Молекулярный вес проникающей хроматографии

Принцип метода. Метод молекулярно-ситовой хроматографии (гель-хроматографии, гель-проникающей хроматографии или эксклюзионной хроматографии) —это вид твердо-жидкостной хроматографии, основанный на различной способности молекул веществ, отличающихся своими размерами, проникать внутрь заполненных растворителем пор неподвижной фазы и задерживаться там на различное время. Молекулы, имеющие большой размер, не проникают совсем или проникают только в часть пор носителя и вымываются из колонки раньше, чем маленькие молекулы, вследствие чего обеспечивается разделение по размеру молекул в растворе. [c.69]

Физико-химические основы молекулярно-ситовой хроматографии. Если раствор, содержащий молекулы различного размера, ввести в колонку, то молекулы стремятся диффундировать из более концентрированного внешнего раствора в растворитель, находящийся в порах геля. В статических условиях этот процесс будет проходить до тех пор, пока не установится равновесие. При протекании раствора через колонку молекулы образца будут проникать в поры геля, если концентрация их снаружи больше, чем внутри геля. Когда зона растворенного вещества покинет данный участок геля, концентрация компонента внутри геля станет больше, чем его концентрация снаружи, и мо- [c.70]

Выбор носителя. Выбор геля как носителя определяется диапазоном его проницаемости, верхним пределом которого является предел ситового исключения (эксклюзионный предел), а нижним —полная проницаемость. Этот диапазон легко найти из калибровочной кривой, построившее для данного образца и геля. Рассмотрим типичную калибровочную кривую (см. рис. 26) для разделения двух веществ в молекулярно-ситовой хроматографии. Носители, представляющие кривую /, не подходят для разделения этих двух веществ, так как они полностью проникают в гель, и разделение будет неполным. Носители, представляющие кривую 2, также непригодны, так как эти два вещества совершенно не задерживаются гелем. Требуемыми свойствами обладают носители, представляющие кривую 3, так как оба разделяемые вещества входят в линейный диапазон проницаемости геля с максимальным отношением [c.77]

В 60-х годах появилась возможность синтезировать как ионогенные, так и незаряженные гели, обладающие строго определенными размерами пор. Это позволило разработать вариант хроматографии, сущность которого заключается в разделении смеси веществ на основе различия их способности проникать в гель — гель-хроматография. Этот метод позволяет разделять смеси веществ, обладающих различной молекулярной массой. [c.11]

Детальное обсуждение достоинств различных методов, используемых для фракционирования полимеров, выходит за рамки данной книги. Большинство этих методов достаточно сложно и требует длительного времени, причем число получаемых при разделении фракций в значительной степени зависит от продолжительности фракционирования. Следует различать препаративное фракционирование, когда осу-щ,ествляется разделение полимера на фракции с последующим определением молекулярной массы каждой фракции, и аналитическое фракционирование, при котором определяется молекулярно-массовое распределение без выделения каждой отдельной фракции. В первой группе методов следует упомянуть новую быструю методику фракционирования с помощью гель-проникающей хроматографии. В этом методе разделения используется хроматографическая колонка, в которой в качестве стационарной фазы применяют пористый набухший полимер сетчатого строения. По мере прохождения полимерного раствора по колонке молекулы полимера диффундируют через гель в соответствии с их размерами. Молекулы небольшой длины глубоко проникают в гель, и, следовательно, для их прохождения через колонку тре- [c.239]

Разделение происходит потому, что стационарная фаза имеет поры разного диаметра. Более мелкие молекулы могут проникать в большее число пор, чем более крупные молекулы, и потому они более длительное время будут находиться в колонке, чем более крупные молекулы, и, следовательно, более крупные молекулы будут вымываться из колонны первыми. Молекулы еще большего размера, которые не могут проникнуть даже в самые крупные поры используемого носителя, сразу проходят через колонку без разделения. Промежуток времени, за который молекула проходит через всю колонну, зависит от размера молекулы и ее массы. Поэтому если прокалибровать колонну по образцам с известной молекулярной массой, то с помощью гель-хроматографии можно определять молекулярную массу. [c.319]

