Специальные методы элюирования

Для анализа редких аминокислот из некоторых источников разработаны специальные условия элюирования. Системы, предназначенные для анализа аминокислот из животных тканей, приходится модифицировать при анализе аминокислот растительного происхождения, что связано с разным количественным и качественным составом экстрактов [44—46]. Разработаны также таблицы для идентификации компонентов, содержащихся в экстрактах из насекомых [47]. Для контрольных анализов изделий пищевой промышленности разработан специальный метод аминокислотного анализа гидролизатов пищевых продуктов и муки [48, 49], пива и солода [50]. Метод определения аминокислотного состава травы и силоса разработан с целью определения их кормовой ценности [51]. Для промышленных целей раз- [c.348]

Так же как и в КЖХ, в ТСХ можно проводить ступенчатое элюирование двумя или несколькими растворителями, или с непрерывным градиентом состава растворителей. При ступенчатом элюировании перед каждым последующим нанесением новой системы растворителей пластинку обычно высушивают при 130 °С в течение 30 мин. Уникальным методом разделения, реализуемым только в ТСХ и БХ, является двумерное разделение, при котором вначале разделение проводят определенным элюентом в одном направлении, а затем системой растворителей другой полярности в направлении под углом 90° к первому. Специальные методы разделения описаны Э. Шталем в монографии [47]. [c.73]

СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ЭЛЮИРОВАНИЯ [c.115]

Для отделения лантаноидов друг от друга минералы обрабатывают различными кислотами (азотной, серной). Из полученных растворов специальными методами (фракционная кристаллизация, хроматография на смолах с последующим элюированием и пр.) выделяют последовательно соли отдельных лантаноидов. [c.70]

Величины процентного содержания фракций, определяемые денситометрией электрофореграмм, отличаются хорошей воспроизводимостью. Естественно, они в известной мере расходятся с данными свободного электрофореза или с данными, полученными методом элюирования. Эти расхождения заставляют некоторых исследователей вводить специальные поправки. Наша оценка этих поправок приведена на стр. 61. [c.65]

При препаративном фракционировании на колонках современное оборудование позволяет получить фракции с узким распределением по молекулярным весам в количестве 5—10 г каждая. Эти количества выделяемых фракций составляют верхний предел как при градиентном элюировании [33], так и при хроматографическом разделении [35]. При необходимости широких исследований физических свойств, механических характеристик или химической природы выделенных фракций часто приходится разрабатывать специальные методы исследований, которые возможно применять на малых количествах образцов, с тем чтобы сохранить ценные фракции полимеров. На практике возможность получения больших количеств фракций с узкими распределениями по молекулярным весам могла бы в значительной мере упростить многие исследования. Одна группа исследователей полагает, что для препаративного фракционирования можно применить соответствующим образом модифицированные методы химической технологии и успешное решение этой проблемы оказало бы значительное влияние на развитие исследований в области полимеров. [c.83]

В случае использования медленных реакций для увеличения степени превращения целесообразно, после поступления реагирующего компонента в реактор, отключать поток газа-носителя на время проведения реакции, а затем включить его снова для элюирования образовавшихся продуктов и нереагирующих компонентов. Если нельзя избежать расширения зоны анализируемых веществ после реактора, то необходимо применять специальные меры для их сжатия (например, конденсация в охлаждаемых ловушках с последующей быстрой тепловой десорбцией, сужение полос методом теплового поля и т. д.) В некоторых случаях (например, при проведении качественных цветных реакций [9]) размывание зон можно не учитывать. [c.52]

Промышленное значение производных сульфокислот, особенно сульфонатов, неизбежно приведет к разработке специальных сорбентов, силикагеля или ионитов, которые позволят полностью разделять даже изомеры. Хотя для разделения сульфокислот можно использовать многие иониты, сделаны попытки разделять эти соединения на специально приготовленном силикагеле [12а]. При разделении изомеров 1- и 2-нафталинсульфо-кислоты Б этих условиях были получены обнадеживающие результаты. Было показано, что качество разделения зависит от метода осаждения силикагеля, которое ведут в присутствии одного из компонентов разделяемой смеси. Однако форма кривых элюирования при этом оказывается неудовлетворительной наблюдается размывание зон и появление хвостов . [c.154]

Хроматографией. Поскольку показано, что скорость элюирования полимеров пропорциональна их молекулярному весу, можно решить обратную задачу — на основании объема выхода оценить молекулярный вес. Этот аналитический вариант гель-хроматографии нашел столь широкое применение, что его следует рассматривать отдельно под названием определение молекулярного веса. Наконец, существует еще один вариант метода, в котором различия в молекулярном весе имеют гораздо меньшее значение, чем взаимодействие разделяемых веществ с гелем он рассматривается в специальном разделе под названием разделение веществ с одинаковым молекулярным весом. [c.135]

Если разделяемые вещества образуют в колонке окрашенные зоны, то селективное элюирование облегчается. Это обстоятельства аналитику следует учитывать однако во многих случаях хорошие результаты получались и для неокрашенных растворов. При благоприятных обстоятельствах селективное элюирование можно применять к системам, содержащим несколько ионов. Как правило, в таких случаях производят ступенчатое разделение, применяя элюенты с последовательно возрастающей элюирующей способностью. Этот способ можно применять даже тогда, когда ионы, которые должны оставаться в колонке, на определенной стадии процесса несколько перемещаются. Необходимо подчеркнуть, что успех таких разделений в значительной мере зависит от условий проведения анализа. Если, например, применяются слишком большие количества элюента, то наряду с элюируемым ионом в элюате могут появиться и другие ионы. Кроме того, условия проведения анализа, конечно, зависят от применяемого ионита. Поэтому перед использованием той или иной методики, описанной в литературе, необходимо с помощью специальных опытов убедиться в ее пригодности в данных условиях. Если методы селективного элюирования применяются с достаточной осторожностью, то они оказываются очень полезными для серийных анализов в стандартных условиях. [c.207]

Хромато-спектральные методы. Наиболее распространена хромато-масс-спектроскопия [179, 184]. Давление на входе в ионный источник масс-спектрометра поддерживается обычно равным 10 —10 Па (10 —10 мм, рт. ст.), при этом с помощью специальных устройств (сепараторов) повышается концентрация анализируемых веществ в выходящем из колонки (обычно капиллярной) элюате. Современная аппаратура обеспечивает получение полной развертки масс-спектров за время, существенно меньшее продолжительности элюирования хроматографической зоны (порядка секунд и даже долей секунды), благодаря чему может быть проведена идентификация веществ в случае их неполного разделения в колонке. Предложено также непрерывно регистрировать интенсивность трех фиксированных линий масс-спектров отношение этих величин для каждого из компонентов анализируемой смеси является основой для их идентификации. [c.194]

В рассмотренных выше многоступенчатых приборах колонки как при последовательном, так и при параллельном соединении располагаются одна за другой. При параллельном соединении колонки работают одновременно, но независимо друг от друга, иначе говоря, параллельное соединение двух колонок при определенных условиях допускает раздельное исследование фракций смеси. Однако в принципе можно провести хроматографирование всей пробы одновременно и в одинаковых условиях с этой целью введенную дозатором пробу пропускают через специальный тройник, откуда она поступает одновременно в обе колонки. Обнаружение разделенных компонентов проводят одним детектором (рис. 1У.53) [256]. Недостаток такого соединения колонок состоит в том, что вследствие различной скорости элюирования каждого компонента в различных колонках они часто регистрируются детектором дважды, что вызывает перекрывание пиков. Поэтому метод одновременного разделения проб в двух колонках с одним детектором применим только для проб с относительно небольшим числом компонентов. [c.286]

В соответствии с высказанной ранее формулировкой количественный газохроматографический анализ может быть определен как метод, заключающийся в разделении на газохроматографической колонке ге-компонентной смеси с образованием п бинарных смесей анализируемых веществ с газом-носителем и в определении ( в режиме реального времени) анализируемых веществ в этих смесях при помощи специального анализатора - газохроматографического детектора. Смеси получаются в виде индивидуальных хроматографических зон. Благодаря природе хроматографического процесса мгновенная концентрация анализируемого вещества в выходящем из колонки потоке изменяется во времени при элюировании хроматографической зоны, и эта зависимость должна тщательно фиксироваться детектором. Величина сигнала от хроматографической зоны независимо от того, выражается она в аналоговой или цифровой форме, пропорциональна концентрации или массе анализируемого вещества в зоне. [c.10]

На практике применяют различные виды элюирования восходящее, нисходящее, горизонтальное, круговое (центрифужное). При нисходящем хроматографировании следует тщательно уложить край бумаги в лоток и прижать ее тяжелой стеклянной палочкой или узкой пластинкой, чтобы бумага не могла соскользнуть в процессе элюирования. Во время работы не следует касаться бумаги пальцами, особенно если хроматографируются аминокислоты. Закрепленную в лотке полоску или лист бумаги помещают на подставку внутри камеры, закрывают камеру крышкой и выдерживают в атмосфере паров неподвижной фазы в течение определенного времени — от 5 мин до 16 ч, т. е. до следующего дня. При работе с сильно летучими растворителями типа растворителей Буша (см. разд. 3.5.6 Стероиды и терпеноиды ) бумагу следует выдерживать над неподвижной фазой не менее 3 ч, а лучше до следующего дня, если неподвижная фаза не наносилась на бумагу посредством одного из указанных выше методов. По окончании выдержки наливают в лоток подвижную фазу и дают ей передвигаться в бумаге под действием капиллярных сил почти до самого края. После этого осторожно вынимают хроматограмму из камеры, сразу же отмечают положение фронта растворителя и дают листку высохнуть. При работе с большими листами удобно пользоваться специальными широкими щипцами. [c.92]

Если все компоненты образца сорбируются на начальном участке колонки, откуда их затем десорбируют методом ступенчатого или градиентного элюирования, то в колонку можно вводить довольно разбавленную пробу, т. е. довольно большого объема. Пробу просто заливают или закачивают в колонку, после чего через нее пропускают первый элюент. Если же нельзя твердо сказать, что ни один компонент пробы не выйдет из колонки в процессе ввода пробы, то используют более концентрированную пробу (меньшего объема), которую вводят на слой или под слой элюента. Первая методика не требует специального оборудования, а вторую методику можно применять лишь при условии, что плотность раствора пробы заметно выше плотности элюента и раствор быстро оседает на дно слоя элюента. [c.277]

Принцип. Метод основан на разделении извлеченных из воды красителей в тонком слое алюминия в процессе капиллярного поднятия спирто-водного раствора. Количественно красители определяют колориметрически после элюирования с соответствующих хроматографических зон специально подобранной системой растворителей. [c.115]

КИМ образом, избежать загрязнения элюатов. Хроматографирование проводят в специальных резервуарах, в которых слои расположены не наклонно, а вертикально, чтобы обеспечить равномерное элюирование по сечению слоя в таких резервуарах объем парового пространства меньше, чем в резервуарах обычного типа. На рис. 10.7 и 10.8 показано разделение некоторых красителей описанным методом. [c.325]

На рис. 9.6 доказана выпускаемая фирмой Phaгma ia камера для нисходящего хроматографирования [2], предназначенная для тонкослойной гель-хроматографии. Для горизонтального элюирования ири различных, но точно устанавливаемых условиях предварительного насыщения слоя сорбента можно использовать К5-жамеры (рис. 9.7). Оптимальные условия разделения в этих камерах можно быстро установить. Другие типы камер, используемые для специальных методов, например проточного (непрерывного) элюирования, градиентного элюирования или круговой хроматографии, описаны в монографиях по ТСХ ([2Э, [c.95]

Основной характеристикой гетерогенной системы сорбент— элюент, определяемой с помош,ью газовой хроматографии, является коэффициент распределения сорбата между фазами Г, простейшим образом связанный с FJ [см. соотношение (1.23)]. На основании известных термодинамических соотношений [3], зная Г, можно рассчитать термодинамические характеристики процесса сорбции изменения парциальной дифференциальной мольной свободной энергии энтальпии ДЯ и энтропии Используя специальные методы газовой хроматографии — дифференциальную хроматографию [79], известную также как метод возмущений [80], вакантохроматографию [81], а также хроматографию с использованием радиоактивных изотопов, можно изучать растворимость элюента в неподвижной жидкости [24, 25], выраженную в виде коэффициента распределения. Все указанные выше характеристики зависят от свойств обеих фаз хроматографической системы и условий проведения процесса элюирования сорбата и, следовательно, описывают гетерогенную систему в целом. Поскольку хроматографический процесс может считаться равновесным, постольку эти характеристики могут иметь ценность при изучении любых гетерогенных систем, которые могут быть имитированы с помощью газохроматографического эксперимента. В частности, Кобаяши и сотр. [25] изучали фазовые равновесия в абсорбере легких углеводородов. [c.38]

Самым эффективным из современных методов исследования состава слоншых смесей и структуры присутствующих в них компонентов можно считать хроматомасс-снектрометрию, сочетающую огромную разделительную способность газовой хроматографии с высокой чувствительностью и идентификационной мощью масс-снектрометрии (метод ГХ — МС). Для создания этого метода потребовалось решить две главные технические задачи разработать быстродействующие масс-спектрометры с очень большой скоростью развертки спектров (за время, меньшее времени элюирования любого соединения из ГХ колонки) и специальных сепарирующих устройств для концентрирования элюатов. Современные масс-спектрометры позволяют получить спектр вещества в интервале массовых чисел 50—500 за время, меньшее 1 с, при разрешении т/Ът= 500 и более [328, 329]. Отделение большей части (80— 90%) газа-носителя от элюирующихся органических соединений, необходимое для поддержания в масс-спектрометре низких остаточных давлений, возможно с помощью молекулярных сепараторов различных типов струйных [330, 331], эффузионных с тонконорис-тыми стеклянными трубками [332] или металлическими мембранами [333, 334], сепараторов с полупроницаемыми полимерными мембранами (тефлоновой [335], силиконовой [336]) и др. [c.40]

Углеводородный состав этого образца нефти исследован адсорбционно-хроматографическим методом. Подобраны специальные условия хроматографического разделения тяжелой нафталанской нефти элюент — деаромати-зированный бензин с выкипаемостью 60-90°С соотношение нефть бензин = 1 3, нефть силикагель = 1 10 градиент элюирования 5-25% бензола в бензине и спирто-бензол. Установлено, что в нефти содержится 55% нафтеновых углеводородов 9% — легких, 11,7% — средних, 10,1% — тяжелых ароматических углеводородов 14,2% — смолистых веществ. Состав смол бензольных (М = 796, Р4 = 1,0637 г/см ) — 3,8% ацетоновых (М = 656, = 1,0468 г/см ) — 6,6% спирто-бензольных (М = 700, = 1,0092 г/см ) — 4,3% [15]. [c.17]

В последнее время появилась возможность определять аминокислотный состав белков с помощью автоматических аминокислотных анализаторов. Когда в 1948 г. Мур и Стейн [551 в дополнение к классическим методам органической химии, а также манометрическому и бактериологическому анализу ввели ионообменную хроматографию, наступил поворотный момент в развитии химии аминокислот. В основу работы созданных сотрудниками Рокфеллеровского института современных автоматических аминокислотных анализаторов была положена ионообменная хроматография. Принцип работы этих приборов заключается в следующем. Исследуемый белок гидролизуют, затем гидролизат подвергают хроматографии на смоле типа дауэкс 50 х8 в Na-форме. Элюирование производят с помощью непрерывной подачи буферного раствора. Выходящий из колонки элюат попадает в пластмассовую ячейку особой формы, где он смешивается с раствором нингидрина. Подачу нингидрина осуществляет специальный насос, работающий синхронно с насосом, подающим буферный раствор на колонку. Затем смесь элюата с нингидрином проходит через тефлоновый капилляр, который погружен в кипящую баню. В этих условиях в растворах происходит нингидриновое окрашивание, интенсивность которого измеряется в проточной кювете спектрофотометрически. Поглощение света регистрируется самописцем. Применение сферических смол [80] позволило сократить время исследования одного образца примерно в четыре раза, а использование особых ячеек сделало вполне допустимыми для анализа очень малые количества исследуемого вещества — порядка 0,01—0,05 мкмоля [38]. Введение одноколоночной процедуры значительно упрощает метод [9, 29, 43, 60]. С помощью этой методики в одной и той же пробе можно определить кислые, нейтральные и основные аминокислоты, что не только экономит исследуемый материал, но и повышает точность и сокращает время исследования. Работая на стандартном аминокислотном анализаторе и пользуясь некоторыми модификациями известных методов, можно полностью закончить анализ одного вещества в течение 3 ч [91. [c.32]

Скорости подвижной фазы в традиционной колоночной жидкостной хроматографии обычно. цовольно низки по сравнению, например, со скоростями в газовой хроматографии, так как диффузия молекул разделяемых веществ в стационарной фазе жидкостной хроматографии происходит относительно медленно. Это связано с тем, что в традиционной жидкостной хроматографии стационарная фаза применяется в форме довольно крупных частиц относительно большого размера (примерно той же величины, что и в газовой хроматографии). Для того чтобы увеличить скорость диффузии молекул пробы в неподвижной фазе, в жидкостной хроматографии высокого разрешения применяются частицы очень малого размера. Малые размеры таких мелких частиц создают определенные затруднения для того чтобы продавить подвижную фазу через колонку, плотно заполненную очень мелкими частицами, требуется давление, намного превышающее атмосферное. Начиная с 1968 г. это направление хроматографии развивалось очень быстро. Для нагнетания подвижной жидкой фазы в колонки, заполненные очень мелкими частицами, применяются насосы, развивающие давление в сотни килограммов на квадратный сантиметр. Величина частиц современных адсорбентов составляет всего несколько микрометров. Разработаны специальные неподвижные фазы, имеющие непроницаемую для жидкости твердую сердцевину, что ограничивает диффузию органических соединений только поверхностным слоем адсорбента. Это облегчает элюирование разделяемых веществ. Обычно в жидкостной хроматографии высокого давления применяют детекторы, регистрирующие элюируемые из колонки вещества по изменению показателя преломления, по поглощению УФ-света и по возникновению флуоресценции. Это экспериментальное направление развивалось очень быстро, и сейчас этот высокоэффективный метод разделения стал доступен химикам-органикам. [c.447]

Наиболее быстрым методом разделения ДНФ-аминокислот является хроматография на смеси кремневой кислоты с цели-гом. По данным авторов этой работы, полный анализ может занять не более 2 ч [9]. Большинство коммерческих препаратов кремневой кислоты пригодны для работы без специальной обработки. Для получения удовлетворительной скорости элюирования сорбент смешивают с целитом в весовом соотношении 2 1, а затем отбирают фракцию менее 60 меш. Рекомендуется колонка размером 1—1,4x17 см. [c.365]

Однако наиболее важным и самым распространенным методом выделения и анализа ферментов является хроматография. Об этом можно судить по множеству публикаций и специальных обзоров, посвященных различным аспектам хроматографии ферментов. (См. обзор по колоночной хроматографии [20 и табл. 36.1.) В последние годы получили дальнейшее развитие новые высоко избиратетгьные методы выделения, такие, как аффинная хроматография [21—26 и гл. 7, 14], хроматография на гидроксиапатите [27 и гл. 35], хроматография на геле фосфата кальция [28 и гл. 35], гель-хроматография в градиенте детергента как метод очистки мембраносвязанных ферментов [29, 30], гель-проникающая хроматография [31 и гл. 5, 12], электрохроматог-рафические методы [11], ионообменная хроматография [32, 33 и гл. 6, 13], субетрат-специфичное элюирование [34]. [c.9]

Среди других исследований по сравнению различных методов определения МВР одних и тех же образцов полимеров отметим работы 130, 131 точки зрения проблемы моделирования полимеризационных процессов интерес представляет работа японских авторов которые поставили своей целью сравнить стандартные методы определения МВР, не внося в них никаких дополнений. Были выбраны методы хроматографии на колонке (осадительной хроматографии), элюирования из колонки, скоростной седиментации и гель-проникающей хроматографии. Объект исследования — образцы монодисперспого поли-а-метилстирола, полученные анионной полимеризацией и специально обработанные для сужения распределения, и их смеси. [c.340]

Рассмотрим в качестве примера разделение методом ЖХВД на силикагеле двух соединений с удовлетворительным коэффициентом емкости к и коэффициентом разделения а, близким к единице. На хроматограмме, полученной при элюировании 4%-ным раствором эфира, пики таких соединений недостаточно хорошо разделены. Поэтому следует улучшить а, меняя состав элюирующей системы. В такой ситуации всегда необходимо заменить наиболее полярный компонент, сохранив при этом элюирующую способность системы (выражаемую параметром е ). С этой целью целесообразно, например, определить, как влияет на а переход к системе с 4% этилацетата в пентане или 26% дихлорметана в пентане. Нельзя ожидать, что замена пентана, например, на гексан окажет существенное влияние на а. При длительном хроматографировании методом классической колоночной хроматографии или при повторном разделении методом ЖХВД с безводными растворителями или системами растворителей вода из колонки постепенно удаляется, что ухудшает хроматографические свойства колонки. Это явление особенно важно при работе с неполярными системами растворителей, когда эффективность колонки сильно зависит от содержания воды в адсорбенте и когда содержание воды убывает с возрастанием полярности элюирующих систем. Для сильнополярных растворителей этот эффект незначителен. Чтобы предотвратить его, можно или добавлять воду к растворителям или, что еще лучше, предварительно насыщать элюирующую систему водой в специальной колонке. [c.195]

Количественный анализ хроматограмм можно осуществлять после извлечения разделенных веществ из слоя сорбента различными физико-химическими методами. Для этого вещества отбирают вместе с сорбентом, затем извлекают его экстракцией. Обычно слой сорбента счищают с пластинки точно по контуру пятна и количественно переносят его в сосуд для экстракции. В полученном растворе вещество определяют одним из инструментальных методов, чаще всего спектрофотометрически. Существуют установки для автоматического отбора сорбента с пластинки (рис. 58, а) и специальные ячейки для элюирования (рис. 58, б). Принцип работы установки заключается в создании герметичной полости вокруг зоны анализируемого вещества и прокачивания через эту полость соответствующей системы растворителей, которые поступают непосредственно в детектирующее устройство (полярографическое, кондуктометриче-ское, кулонометрическое, потенциометрическое и т. д.). [c.126]

Для улучшения эффективности разделения некоторые авторы используют специальные приемы работы круговую ТСХ, многократное (повторное) элюирование, двумерное разделение, градиентные методы (с изменением разделительной способности слоя, элюирующего растворителя, температуры и т. д.). О них подробно говорится в упоминавшихся выше монографиях и руководствах по ТСХ. Здесь остановимся лишь на некоторых приемах, используемых в неорганической ТСХ. [c.19]

Регистрация тем или иным образом излучения компонентов, распределенных на хроматограмме, является высокочувствительным способом их обнаружения. Количественное измерение радиоактивных веществ, разделенных методом ТСХ, может быть выполнено несколькими способами 1) измерением активности проб после элюирования веществ с сорбента 2) сканированием полос или зон на хроматограммах с помощью специальной аппаратуры 3) радиоай-тографией 4) измерением радиоактивности с помощью жидких сцинтилляторов 5) флуорографией (сцинтилляционной автографией). [c.124]

Капельно-хроматографический метод Измайлова и Шрайбера [8] был фактически микровариантом круговой хроматографии на свободных слоях. Кроув 9] проводил полукруговое элюирование, а Мейнхард и Холл 66] — радиальное хроматографирование неорганических ионов на закрепленных слоях с применением специальной пипетки для подачи растворителя. Брайант [c.137]

В этом методе адсорбентом служит тонкозернистый (60 А) силикагель с очень узким распределением частиц по размерам. Такой силикагель обладает лучшими разделяющими и оптическими свойствами, чем обычные силикагели [72]. Однако на слоях адсорбента растворитель движется медленнее, поэтому, чтобы уменьшить длительность элюирования, обычно берут пластинки меньших размеров. Меньшая длина хроматограммы более чем компенсируется значительным улучшением разделения. Разделение по этому методу такл е ведут на меньших пробах, поскольку иначе пластинка перегружается если проба превышает 10 мкг, достигнуть разделения не удается. Чтобы диаметр наносимых пятен проб был минимальным (<2 мм), можно наносить пробы либо из шприца фирмы Hamilton емкостью 1 мкл с микрометрическим винтом, либо из специального платино-иридиевого капилляра (изготавливается фирмами Analte h и AMAG). В остальном в этом методе применимы все описанные ранее приемы ТСХ. При проведении количест- [c.156]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология