалов у аминокислотных остатков, содержащих дополнительные —СООН, —КНг, —8Н и имидазольную группы, во многом определяет тип координации иона металла полипептидной цепью, при этом пептидные группы играют незначительную роль. Существенным фактором при комплексообразовании является суммарный заряд молекулы белка, так как именно величина этого заряда, а также пространственное распределение точечных зарядов на белковой молекуле определяют стехиометрию образующегося комплекса. Другими важными факторами являются число электронодонорных групп в полипептидной цепи, доступных для координации, а также реакционная способность этих групп по отнощению к ионам данного металла. [c.74]

Как белок Int, так и белок IHF связываются со специфическими сайтами в att-ДНК in vitro. Для осуществления рекомбинации на одну рекомбинантную ДНК необходимо около 20-40 молекул Int-белка с мол. массой 40000. Белка IHF требуется еще больше, примерно 70 молекул с мол. массой 20000 дальтон на рекомбинант. (Белок IHF содержит субъединицы с мол. массой 11 ООО и 9500.) Высокая стехиометрия свидетельствует о том, что белки не функционируют каталитически, а образуют какую-то структуру, которая поддерживает только одно рекомбинационное событие. [c.456]

Сопрягающий фактор АТФазы (фактор Fi для митохондрий или Fi для хлоропластов) представляет собой полифункциональный белок, имеющий сложную четвертичную структуру. Он построен из трех типов крупных субъединиц (а, Р, у с молекулярной массой 30000-60000) и двух типов минорных субъединиц 8, s с молекулярной массой 11000-20000). Стехиометрия комплекса (азРзу8е- Разложение его на отдельные субъединицы ведет к потере ферментативной активности. Шляпка высотой 80 А и шириной 100 А (Walker J., 1994) грибовидного выроста Н+-АТФазы соответствует фактору F, частично погруженному в мембрану, а основание — гидрофобным белкам комплекса Fq, который включает три типа полипептидов (а, Ь, с) с молекулярными массами от 6500 до 30 ООО и обеспечивает связывание фактора Fi с мембраной и перенос протонов при работе фермента. На каждую пару а-р-субъединиц приходится по одному полипептиду а, по два белка и по 9-12 копий с-белка водорастворимого комплекса. Субъединицы а и р гомологичны, они уложены в белковые глобулы, которые образуют единый ансамбль, в котором а- и р-субъединицы расположены поочередно вокруг у-субъединицы, имеющей вид слегка изогнутого стержня длиной 90 А. Существуют кинетические и структурные доказательства наличия 3-х взаимодействующих гидролитических мест, по одному на каждой р-субъединице, отделенных друг от друга на 120 градусов, у-субъединица как бы выступает из глобулы Fi, играя роль связующего звена между мембранами Fi и водорастворимыми Fg фрагментами АТФазы. [c.222]

Существенным для понимания всех аспектов переноса электронов в мембранах, а также сопряженных с ним процессов является вращательная и латеральная диффузия не только подвижных переносчиков, но и отдельных комплексов и их агрегатов. Подвижность комплексов приводит к тому, что теряет смысл понятие единой структурной электронтранспортной цепи, так как стехиометрия взаимодействия комплексов определена лишь в среднем и может меняться при изменении внешних условий. Если регулируемая условиями внешней среды латеральная асимметрия в распределении комплексов переносчиков достаточно хорошо установлена для фотосинтетического аппарата высших растений, то, несомненно, аналогичные процессы регулирования пространственной обособленности отдельных реакций могут происходить и у фотосинтезрфующих бактерий и митохондрий. Динамическая организация электронного транспорта, проявляющаяся в процессах агрегации— дезагрегации как отдельных переносчиков электронов с комплексами, так и самих комплексов, приводит к быстрому и высокоэффективному переносу электронов (внутри комплексов), увеличивает надежность функционирования цепи переноса электронов, обеспечивая возможность замены вышедших из строя элементов, а также их встраивание в процессе б иогенеза и, кроме того, обеспечивает возможность эффективных способов регуляции транспорта электронов за счет изменения степени агрегации комплексов, их пространственной обособленности и взаимного положения в мембране. Асимметричная латеральная и трансмембранная организация комплексов в мембране может направленно регулироваться такими факторами, как липидный состав мембраны, соотношение липид/белок, микровязкость, энзиматическая модификация белков, ионный состав среды и др. [c.286]

Основную роль в липид-белковых взаимодействиях играют, согласно модели, цепи жирных кислот, которые должны иметь стерические соответствия с белком. С этой точки зрения становятся понятными факты иммобилизации липидов в составе мембранных белков и стехиометрии липид-белок [3]. Существенно, однако, что модель предсказывает также комплементарность полярных групп липидов и белков информационных зон ССИВС. [c.165]

Подсчет концентраций трех типов цитохромов, определяющих их стехиометрию у разных видов фибов (Gallinet, 1974), нмоль/мг белка [c.182]

Четвертичная структура нескольких белков, состоящих из субъединиц, в настоящее время хорошо известна благодаря рентгеноструктурным исследованиям. Сложность таких белков варьирует в широких пределах — начиная со столь простых белков, как пероксид-дисмутаза (состоящая из двух идентичных субъединиц), и вплоть до таких сложных молекул, как аспартат—карбамоилтрансфераза (субъединичная стехиометрия которой описывается формулой r g). [c.20]

После синтеза соответствующих пептидов исследовали их взаимодействие с ионом европия, конкурирующим с Са + за центры связывания во многих системах. Этот лантанид был использован не только потому, что его сродство к участкам связывания Са2+ существенно выше, чем у Са +, но и из-за того, что люминесценция евройия меняется при его взаимодействии с белками. Оказалось, что связывание пептида с европием происходит со стехиометрией 1 1. Люминесцентный анализ также показал, что при связывании Са + с пептидом нейтрализуется не два, как в Са-АТФазе, а один положительный заряд Еи +. Этот факт, а также то, что сродство лантанида к данным пептидам невысоко Kd около 100 мкМ), свидетельствует о том, что за связывание Са +, помимо описанных, ответственны и другие участки Са-АТФазы. [c.70]

Путь переноса электронов из общего пула убихинонов до цитохрома С2 полностью не выяснен. В случае Rps. sphaeroides удается идентифицировать 3 Ре/5-белка, а также 2 или 3 цитохрома типа Ь, различающиеся по величине Ет,г (—90 мВ, -f50 мВ, Н-15 мВ соответственно). Для выяснения механизма переноса существенны следующие два наблюдения. Во-первых, в присутствии валиномицина (препятствующего образованию Аг )) стехиометрия переноса протонов в хроматофорах составляет 2Н+/е , если свет подается последовательными вспышками, каждая из которых индуцирует один цикл переноса электронов. Во-вторых, анализ сдвига спектра каротиноидов в ответ на одну такую вспышку указывает на существование третьей медленной электрогенной стадии. Чувствительность этого процесса к ингибиторам по аналогии с митохондриями (разд. 5.8) свидетельствует об участии в нем цитохромов типа Ь. Приведенные [c.138]

Как в клетке обеспечивается стехиометрия по всем 60 рибосомным компонентам, в т.ч. по белкам И как обеспечивается соотношение рРНК-белок Это происходит благодаря многим регуляторным обратным связям, причем как уже говорилось, первично регулируется рРНК, а белки подстраиваются к ней. [c.18]

КФ может диссоциировать на субъединицы только после обработки 05-Ка. При электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии 05-Ыа дифференцировали сперва три полосы, соответствующие трем субъединицам КФ, обозначенным а, р, у. Полоса, принадлежащая а-субъединице, была разделена на две а и а. Недавно Коэн и др. [49] обнаружили в молекуле КФ еще одну субъединицу — с м. в. 17 ООО — и показали, что по своим физикохимическим параметрам, первичной структуре [50], а также по функции она близка к кальмодулину — Са -связывающему белку, активирующему фосфодиэстеразу циклических нуклеотидов [М—53]. Ряд авторов проводил определение молекулярного веса субъединиц [20, 22, 23, 37, 38, 54]. Наибольшие колебания м. в. наблюдали для а- и р-субъединиц а — от 118 000 до 145 000, а — от 133 000 до 140 000, р — от 108 0000 до 130 000, V — от 41000 до 48 000. На основе определения молекулярных весов и их весовых соотношений рассчитывали стехиометрию субъединиц [20, 23]. Результаты, полученные разными методами исследования, [c.56]

Несмотря на достигнутые успехи, все же не известен ни субъ-единичный состав каталитического белка, ни стехиометрия взаимодействия белков аденилатциклазного комплекса в мембране. В начальной стадии находятся исследования химической природы контактов между компонентами аденилатциклазного комплекса. [c.100]

Гипотеза о том, что 14 S-частицы являются пентамерами незрелых 5 S-протомеров (VPO, VP3, VP1) [271], подтверждается результатами измерения их коэффициентов седиментации и стехиометрии полипептидных цепей [201]. 14 S-частицы из клеток HeLa, зараженных вирусом ЕМС, осаждаются на 6% быстрее, чем (VP2, VP3, VP1)-содержащие 13,4 S-пентамеры из зрелых вирионов, в точном соответствии с предсказаниями теории седиментации (табл. 18.7). О том, что 14 S-субъединицы состоят из протомеров, свидетельствует их диссоциация на меньшие субъединицы с коэффициентом седиментации 5S и соотношением белков VPO, VP3 и VP1 1 1 1, как и следует ожидать для незрелого протомера [201, 202]. [c.239]

Для осмысленной интерпретации результатов химического исследования белков необходимо детальное знание условий внутри клетки, включая точную стехиометрию всех белков, имеющих отношение к изучаемым про цессам, и такие регуляторные факторы, как pH, рСа,. концентрация нуклеотидов, а также, по-видимому фос-фолипидный состав прилегающих мембран. В ситуации, когда белки могут в стехиометрии 1 500 эффективно [c.17]

Опираясь на достигнутое к настоящему времени понимание химических свойств белков цитоскелета, мы можем указать те направления, в которых особенно нужны дальнейшие исследования. Очевидно, что необходимоаккуратное определение стехиометрии цитоскелетных. белков in vivo, поскольку некоторые из них, как известно, способны вызывать значительные эффекты даже в стехиометрии 1 500 [8]. Во-вторых, нужно измерить-для этих белков константы связывания, чтобы можно-было предсказывать, в каком соотношении они будут связываться при конкуренции за один и тот же связывающий участок. В-третьих,- характеристики белков важнО определить в физиологических условиях (при соответствующих pH, рСа, концентрациях нуклеозидтрифосфа-тов, ионной силе и т. д.). Например, F-актин, образовавшийся в растворе с высоким содержанием магния, ведет себя (н сам по себе, и в комплексе с другими белками) не так, как F-актин, образовавшийся в присутствии калия [5, 44]. Это может иметь физиологическое значение,, поскольку, например, у амебы концентрация магния выше, а концентрация калия ниже, чем в большинстве клеток позвоночных. Возможно, что указанные две формы Р-актина свойственны разным типам клеток. Далее,, постоянное внимание необходимо уделять протеолизу. В некоторых случаях протеолиз является артефактом w может приводить к образованию таких белковых фрагментов, которые сохраняют связывающие свойства нативных белков и потому могут влиять на их поведение в исследуемой системе [6]. В других случаях, как, на- [c.31]

Ассимиляция нитрата может быть еще более расточительной для углеродного баланса растений. В процессе поглощения и восстановления нитрата образуются ионы гидроксила, которые могут быть нейтрализованы органическими кислотами (обычно это малат). Для этого требуется потратить по меиьшей мере один эквивалент карбоксила иа каждую молекулу нитрата, восстановленного до аммиака. При стехиометрии реакции Яблочная кислота+2КЫОз —>-К2Малат+2 (—ЫНа) на каждую молекулу восстановленного нитрата необходимо перевести в органические соединения 2 атома углерода (разд. 16.5). Большая часть малата, запасенного в растительных вакуолях, может использоваться для компенсации защелачивания, связанного с превращением нитрата в азот аминокислот. Смысл этого состоит в следующем чем. больше белка синтезирует растение, используя нитрат в качестве источника азота, тем больше углерода оно должно превратить в анионы органических кислот. [c.392]

Рис. 6.8. Спектрофотометрическое титрование метгемоглобина (Ме1НЬ) инози-толгексафосфатом (1НР). При 512 и 649 нм поглощение комплекса увеличивается, а при 640, 618, 588 и 559 нм остается постоянным. Концентрация метгемоглобина в расчете на тетрамер (20 мкМ) примерно в 14 раз превышает константу диссоциации (1,4 мкМ) этого комплекса. Точка пересечения касательной к начальному участку кривой с плато дает стехиометрию связывания (в данном случае 1). Заметим, что этот простой метод нельзя использовать, если начальная концентрация белка не очень сильно превышает константу диссоциации, поскольку предполагается, что весь лигаид связы вается белком сразу после добавления.

Предстационарная кинетика обладает рядом преимуществ с практической точки зрения. Она имеет дело с очень простыми по сути процессами например, с ее помощью определяют стехиометрию процесса, в ходе которого происходит всплеск концентрации продукта, находят константы скорости переноса связанных с ферментом промежуточных соединений на второй субстрат или исследуют индуцируемые лигандами конформационные изменения в белках. Кроме того, характеристики процессов первого порядка (которые обычно изучают) не зависят от концентрации фермента в отличие от констант скорости, измеряемых в стационарной кинетике. Для исследования быстрых реакций требуются очень высокие концентрации ферментов, но их значения близки к концентрациям in vivo. Более того, аналогичные концентрации обычно используются при прямом определении физического состояния белка, что позволяет получать, например, данные об агрегации в условиях, при которых протекает реакция. [c.212]

Рис. 8.10. График зависимости стехиометрии связывания v от v/[L] для процесса присоединения лигаида L к димерному белку.

Справочник химика 21

Химия и химическая технология