Гель-хроматография. В препаративных целях, особенно при очистке белков от примесей, щироко используют метод молекулярных сит, или гель-хроматографию. При обработке эпихлоргидрином полисахарида дек-страна образуются различной степени выраженности поперечные связи, приводящие к формированию крупных гидрофильных зерен, нерастворимых в воде и называемых сефадексами. Благодаря большому сродству к воде зерна сильно набухают в водной среде с образованием геля, которым заполняют хроматографическую колонку. Разделение веществ этим методом основано на том, что большие молекулы не проникают во внутреннюю водную фазу геля, являющуюся стационарной, и остаются снаружи, двигаясь вместе с подвижной фазой вниз вдоль колонки небольшие молекулы, напротив, свободно диффундируют внутрь зерен, образуя равновесную систему между подвижной и стационарной фазами, и соответственно с меньшей скоростью двигаются вдоль колонки (рис. 1.5). Обычно момент появления веществ в вытекающем из колонки с сефадексом элюенте выражают формулой [c.30]

Ограничимся рассмотрением эксклюзионной, или гель-хроматографии. Этот процесс можно рассматривать как процесс сепарации раствора, при котором компоненты разделяются (фракционируются) в соответствии с размером молекул. В качестве сорбента, или, как его еще называют, молекулярного сита, используют пористые полимерные шарики. При прохождении молекул через слой сорбента в микропоры шариков проникают молекулы, размер которых меньше размера пор. Молекулы большего размера в поры не проникают. На рис. 6.12 схематично показан процесс сепарации молекул двух сортов, различающихся размерами [4]. [c.134]

Для объяснения процессов, происходящих в гранулах геля, был предложен ряд гипотез подробно они будут рассмотрены в гл. 1И. Здесь же мы лишь констатируем следующее смесь веществ можно разделить по молекулярным весам на слое гранулированного геля соответствующей пористости. Не подлежит сомнению, что это хроматографический процесс, поскольку растворенные вещества проникают в неподвижную фазу, в результате чего смесь разделяется на компоненты. В настоящее время существует в основном лишь два способа подобрать термин для нового хроматографического метода для этого используют либо применяющийся носитель (например, хроматография на бумаге), либо процесс, который, как полагают, лежит в основе разделения (например, распределительная хроматография). В соответствии с этим метод разделения ионов на заряженном полимере можно назвать либо хроматографией на ионообменных смолах, либо ионообменной хроматографией. То же относится и к обсуждаемому здесь методу. В табл. 1 приведены все предложенные для него названия, каждое из которых имеет как преимущества, так и недостатки. [c.20]

Молекулярное сито — цеолит типа СаЛ — используют в газовой хроматографии для отделения более тяжелых нормальных углеводородов при некоторых температурах практически необратимо им адсорбирующихся от ароматических и разветвленных углеводородов, которые не проникают в поры цеолитов и поэтому свободно проходят через слой цеолита. Наприм ер, цеолит СаЛ применяют для промышленного отделения и определения нормальных углеводородов в бензиновых и керосиновых фракциях [2]. [c.116]

Хроматография на проницаемом геле позволяет разделить молекулы в соответствий с их размерами. Такой метод разделения осуществляется на хроматографической колонке, в которой в качестве неподвижной фазы использован набухший в растворителе полимерный гель с различными размерами пор степень проницаемости набухшего полимерного геля изменяется на много порядков. В процессе прохождения жидкой фазы, содержащей полимер, сквозь гель макромолекулы диффундируют внутрь тех частиц, которые не создают механических препятствий диффузии молекул. Меньшие молекулы проникают в гель более глубоКо и удерживаются в порах в течение более длительного времени по сравнению с более крупными молекулами, которые проходят через колонку быстрее.- Такой хроматограф калибруется по узкой фракции с известным молекулярным весом (молекулярный вес такой фракции определяется каким-либо абсолютным методом). [c.26]

В настоящее время появилось значительное число работ по разделению САВ с использованием гель-проникающей хроматографии (ГПХ), которая принципиально отличается от других хроматографических методов. Суть метода заключается в том, что при прохождении раствора исследуемого вещества через колонку, заполненную частицами твердого геля, происходит разделение молекул этого вещества за счет различной способности проникать в его поры. Поры частиц геля и молекулы вещества имеют различные размеры. Наиболее крупные молекулы не могут войти даже в самые большие поры, поэтому они двигаются между частицами геля и первыми выходят из колонки, другие молекулы настолько малы, что проникают во все поры геля, задерживаются в нем дольше всех и появляются на хроматограмме последними. Молекулы промежуточных размеров заходят только в поры определенной величины и продвигаются по колонке со средней скоростью. Для разделения смесей с широким диапазоном молекулярных масс используют набор гелей с разными размерами пор. Колонки, заполненные различными гелями, соединяют последовательно. [c.224]

Более подробное рассмотрение студней, возникающих при синтезе ионообменных смол, выходит за пределы задач настоящей книги. Мы кратко коснемся этого вопроса еще раз в связи с рассмотрением метода гель-проникаю-щей хроматографии, основанного на различии в проницаемости студней для молекул разного размера и позволяющего разделить полимер по молекулярному весу. [c.239]

Начало использования эксклюзионной или гель-проникающей, или гель-фильтрационной хроматографии относится по крайней мере к 1950 г. Наибольший успех наступил, когда начался промышленный выпуск гель-дек-страна—сефадекса. Эти гели позволили проводить разделение веществ в широком диапазоне молекулярных весов, однако при этом в качестве подвижной фазы ио-пользовали в основном воду или буферные водные растворы. При применении в качестве подвижной фазы водных растворов используют термин гель-фильтрационная хроматография, в то время как при применении неводных растворителей используют термин гель-проникаю-щая хроматография. В связи с тем, что в механизме этих разделений нет никакой разницы, было предложено употреблять один термин пространственная эксклюзионная хроматография. [c.86]

Разделение органических веществ и полимеров методом жидкостной ситовой хроматографии (ЖСХ) основано на различной способности молекул этих веществ проникать в матрицу геля или в поры молекулярных сит (пористых адсорбентов). Глубина проникновения молекул в основном зависит от их размеров и конформации. Большие макромолекулы, размер которых больше входных отверстий пор, вообще не способны проникнуть в поры, могут диффундировать лишь в зазоры между частицами пористого твердого тела и поэтому выходят из колонки раньше. Макромолекулы с размерами, меньшими входных отверстий пор, способны проникнуть в той или иной степени в эти поры. Непрерывно движущийся через колонку поток элюента снова вытесняет из объема пор эти макромолекулы [1—4]. [c.425]

Молекулярно-ситовая хроматография. При данном виде хроматографии используется способность материалов с контролируемой пористостью сортировать и разделять компоненты смеси в соответствии с размерами и формой их молекул. Для осуществления процесса гель-хроматографии используются гели поперечно-емкостного декстрана (сефадексы и сефакрилы), поперечно-сшитые полиакриламидные гранулы (биогели), агарозные гели с выраженными в них цепями акриламидного полимера (ультрагели) и более жесткие поперечно-сшитые агарозы (СЬ-агарозы и сефакрилы-8), с помощью которых можно быстро разделить макромолекулы в соответствии с их размером. Степень удерживания растворенного вещества на колонке зависит от его способности проникать в поры геля. Поэтому при гель-фильтрации сначала выходят высокомолекулярные вещества, а затем вешества в порядке убывания их моле- [c.55]

Проблема анализа распределения компонентов остатков по размерам приобрела большое значение сравнительно недавно и в основном связана с развитием процессов их каталитического гидрооблагораживашм. Возможность получать какие-то определенные результаты появилась после разработки метода гель-хроматографического разделения. Метод этот — гель-проникающая хроматография (ГПХ) — впервые нашел широкое применение в биохимии и химии полимеров [31]. При ГПХ разделение органических веществ осуществляется совсем на иных принципах, чем при других хроматографических методах. Принцип метода заключается в том, что во время прохождения раствора исследуемого вещества через колонку, заполненную частицами твердого геля, происходит разделение молекул этого вещества за счет различной способности их проникать в поры геля. Поры в частице геля имеют различный размер. Молекулы образца также различаются по величине. Некоторые молекулы слшиком велики, чтобы войти даже в самые крупные поры, и исключаются из частицы геля. Поэтому они двигаются через слой геля между его частицами и первыми выходят из колонки. Другие молекулы так малы, что входят во все поры геля, полностью проникая в частицу. Эти соединения задерживаются в наибольшей степени и появляются на хроматограмме последними. Молекулы промежуточных размеров могут входить только в некоторые поры и двигаются по колонке со средней скоростью. При разделении смеси с ширркой областью молекулярных масс используют набор гелей с разными пределами исключения. Это позволяет расширить область фракционирования колонки. Использование различных гелей дает эффект только при последовательном соединении колонок с разными гелями. При разделении соединений, мало различающихся по размеру, используют гели с узкой областью [c.36]

Разделение смеси веществ цроисходит в том случае, если размеры молекул этих веществ различны, а диаметр пор зерен геля постоянен и может пропускать лишь те молекулы, размеры -которых меньше диаметра отверстий пор геля. При фильтровании раствора анализируемой смеси более мелкие молекулы, проникая в поры геля, задерживаются в растворителе, содержащемся в этих порах, и движутся вдоль слоя геля медленнее, чем крупные молекулы, не способные проникнуть в поры. Таким образом, гель-хроматография позволяет разделять смесь веществ в зависимости от размеров и молекулярной массы частиц этих веществ. Этот метод разделения достаточно прост, быстр и, что самое главное, он позволяет разделять смеси веществ в более мягких условиях, чем другие хроматографические методы. [c.225]

Метод ситовой (эксклюзионной) хроматографии представляет собой один из вариантов жидкостной распределительной хроматофафии. Он основан на использовании в качестве НФ пористых веществ — так называемых молекулярных сит, размеры пор которых могут б)лть больше или меньше размеров частиц разделяемых компонентов. Частицы с размерами, меньшими размеров пор сорбента, проникают вместе с растворителем ПФ в эти поры и могут удерживаться в них, тогда как более крупные частицы не могут проникнуть в поры из-за своих размеров и уносятся с ПФ. Происходит разделение мелких и крупных частиц. Крупные частицы элюируются, таким образом, первыми. Б(Рлее мелкие частицы, попавшие в поры НФ, элюируются после крупных частиц. [c.283]

Гель-хроматография применяется, как уже указывалось, при обессиливании растворов (малые по размеру ионы солей проникаю в поры ге я и удерживаются там), для группового разделения высокомолекулярных и низкомолекулярных органических соединений (например, глицериде в жирных кислот с молекулярной массой около 200—500), в анализе биологических объектов (часто с использованием буферных систем с целью предотвратить разрушение ферментоп), для определения молекулярной массы белков (в том числе содержащихся в сыворотке К]ювп, в спинн( -мозговой жидкости), углеводородов и др)гих вещеста. [c.285]

Разновидностью метода фракционирования на колонке является гель-хроматография [86]. В качестве разделительного вещества применяют органические или неорганические вещества (например, силикагель) пористой структуры с размером пор, зависящим от плотности сшивок и условий получения. Для фракционирования полимеров, растворимых в воде, чаще всего применяют набухший в воде декстран с различной степенью сшивания (сефадекс). Для растворов полимеров в органических растворителях применяют сшитые полистиролы или сополимеры метилметакрилата с этилен-гликольдиметакрилатом. Образец полимера растворяют, заливают в колонку и элюируют, используя тот же самый растворитель. Небольшие молекулы полимера свободно диффундируют внутрь геля. Размеры некоторых молекул оказываются настолько большими, что им не удается проникнуть внутрь пор, в результате чего они первыми выходят из колонки при элюировании. Продолжительность элюирования фракций возрастает с уменьшением размера макромолекул. Существует критическое значение молекулярной массы, ниже которого макромолекулы полимера могут проникать в поры сетки и поэтому могут быть разделены. Молекулы большего размера уже не могут быть разделены, так как они не могут диффундировать в гель. Частота сетки геля и критическое значение молекулярной массы связаны между собой простой зависимостью чем чаще сетка, тем меньше критическое значение молекулярной массы. [c.83]

Пористость и внутренняя поверхность целлюлозы может быть определена при изучении проникновения (по типу гель-проника-ющей хроматографии) различных полимерных молекул Причем, если используют серию полимеров с увеличивающейся молекулярной массой (например, декстраны, полиэтиленгликоли), то может быть получено распределение пор по размерам Так, для хлопкового волокна подобные измерения показали, что примерно 75% общего объема пор (0,3 мл на 1 г сухого волокна) занимают поры диаметром 20 А Характерно, что в сухом хлопковом волокне общий объем пор меньще, чем во влажном Делигнифицирован-ная древесная целлюлоза имеет средний размер пор в 2-4 раза превыщаюцщй размер пор хлопковой целлюлозы [11] (специфика определения размера поверхности целлюлозы в случае ферментативного гидролиза будет обсуждена в разделе 1 2) [c.15]

Содержание стирола оценивали спектрометрически по поглощению в ультрафиолетовой области [7]. Микроструктуру бутадиеновых звеньев определяли методом ИКС [10]. Молекулярные веса определяли с помощью гель-проника-ющей хроматографии. В качестве растворителя использовали тетрагидрофуран. Поскольку независимая калибровка по данным рассеяния света была выполнена только для полибутадиена (образец F) и сополимера, полученного при соотношении стирола и бутадиена 25 75, молекулярные веса рассчитывали по универсальной калибровочной кривой, согласно методу, предложенному Бенуа с соавторами [2]. [c.84]

Таким образом, при проведении хроматографических экспериментов с макромолекулами на набухающих гелях следует учитывать весь комплекс сопутствующих явлений. Сюда входят степень совместимости полимера с гелем, возможность адсорбционного воздействия между ними, набухаемость как геля, так и макромолекул в условиях проведения опыта (характеризуемая константами д и 5(1,2) и РЯД менее общих, но существенных явлений, например таких, как гидратация геля в водных растворах или ассоциация макромолекул друг с другом и с молекулами растворителя. Поэтому интерпретацию данных хроматографического эксперимента следует проводить только при тщательном учете всех перечисленных факторов, влияющих на его результат. В частности, только при соблюдении условий истинной ГПХ можно пользоваться универсальной калибровкой хроматографа. В противном случае она будет разной для различных полимеров, растворителей и условий опыта. В качестве примера можно привести результаты, полученные [68] на полиакриломорфолиновых гелях (энзакрил К1 и К2) (рис. П1.30, 111.31). 1 ак видно, олигосахариды более активно проникают в гель, чем ПЭГ с той же молекулярной массой, а различная набухаемость геля в воде и хлороформе является одной из причин нарушения универсальной калибровки (см. также [87]). [c.129]

Эти виды эксклюзии еще не получили объяснения. Возможно, они связаны с тем фактом, что упомянутые гели содержат небольшое количество карбоксильных групп (см. стр. 49). По-видимому, можно считать, что при малой нагрузке геля. и элюировании дистиллированной водой отрицательно заряженные карбоксильные группы слегка отталкивают анионы низкомолекулярных соединений от фазы геля [43]. В результате для этих соединений, так же как и для высокомолекулярных, объем выхода равен свободному объему Уо- Этот эффект может существенно исказить результаты при работе с радиоактивными анионами, например с иодидами [58]. При определенных обстоятельствах наличие радиоактивности в свободном объеме Уо может ввести в заблуждение, поскольку ее можно принять за меченые макромолекулы. Однако наличие в элюенте других электролитов полностью нормализует объемы выхода [43, 58]. Хотя гуминовые кислоты имеют ароматическую природу, они совершенно не проникают в гель декстрана при элюировании дистиллированной водой если же использовать солесодержащие элюенты, то с помощью гель-хроматографии удается определить молекулярный вес этих соединений [59]. [c.131]

Неплохие результаты были иолуданы при выделении изопреноидных углеводородов с помощью гель-проникающей хроматографии [24, 29,35, 36]. На рис. 43 показана возможность выделения на сефадексе марки ЬН-20 фракции, содержащей до 90% изопреноидов С14—Сх . Однако при использовании сефадекса происходит обогащение первых фракций элюата изопреноидными углеводородами большого молекулярного веса, которые из-за более крупных размеров молекул в меньшей степени проникают в межпоровое пространство геля. Более подробно о методе гель-проникающей хроматографии см. [29]. [c.167]

Характеристика материала. ПММА представлял собой коммерческий материал, плексиглас RV 811, производимый фирмой Rohm and Haas Со. Этот полимер был специально выбран вследствие его широкого использования в качестве акрилового термопласта. Полимер анализировали методом гель-проника-ющей хроматографии. Молекулярные массы, определенные с помощью калибровки по полистиролу, указывают на то, что среднемассовая молекулярная масса составляет 1,5-105, [c.513]

Гель-проникающая хроматография [39] является разновидностью метода фракционирования на колонке, в которой разделение на фракции осуществляется по методу молекулярного сита, основанному на способности молекул проникать в поры адсорбента определенного размера. В качестве адсорбентов в данном методе используют материалы, не имеющие зарядов и ионогенных групп, обладающие точно заданным размером пор (см. гл. 18). Наилучшим образом этим требованиям удовлетворяют специально приготовленные сополимеры стирола с дивинилбензолом, которые при набухании образуют гели. Отсюда и название метода. Кроме того, применяют гели декстрана (сефадекс), разновидности силикагелей (сферосил) и др. [c.296]

Гельпроникающая, зксклюзионная хроматография не имеет практически полезных одноактных аналогов, так как распределение между фазами здесь зависит лишь от способности одних молекул и неспособности других молекул проникать в пористую структуру зерен сорбентов. При этом в классическом варианте не должно наблюдаться взаимодействия поглощенных веществ с пористым гранульным материалом или же оно должно быть весьма незначительным. Однако здесь следует указать на возможность использования ограниченной проницаемости зерен сорбентов для реализации методов молекулярных или ионитовых сит. Эти последние в отличие от гельнроникающей хроматографии характеризуются большой энергией взаимодействия веществ с зернами сорбентов. В условиях большой поглотительной способности здесь появляется возможность использования одноактных процессов для препаративного отделения поглощаемых малых молекул или ионов от молекул и ионов большого размера, не способных проникать в зерно сорбентов ограниченной пористости. Как будет показано далее, динамические методы, использующие принципы разделения на молекулярных или ионитовых ситах, подобно другим фронтальным методам, будучи в основном одноактными, включают ряд особенностей многоактных методов. [c.10]

Рассмотренный выше механизм гель-проникающей хроматографии, по-видимому, полностью подтверждается экспериментом. В большинстве случаев изменение скорости потока не влияет на элюирующий объем, что свидетельствует о весьма близком подходе системы к равновесным условиям. Следует также отметить, что нарисованная выше картина — весьма грубое приближение к действительности. На рис. 5-1 указаны молекулы растворенного вещества, которые, обладая весьма малыми размерами, могут диффундировать через все поры матрицы и даже в местах суя ения пор. В то же время среди молекул растворенного вещества имеются такие молекулы, большие размеры которых позволяют им проникать лишь в поры определенных размеров, находящиеся только на внешней оболочке гранул геля. Однако должны существовать молекулы с промежуточными размерами, которые могут проходить через узкие места в порах, хотя с гораздо меньшей скоростью вследствие взаимодействия со стенками каналов. Крейг [1986] убедительно показал, что скорости прохождения молекул растворенных веществ в процессе диффузии через мембраны, по обе стороны которых концентрации этих молекул различны, не слишком различаются, если поры мембран значительно больше, чем размеры диффундирующих молекул. Однако скорости диффузии оказываются чувствительной мерой молекулярных размеров для тех молекул, размеры которых лишь немногим меньше диаметра пор. Очевидно, по своей природе процессы дифференциальной диффузии и гель-проникающей хроматографии близки друг к другу. Скорость диффузии сферических частиц в гладких капиллярах при увеличивающемся отношении радиуса сферы к радиусу капилляра (а/г) определяется следующим соотношением [c.122]

Разделение масел. Нет общепринятой и обязательной схемы для анализа масел. В первом приближении эта схема включает определение гетероэлементов, инфракрасную спектроскопию, вязкость при двух температурах (вязкостно-температурную характеристику), температуру вспышки, анализ структурно-группового состава и содержание воды, эмульгируемость и вспенивае-мость. В зависимости от вида масла, наличия и концентрации присадок и т. д., масла разделяют методами разгонки, диализа, жидкостной хроматографии или комбинацией этих методов. Присадки, которые могут улетучиться, улавливают отдельно. Фракции масла анализируют с помощью ИК- или ЯМР-спектроскопии, газовой хроматографии или подвергают элементному анализу. Если присутствуют низкокипящие компоненты, их отгоняют, используя часть исследуемого образца и анализируют с помощью газовой хроматографии низкокипящие компоненты удаляют и в тех случаях, если они мешают диализу или хроматографии. Спектры присадок оценивают путем сравнения с имеющимися эталонными спектрами наиболее широко применяемых товарных присадок (атлас Садтлера). Молекулярно-массовое распределение полимеров может быть определено с помощью гель-проникаю-щей хроматографии (ГПХ) при высоком давлении. [c.237]

Фронтально-адсорбционное обогащение на цеолитах можно проводить, используя их молекулярно-ситовое действие [36]. Этот метод применен для концентрирования примесей в спиртах высшей очистки и других водочных продуктах [37—39]. Небольшие концентрации (менее 1-10" %) микропримесей в этаноле высшей очистки не могут быть определены без предварительного их обогащения. Для предварительного обогащения примесей здесь успешно может быть использована фронтальная жидкостная хроматография на колонне с цеолитом СаА. Принцип обогащения на цеолите основан на том, что основные примеси — альдегиды, кетоны, эфиры, амины, изосп-ирты, кислоты и другие соединения с нелинейными молекулами — не могут проникать в поры молекулярного сита и практически им не адсорбируются. При движении фронта жидкости вдоль хроматографической колонны, наполненной цеолитом СаА, неадсорбирующиеся из-за геометрических затруднений молекулы микропримесей продвигаются быстрее адсорбирующихся молекул, в частности воды, метанола и этанола, присутствующих в значительно больших концентрациях, чем микропримеси. Поэтому после прохождения через слой адсорбента определенного объема спирта высшей очистки из него будут извлечены практически полностью все микропримеси, которые концентрируются в самом начале фронта. Отобрав первые порции выходящей [c.191]

Нейтрализованные гумусовые кислоты растворяли в 2М растворе хлористого натрия и пробы, содержащие 3,33 мг/мл каждого образца, разделяли на колонке с сефадексом дистиллированной водой. Разделение проводили на колонках длиной 32 см (сефадекс G-25), 42 см (сефадекс G-50) и 52 см (сефадекс G-100), диаметр колонки во всех случаях равнялся 4,1 см [30]. Во всех случаях достигали разделения на две основные фракции а и б, окрашенные в коричневый цвет. На сефадексе G-25 выделяли третью фракцию, меньшую по размерам, желтовато-коричневого цвета. Фракции а и б после повторного разделения исходной пробы упаривали до 20—30 мл при температуре ниже 45 °С. Фракции подкисляли 0,2— 0,3 мл 5 н. раствора НС1, после чего проводили центрифугирование. Осадки отмывали дваз сды порциями по 10 мл 0,1 н. НС1. Гумусовые кислоты высушивали под вакуумом и хранили при, комнатной температуре. Пробы высушенных и измельченных гумусовых фракций растворяли в NaOH, растворы доводили до рН=7,0 и записывали спектры поглощения. Коэффициенты экстинкции рассчитывали для растворов с концентрацией 1,0 мг/мл и по ним получали информацию о молекулярной массе. Аналогичные исследования, в ходе которых в качестве элюента использовали растворы солей, проведены также в работах [35—38]. Хотя гель-проника-ющая хроматография на сефадексах и других типах гелей широко используется для фракционирования и характеристики сложных природных полимеров, необходима разработка более эффективных систем фракционирования гумусовых кислот, чтобы достаточно глубоко изучить свойства гумусовых кислот и фульвоколлоидов в почве. [c.279]

Теория и методология гель-хроматографии подробно обсуждается в ряде обзоров и книг Г1—9]. Этот метод позволяет разделять белки в соответствии с размерами их молекул. Первыми с колонки элюнруются самые большие молекулы, в то время как молекулы меньшего размера, способные диффундировать в поры матрицы, заполненные жидкой фазой, удерживаются на колонке. Размер пор матрицы геля определяет диапазон молекулярных масс макромолекул, способных проникать в частицы геля и выходить из них. Для фракционирования белков пригодны различные полиакриламидные, агарозные и декстрановые гели. [c.106]