Температура и денатурация белков

Интересно, что процесс денатурации белков, вызванный всеми перечисленными органическими веществами, не зависит от температуры и, для мочевины например, может иметь отрицательный температурный коэффициент. Этим они существенно отличаются от органических растворителей — таких, как, например, спирт или ацетон. Последние денатурируют и необратимо осаждают белок из растворов при комнатной и более высоких температурах. При критической температуре, лежащей около 65°, осаждение белка происходит при относительно невысоких концентрациях органических растворителей. Тем не менее, как уже указывалось в гл. I, нри температурах, близких к точке замерзания, можно производить фракционирование белков добавлением различных количеств растворителей, не вызывая их денатурации. Полагают, что осаждающее и денатурирующее [c.185]

При нагревании белков выше температур, присущих живым организмам, либо при их помещении в необычные кислотные или основные условия белки постепенно утрачивают характерную для них третичную или вторичную структуру. В этом случае белок теряет свою биологическую активность, и говорят, что он денатурируется. Если денатурация протекает при очень мягких условиях, она часто бывает обратимой, т.е. при возврате к нормальным условиям биологическая активность белка [c.449]

Понижение температуры стабилизирует белок потому, что ослабляется тепловое движение цепей в молекуле, уменьшается вероятность их расплавления и одновременного разрыва многих слабых связей. При низкой температуре понижается средняя энергия частиц белка, и активация их, необходимая для того чтобы произошло денатурационное превращение, становится менее возможной. Стабильность ферментов, как и других белков, обычно возрастает при низких температурах, но надо помнить, что существуют случаи, когда температурный коэффициент денатурации бывает отрицательным и стабильность таких белков, например при 0°С, оказывается меньшей, чем при комнатной температуре. Подобные исключения, впрочем, встречаются редко. [c.164]

При свертывании белки денатурируют и переходят в нерастворимое состояние. Механизм тепловой денатурации связан с перестройкой структуры белковой молекулы, в результате которой белок теряет свои нативные свойства и растворимость. Реакция денатурации протекает постепенно и ускоряется с повышением температуры поэтому слишком кратковременное нагревание может и не привести к свертыванию. [c.28]

Белок pH денатурации Температура денатурации Концентрация в тканях Время переваривания [c.71]

Для денатурации белка необходимо присутствие некоторого минимального количества воды. Безводный белок при нагреваиии не подвергается денатурации. Например, сухой альбумин выдерживает длительное нагревание в струе сухого воздуха при температуре 120° без заметного изменения растворимости его . [c.376]

Для денатурации белка необходимо присутствие некоторого минимального содержания воды. Безводный белок при нагревании не подвергается денатурации. Так, сухой альбумин выдерживает нагревание в струе сухого воздуха при температуре 393 К без заметного изменения его растворимости. [c.370]

Для получения растворимых денатурированных субъединиц апо-фермент глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы из дрожжей в концентрации 2,5—3,5 мг/мл инкубируют в течение 1 ч в 8 М растворе мочевины (за полнотой денатурации следят по изменению активности фермента). Полностью денатурированные субъединицы добавляют к суспензии иммобилизованных мономеров в 8-кратном избытке по отношению к связанному с сефарозой белку. Эту процедуру проводят трижды с 30-минутными интервалами между добавками при постоянном перемешивании и температуре 25° С. Несвязавшийся белок отмывают 0,1 М Ма-фосфатом. Определяют содержание белка и активность в препарате после реассоциации. [c.303]

Под влиянием повышенной температуры (для чистых белков начиная с 50—80°) происходит глубокое изменение структуры белка, коллоидный раствор разрушается, белок превращается в сгусток (свертывается) или в осадок и теряет способность снова переходить в раствор. Такой необратимый процесс резкого изменения свойств белка, связанный с изменением не только его физического состояния, но и химического строения, носит название денатурации и происходит не только при нагревании, но и при действии многих химических реагентов. Это свойство используется на практике, например, при выделении белков из растительного сырья нагреванием в кислой среде. [c.227]

Метод, с помощью которого можно вычислить изменение теплоты реакции по зависимости константы равновесия от температуры, хорошо иллюстрируется результатами опытов и расчетами Ансона и Мирского теплоты денатурации трипсина. Эти авторы нашли, что если раствор трипсина нагреть до 60°С в 0,05-н. кислоте, то трипсин превращается в белок, который полностью осаждается (насыщенным на 25%) раствором сульфата аммония. Когда нагретый раствор трипсина охлаждается, трипсин возвращается в первоначальную форму, которая не осаждается тем же раствором сульфата аммония. Условия равновесия между нативным и денатурированным трипсином изучены при ряде температур. Результаты этих опытов даны в табл. 8. [c.36]

Биологические функции белков тесно связаны с их пространственной структурой. Действительно, ферментативная активность, например, белка лизоцима определяется тем, что внутри него имеется полость, необходимая для захвата субстрата — полисахаридных оболочек бактерий. Если изменить внешние условия, свойственные живым клеткам, а именно повысить температуру или изменить кислотность среды, то белок денатурирует. Денатурация означает сохранение первичной структуры белка, но изменение его пространственного строения, т. е. конформации, и именно благодаря изменению конформации белок утрачивает свои биологические свойства в случае лизоцима форма белковой глобулы станет более беспорядочной и размеры полости не будут соответствовать размеру субстрата. [c.359]

Однако большинство белков не имеет нитевидного или фибриллярного строения. Ферменты, белковые гормоны и все белки крови, за исключением фибриногена, относятся к глобулярным белкам. Они растворимы в воде или солевых растворах, но эта характерная для них способность легко исчезает или ослабевает при относи- тельно небольшом повышении температуры (до 60°) или при небольшом увеличении кислотности. Такое изменение растворимости называется денатурацией . Изучение строения таких измененных белков показало, что они уже больше похожи на фибриллярные белки. При денатурации фермент или гормон обычно утрачиваются характерные для них биологические свойства. В некоторых случаях, если воздействие неблагоприятных условий было не слишком длительным, белку можно вернуть его первоначальные свойства путем восстановления нормальных условий. Тогда белок снова приобретает одновременно и свою характерную растворимость и свои отличительные биологические свойства. [c.73]

Сильнощелочные или сильнокислые среды также оказывают мощное воздействие на поведение белков. В этих условиях кислые или основные группы макромолекулы ионизируются в такой степени, что а-спираль переходит в разупорядоченный клубок. Этот процесс также называется денатурацией белка. Кроме того, денатурировать белок можно повышением температуры (вследствие интенсивных тепловых колебаний цепи спираль разрывается) или добавлением мочевины (ослабляется гидрофобное взаимодействие, поддерживающее упорядоченную структуру белка). Денатурированный белок утрачивает свои специфические функции (например, фермент становится неактивным), его растворимость в воде уменьшается и происходит коагуляция. [c.69]

Действие ферментов в существенной степени зависит от состава раствора, в том числе от кислотности среды. Для каждого фермента существует оптимальная температура, при которой он в наибольшей степени проявляет свою каталитическую активность (рис. 3.6). Вплоть до достижения этой температуры скорости ферментативных реакций возрастают в соответствии с уравнением Аррениуса. Причем числовое значение температурного коэффициента у для таких реакций может быть значительно большим, чем предсказываемое правилом Вант-Гоффа. Для большинства ферментов оптимальная температура находится в пределах от 40 до 50 °С. При более высоких температурах ферменты теряют свою активность, вследствие тепловой денатурации их белковая часть свертывается подобно тому, как свертывается при варке белок куриного яйца. [c.27]

Связи, образующие первичную структуру, очень прочны это обычные ковалентные амидные связи. Однако вторичная и третичная структуры обеспечиваются слабыми связями и устойчивы только в определенных условиях. Например, часто даже умеренное нагревание или изменение кислотности среды ведет к изменению белка растворимый в воде белок становится нерастворимым и свертывается (денатурация белков). Каждый из нас наблюдал это явление при варке яиц (повышение температуры) и скисании молока (изменение кислотности среды). [c.173]

Тепловая стабильность белков варьирует в широких пределах. Известно, что некоторые белки устойчивы по отношению к высоким температурам и даже к кипячению [14]. Результаты этих наблюдений иногда использовались для отделения при помощи тепловой денатурации стабильных белков от менее устойчивых [14, 15]. Такие методы, однако, следует применять с осторожностью, имея необходимые экспериментальные доказательства того, что выделенный белок после термической обработки остается неизмененным (см. стр. 77). [c.9]

Было найдено, что некоторые белки (например трипсин), которые могут противостоять нагреванию, повидимому, частично дезактивируются при температуре нагревания однако если нагретый белок охладить и обработать соответствующим образом [14], то он вновь приобретет активность и перейдет из денатурированного состояния в нативное. Все же, в связи с тем, что такая обратимая термическая денатурация происходит только при определенных условиях опыта и до сих пор была осуществлена лишь для небольшого числа белков [361], этот метод имеет ограниченное препаративное значение. [c.77]

Белковые вещества очень чувствительны к различным воздействиям и легко подвергаются сложным изменениям, что в значительной степени затрудняет их химическое исследование. Как все коллоиды, белковые вещества в определенных условиях свертываются (коагулируют), то есть их золи превращаются в гели. Коагуляция белков может быть необратимой и обратимой. Примером необратимой коагуляции может служить свертывание куриного белка под влиянием высокой температуры белок при этом переходит в нерастворимое в воде состояние и по устранении причины, вызвавшей коагуляцию, то есть по охлаждении, не может больше перейти в раствор при этом белок также теряет некоторые из своих первоначальных свойств — коагуляция сопровождается изменением молекулярной структуры белка. Такое изменение состояния и свойств белковых веществ получило название денатурации. [c.325]

Влияние тепла проявляется, как полагают, в сокращении протяженности этой структуры если повышение температуры оказывается недостаточным, чтобы нарушить конфигурацию полипептида, то после охлаждения может произойти восстановление первоначальной структуры. При снижении pH размеры льдоподобной оболочки в некоторых случаях увеличиваются [3861. Влияние электролитов и неэлектролитов зависит, вероятно, от того, в какой степени они способны вызвать переориентировку в льдоподобной оболочке. Мочевина, например, с ее выраженной способностью воздействовать на водородные связи может разрушать льдоподобную структуру водной оболочки белковых молекул. Некоторые ионы, наоборот, вероятно, способствуют стабилизации структуры и защищают белок от денатурации, вызываемой другими агентами [90]. Данных о том, как влияет на структуру оболочки само понижение гидратации, сравнительно мало. Известно, однако, что при недостатке влаги изменяется вязкость протоплазмы, и эти наблюдения позволяют предположить, что в диапазоне значений водного потенциала, обычном для завядающих растений, т. е. примерно от —50 до —10 бар (что в общем соответствует активности воды от 0,96 до 0,99), могут происходить заметные изменения структуры. [c.302]

Определение температуры максимальной активности ферментов также указывает на их повышенную термостабильность, а потеря всей или большей части активности в результате превышения этой температуры на 10—15°С согласуется с представлением о денатурации белка. Однако все эти наблюдения пе обязательно отражают термостабильность, присущую самому ферменту, так как субстраты и другие компоненты анализируемой пробы могут оказывать на белок стабилизирующее действие. [c.260]

При необратимом осаждении происходит глубокая денатурация белка, он теряет свойства гидрофильности и СТЙ1ЮВИТСЯ гидрофобным. Денатурированный белок неспособен к восстановлению своих первоначальных физико-химических и биологических свойств. Необратимое осаждение вызывается высокой температурой, действием концентрированных минеральных и некоторых органических кислот, ионов тяжелых металлов, алкалоидных реактивов, детергентов, красителей. [c.19]

ФалджериДьюш [48] запатентовали сходный процесс того же типа для модифицирования гидролизатов белков сои, арахиса, хлопчатника, кукурузы, рапса и сезама. После термической денатурации белок в суспензии гидролизуется на 60—80 % при добавлении кислотных или основных эндопептидаз животного или растительного происхождения, таких, как пепсин, трипсин, химотрипсин, папаин, фицин, либо экзопептидаз микробиального происхождения. Затем происходит реакция с ангидридом янтарной кислоты при pH 7,0 и температуре ниже 15 °С в результате продукты гидролиза теряют запах и вкус даже в кислом растворе, и в таком виде они рекомендуются для приготовления напитков, таких, как лимонный и томатный сок, или газированных вод. [c.610]

Денатурация коллагена при нагревании с образованием желатины происходит при различных температурах, зависящих от того, из какой ткани получен этот белок. Коллаген, полученный из тканей животных, живущих в среде с низкой температурой, обычно имеет низкую температуру денатурации. Одно время температуру денатурации коллагена связывали с содержанием ок-сипролина, считая, что ОН-группы этой аминокислоты каким-то образом (возможно, за счет водородных связей) стабилизируют структуру белка. Исследования последних лет указывают на то, что температура денатурации коллагенов более точно коррелирует с суммарным содержанием в них пирролидиновых остатков [c.249]

AO" = 60,7 кДж. 18.32. Процесс денатурации является эндотермическим, следовательно, АН положительно. Изменение энтропии в этом процессе тоже положительно, поскольку денатурированный белок обладает меньщей регулярностью и упорядоченностью, чем исходный. Поэтому ДО имеет положительное значение при низких температурах, но становится отрицательным по мере повышения температуры. 18.34. Энтропия чистого кристаллического вещества при О К, согласно определению, равна нулю. При повышении температуры энергия, которую система получает от окружающей среды, распределяется по различным формам энергии, доступным системе. Энтропия является мерой степени хаотичности распределения этой энергии по различным энергетическим состояниям. Эта мера всегда положительна по отношению к исходному состоянию (О К), относительно которого ведется отсчет. 18.35. а) В перемешанной колоде карт б) у игрушек, разбросанных по комнате в) у деталей разобранного приемника. 18.37. а) Этот процесс протекает самопроизвольно с образованием насыщенного раствора Mg l2- При [Mg lj = 6 М выполняется условие ДО = О и достигается равновесие. б) Самопроизвольной является обратная реакция, в) Реакция протекает самопроизвольно. 18.40. а) АН положительно, AS положительно ДО = 0 б) АН положительно, AS положительно, ЛО отрицательно в) АН положительно, AS положительно, ДО положительно. [c.475]

Растворимый в клеточном соке белок представлен главным образом глобулином, называемым туберином (от tuberosum). Изо-электрическая точка белка находится при pH 4,4. Необратимая коагуляция (денатурация) наступает при температуре 60°С. Кроме туберина в небольших количествах присутствуют альбумины и протеозы. [c.14]

Групповое разделение белков. Высаливание — разделение белков на фракции по их растворимости. Принцип метода заключается в дегидратации белков (обычно с помощью сернокислого аммония) при pH, близком к Р1. Различные белки выпадают в осадок при разных концентрациях соли. Это грубый метод разделения на группы. Например, глобулины выпадают в осадок при полунасыщении, а альбумины — при полном насыщении (НН4)2804. Избирательная денатурация — это выпадение в осадок при нагревании раствора до 50 °С или при подкислении среды до pH 5,0. Если выделяемый белок устойчив к нагреванию и изменению pH, то часть ненужных белков можно удалить таким простым способом. Органические растворители при низких температурах используются для щадящего группового разделения белков. По методу Кона белки плазмы крови фракционируют спиртом при температуре 3—5 °С альбумины — спирт 40%, pH 4,8, при 1-5 °С р, у-глобулины — спирт 25%, pH 6,9, при 1-5 °С а-глобулины — спирт 18%, pH 5,2, при 1-5 °С фибриноген — спирт 8%, pH 7,2, при 1-3 °С а2-глобулин — спирт 40 , pH 5,8, при 1—3 °С. Диализ — освобождение белковых растворов от низкомолекулярных соединений (например, от сернокислого аммония (NH4)2S04). Белки не проходят через полупроницаемую мембрану, а низкомолекулярные вещества проходят, что и позволяет очистить раствор белков от низкомолекулярных примесей. Получаем группу (смесь) белков, обладающих близкими физико-химически-ми свойствами. [c.50]

УФ-светом, рентгеновскими лучами, сильное механическое воздействие, давление, ультразвук - приводят к разрушению связей, обеспечиваюшлх сохранение четвертичной, третичной и даже вторичной структур, и, следовательно, к разрушению уникальной нативной (созданной природой) структуры белка. Этот процесс носит название денатурации белка. Нарушение нативной конформации белка может быть обратимым (если изменение структуры легко устранимо и нативная структура восстанавливается легко) и необратимым (особенно выражено при повышении температуры, лучевом воздействии, обработках сильными кислотами и щелочами). Денатурация белка сопровождается снижением гидрофильности белковых молекул, уменьшением стабильности растворов белка в изоэлектриче-ской точке, повышением реакционной способности таких функциональных групп молекулы, как -8Н, -КНо, -С6Н4ОН, -СООН и др. Большинство белковых молекул проявляют специфическую функциональную активность только в узком интервале значений pH и температуры (физиологические значения). В результате изменений указанных параметров белок теряет активность из-за денатурации. Денатурированные белки существуют в виде случайных хаотических петель и клубков, форма которых подвержена изменениям. [c.72]

С повышением темпердтуры падает вязкость подвижной фазы, а следовательно, и гидродинамическое сопротивление столбика сорбента соответственно сокращается время достижения равновесия. Теоретически верхним пределом температуры в колонке служит та величина, при которой наступает тепловая денатурация белков. На практике приходится работать при более низкой температуре, в особенности при наличии в исследуемой смеси протеаз и других гидролаз. В ряде случаев, в частности при обработке тканевых экстрактов, рекомендуется работать при температуре близкой или ниже О °С и в буфере, содержащем несколько процентов изопропанола. В этом нет необходимости, если рн среды не совпадает с оптимальной областью действия гидролаз, или в среде присутствуют ингибиторы протеаз, или выделение ведут в присутствие денатурирующих агентов, таких, как солянокислый гуанидин или мочевина, наконец, когда исследуемый белок отделяют с помощью специфического сорбента (например, при аффинной хроматографии) [1]. [c.422]

Этот процесс хорошо всем знаком, поскольку он происходит при варке яиц. Яичный белок, содержащий альбумин, при нагревании свертывается (коагулирует), превращаясь в упругую белую массу. Свернувшийся таким образом яичный белок после охлаждения оказывается нерастворимым, и из него уже невозможно получить исходный прозрачный раствор. Нагревание яичного альбумина приводит к изменениям, носящим, по-видимому, необратимый характер. Такое же явление наблюдается при нагревании практически бсех глобулярных белков независимо от размеров их молекул и биологической функвд1и, хотя температура, при которой осуществляется этот процесс, неодинакова у разных белков. Изме-нения лроисходящие с белками при нагревании, в совокупности называются денатурацией. Белки в-их естественном состоянии носят название нативных белков, а после денатурации-денатурмро-ванных белков., [c.159]

Поскольку в ковалентном остове полипептидной цепи все связи одинарные, можно было бы ожидать, что полипептид способен принимать в пространстве бесконечное число конформаций. Более того, естественно было бы предположить, что конформация полипептида претерпевает постоянные изменения вследствие теплового движения и беспорядочного вращения участков цепи вокруг каждой из одинарных связей ковалентного остова. Поэтому может показаться парадоксальным тот факт, что полипептидная цепь нативного белка в нормальных биологических условиях-при обьиной температуре и нейтральных значениях pH-имеет только одну или очень небольшое число конформаций. Эта нативная конформация достаточно устойчива если вьщеление белка вести осторожно, избегая воздействий, приводящих к развертыванию цепей и денатурации, то выделенный белок может полностью сохранить свою биологическую активность. Это свидетельствует о том, что вокруг одинарных связей полипептидного остова в нативных белках свободное вращение невозможно. И мы скоро убедимся, что это действительно так. Но сначала мы вкратце ознакомимся с биологией (сератмнов-фибриллярных белков, структура которых дала ключ к изучению конформации белков. [c.167]

Прн действии на белок сильных кь слот и щелочей, высоких температур и некоторых других воздействиях они денатурируют. Денатурация белка хорошо знакомый процесс, который ьюжно, например, наблюдать при варке куриного япца. Прн денатурации [c.265]

Вопрос о денатурации ингибитора трипсина был рассмотрен столь детально потому, что эта денатурация представляет собой первый и до сих пор единственный пример почти полностью обратимой денатурации белка. Для большинства других белков мы пока еще не в состоянии определить ни скорости восстановления, ни постоянной равновесия (/С). Мы должны довольствоваться поэтому определением к[ — постоянной скорости денатурации. При определении к для двух различных температур мы можем вычислить Е из уравнения (8), Н] —из уравнения (9), Р — из уравнения (12) и 5 — из уравнения (13). Величины для теплот активации реакции нативный белок денатурированный белок , вычисленные этим путем, имеют тот же порядок, что и величины Нх, найденные Кунитцом [188]. Они колеблются для [c.164]

Выше было уже упомянуто об образовании слабо растворимых солей (например, хлоридов и сульфатов) белковых катионов з кислой по отношению к изоэлектрической точке области [195, 202] и об использовании этого явления, например, для выделёнйя кристаллического сульфата альбумина плазмы [106]. Было получено также несколько кристаллических солей лизоцима [204]. Белковые соли, содержащие тяжелые комплексные анионы, например воль-фрамат-, фосфовольфрамат-, трихлорацетат- или метафосфатионы, а также соли, содержащие катионы тяжелых металлов — цинка, меди или ртути, — известны уже давно и применялись для освобождения раствора от белков перед некоторыми анализами [10, 78]. Предполагалось, что эти реагенты при их применений действуют на белки сильно денатурирующим образом. Вслед з-а кристаллизацией цинковой соли инсулина [205, 206] и метафос-фата яичного альбумина [207] недавно последовало приготовление серии кристаллических производных инсулина [208] и сывороточных альбуминов человека [209, 210]. Последние были получены в присутствии ионов, концентрация которых была недостаточна для высаливания (если не добавлять в количестве 5—30% органического растворителя и во избежание денатурации не вести процесс при низких температурах). В этих условиях многие из указанных солей менее растворимы, чем свободный белок или соли с такими катионами, как натрий или калий, и, следовательно, могут найти применение при выделении белков [51] (4). Были получены также кристаллические додецилсульфатпроизводные Р-лактоглобулина [211]. [c.51]

Наиболее благоприятные условия для проявления специфичности и предотвращения денатурации определяются стехиометри-чеоким уравнением. Определение этих условий основано на литературных данных и мнениях ряда авторов обзорных статей. Однако выше уже подчеркивалось, что поведение какого-либо одного белка по отношению к определенному реагенту или к определенным условиям денатурации не обязательно совпадает с поведением другого белка. Как правило, наиболее благоприятными являются реакции, быстро протекающие при малых концентрациях реагентов и температурах от 0 до 25°. Низкие температуры в этом случае более предпочтительны вследствие того, что температурный коэффициент процесса денатурации белка гораздо выше, чем температурный коэффициент обычных химических реакций. Важность контроля рН подчеркивается условиями, приведенными в сносках к табл. 1 и указываемыми соответствующими уравнениями. Большинство реакций протекает в почти нейтральной области, что требует соответствующего буфе-рировакия реагирующей системы. В целом ряде приведенных ниже случаев специфичность групповых реагентов при изменении рН пропадает. Кроме того, в ряде случаев выделяющиеся низкомолекулярные продукты реакции могут катализировать новые реакции, денатурировать белок или иным образом влиять на не-забуференную систему. Продолжительность реакций варьирует от нескольких минут до нескольких дней. Если желательно полностью блокировать одну группу без изменения других, то для определения оптимальных условий необходимы предварительные опыты с каждым белком. Обычно нужные сведения получают, наблюдая за ходом реакции с помощью количественного анализа функциональных групп. [c.285]

Рис. 21.1 иллюстрирует типичное изменение физических свойств белков в процессе тепловой денатурации. На нем представлена зависимость коэффициента экстинкции при 287 нм от температуры для рибонуклеазы А. Этот белок с небольшой молекулярной массой (Л/ = 14 ООО) состоит из одной полипептидной цепи и содержит четыре внутрицепо-чечные дисульфидные связи (см. обсуждение в гл. 16). Приведены кривые для пяти значений pH в интервале между 1,1 и 3,2. При длине волны 287 нм коэффициент экстинкции весьма чувствителен к изменению окружения шести остатков тирозина (остатки триптофана отсутствуют) и во всех случаях резко изменяется в довольно узком диапазоне температур. До и после области перехода коэффициент экстинкции плавно меняется с ростом температуры. [c.210]

Тот факт, что термодинамические параметры резко меняются с изменением температуры, причем ДС° имеет максимум, приводит к интересному предположению, что белок может подвергаться не только тепловой, но и холодной денатурации. Рис. 21.3 иллюстрирует это положение для рибонуклеазы при тех же значениях pH, что и приведенные на рис. 21.1. [Для того чтобы подчеркнуть, что максимум ДС° соответствует минимуму свободной энергии нативной формы (относительно свободной энергии денатурированного состояния), вертикальная ось на рис. 21.3 проведена так, чтобы было видно постепенное увеличение ДС° (она становится все более положительной) по мере приближения к началу координат.] Точки на графике получены из экспериментальных данных, приведенных на рис. 21.1, а кривые рассчитаны для более широкого диапазона, чем тот, который можно охватить в экспер1 менте. Отметим, что при этих значениях pH свободная энергия стабилизации нативной формы составляет всего от О до 5 ккал моль при тем- [c.212]

Если антитела обладают высокой аффинностью к данному гаптену, то для их выделения используют комплекс сефарозы с другим, перекрестно-реагирующим гаптеном, обладающим меньшей аффинностью к данным антителам, и его же используют для элюции антител с сорбента. Избыток гаптена удаляют диализом, а гаптен, связанный с антителами, можно удалить денатурацией в 6М гуанидин-НС1 при температуре 4°С. Белок затем ренатури-руют диализом против растворов с убывающими концентрациями гуанидина-H l, а потом проводят диализ против ЗФР. Выход антител при денатурации — ренатурации в случае антител к диги-токсину колеблется в пределах от 73 до 94% ( urd et al., 1971). [c.71]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология