Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Ферменты определение кинетическими методами

    Кинетические методы применяют не только для определения неорганических катализаторов. Ими широко пользуются также для определения органических катализаторов, обычно называемых ферментами или энзимами. [c.37]

    ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА, основаны на использовании хим. р-ций с участием ферментов. О содержании определяемого компонента судят либо по кол-ву конечного продукта ферментативной р-ции, либо, чаще, по начальной скорости процесса, положенного в основу методики определения (см. Кинетические методы анализа). Для наблюдения за скоростью ферментативной р-ции применяют обычно инструментальные методы, чаще других - люминесцентные, спектрофотометрич., электрохимические. Достоинства Ф. м. а. высокая чувствительность, обусловленная активностью ферментов, природой индикаторных р-ций (с помощью к-рых определяют в-во) и способами детекции аналит. сигна- [c.78]


    Примером использования кинетических методов является определение глюкозы путем измерения скорости селективного окисления глюкозы в присутствии фермента глюкозооксидазы [c.668]

    В тех случаях, когда [Е]о не может быть измерена прямым методом, т. е. для неиндивидуальных ферментов с неизвестным молекулярным весом, возникает задача непрямого определения этой величины. Здесь с известным успехом могут быть применены кинетические методы, основанные, в частности, на анализе действия необратимых ингибиторов. [c.123]

    Результаты определения молекулярной активности, полученные Берри [100], по-видимому, не могут быть признаны достаточно точными по причинам, указанным выше (недостаточно высокая специфичность использованных ингибиторов и наличие в эритроцитах других белков, помимо ацетилхолинэстераз, которые могут реагировать с ингибиторами). Данные лаборатории Коэна [101, 102], полученные с отмытой стромой эритроцитов и предотвращением побочных реакций ингибитора, и наши данные [103] с очищенным препаратом растворимой ацетилхолинэстеразы эритроцитов, полученные кинетическим методом, наиболее близки. Это дает основание считать, что молекулярная активность ацетилхолинэстеразы эритроцитов при оптимальных условиях действия фермента состав- [c.168]

    Применение иммобилизованных ферментов, позволяющих проводить массовые химические анализы в отдельных пробах или в потоке (с многократным использованием одного и того же препарата фермента), в значительной степени снимает проблему высокой стоимости ферментных методов анализа и зачастую повышает точность аналитического метода. Существуют два общих подхода к аналитическому определению концентрации реагентов (субстратов) в исследуемой системе. В одном из них ферментативную реакцию доводят до полного израсходования определяемого вещества (или до установления в системе равновесия между исходными реагентами и продуктами реакции), регистрируя при этом изменение какого-либо подходящего физического или химического свойства системы, и по количеству образовавшегося продукта рассчитывают количество субстрата в исходном образце. Во втором подходе используют кинетические методы анализа для определения скорости появления продукта или исчезновения субстрата в ферментативной реакции и вычисление исходной концентрации субстрата по соответствующей калибровочной кривой. Этот метод применим также для определения концентрации эффекторов (ингибиторов или активаторов), присутствующих в реакционной системе. Оба данных подхода были реализованы на практике с применением иммобилизованных ферментов. [c.16]


    Все перечисленные в 2.1—2.3 механизмы ферментативных реакций основаны не только на теоретических уравнениях, но и на экспериментальном изучении этих реакций. Поэтому 2.4-2.5 посвящены специфическим методам изучения ферментативных реакций. Специфика данных методов заключается в потенциальной возможности определения числа промежуточных соединений в механизме ферментативного катализа. В 2.4 приведены нестационарные методы ферментной кинетики. Показано, что методы нестационарной кинетики позволяют определить число промежуточных соединений в ферментом катализе. В данном параграфе также описаны методы определения кинетических параметров ферментативных реакций с помощью нестационарной кинетики. В 2.5 освещены методы релаксационной кинетики, имеющие большое значение в изучении, в частности, механизмов химических реакций. Релаксационные методы основаны на изучении закономерностей протекания ферментативных реакций после быстрого выведения этих реакций из состояния равновесия. [c.332]

    Для определения молекулярной активности ацетилхолинэстеразы эритроцитов были применены те же методы, что и для фермента сыворотки крови. По нашим кинетическим измерениям, Vм ацетилхолинэстеразы бычьих эритроцитов (pH 7,0 температура 40°) составляет 3,4-10 минГ . Данные других авторов приведены в табл. 17. [c.168]

    Выше несколько раз отмечалось, что кинетическая информация может быть обесценена, если неизвестно, какой субстрат присоединяется к ферменту первым. Чтобы выяснить это, можно использовать два способа изучение ингибирования продуктом реакции и изучение кинетики реакции со смесью субстратов. Суть первого метода иллюстрирует схемы, приведенные на фиг. 17 и 18 они показывают, что как в случае механизма с замещением фермента, так и в случае упорядоченного механизма с образованием тройного комплекса только первый субстрат и последний продукт реакции конкурируют друг с другом. Далее, только в случае механизма с замещением фермента, когда субстраты реагируют с ферментом в районе одного активного центра, первый продукт должен конкурировать с каким-либо субстратом, в данном случае (фиг. 17) со вторым субстратом. По этим соображениям определение начальной скорости процесса в присутствии каждого из продуктов реакций должно быть весьма полезным Ч При планировании таких экспериментов и их интерпретации должны быть получены ответы на следующие три вопроса  [c.142]

    Во второй части книги мы рассмотрели методы, с помощью которых можно выяснить формально-кинетический механизм ферментативной реакции, а в гл.Х и XI — методы, позволяющие установить число и тип кинетически значимых промежуточных соединений. Такого рода исследования позволяют оценить некоторые константы скорости и константы равновесия при определенных условиях реакции. Дальнейшая задача состоит в том, чтобы использовать эти данные для выявления тех особых химических свойств фермента, которые проявляются на каждой индивидуальной стадии процесса. Один из самых главных вопросов, который может быть исследован экспериментально, касается качественной оценки вызываемых ферментом изменений распределения электронов в молекуле субстрата. [c.191]

    При любом структурном анализе методом ступенчатой деградации центральной проблемой является синхронность каждой стадии. В гл. 5 было показано, что в ходе ступенчатой энзиматической деградации в оптимальных кинетических условиях определение даже небольшого числа мономерных звеньев высокомолекулярной РНК требует очень тщательного контроля экспериментальных операций. Реальные кинетические параметры, по-видимому, лимитируют создание и поддержание четкой синхронности отщепления каждого основания в огромных популяциях реагирующих ферментов и субстратов. [c.114]

    Для карбоксипептидазы А (КПА) из поджелудочной железы быка известны и трехмерная структура [1—3], и полная аминокислотная последовательность [4]. Роль существенно важного металла установлена менее определенно, но она доступна изучению с помощью разнообразных спектроскопических [5, 6] и кинетических [7, 8] методов. Следовательно, этот фермент можно включить во все увеличивающийся список белков, для которых возможно провести корреляции структуры и функции. Любой предлагаемый механизм катализа под действием КПА должен теперь учитывать как накопленные химические данные, так и взаимодействия, наблюдавшиеся при структурном исследовании кристаллов комплекса карбоксипептидазы с модельным субстратом глицил-ь-тирозином [3, 9]. [c.504]

    Кинетические эффекты такого рода наблюдали в некоторых химических реакциях, и они привлекли внимание как метод определения природы скорость определяющей стадии в реакциях катализируемых ферментами. Взаимосвязь вторичных и первичных изотопных эффектов будет описана в разд. Г,5. [c.204]


    ЭТи кинетические исследования внесли определенную ясность в понимание последовательности элементарных стадий катализа. Однако многие решающие вопросы остались без ответа, например вопрос о локализации активного центра фермента и идентификации групп, участвующих в катализе. Для получения такого типа информации необходимо использовать другие методы. [c.73]

    В гл. 4 вводится новая система координат, основанная на степенном преобразовании переменных. И хотя многие ранее применяющиеся координаты также являются частным случаем степенного преобразования, исследование системы преобразования в общем виде оказалось полезным для разработки нового метода определения степенных параметров уравнения скорости. Применение этого метода показано на примере Ыа, К-АТФазы в гл. 5 и 6. Авторы максимально сократили количество специальных экспериментальных данных по Ыа, К-АТФазе и привели только материал, необходимый для иллюстрации логики построения кинетической схемы работы фермента. Насколько это удалось — судить читателю. Авторы надеются, что недостатки изложения не помешают получить представление о возможностях ферментативной кинетики в расшифровке механизма действия мембранных транспортных ферментов, и заранее благодарны за все критические замечания и пожелания. [c.6]

    Кинетические закономерности пероксидазного окисления АК в стационарных условиях практически не исследованы. Предложен калориметрический метод определения пероксидазного окисления АК. Обнаружено изменение стехиометрии реакции между АК и пероксидом водорода в зависимости от условий протекания пероксидазного процесса. Показано, что АК в пероксидазном процессе окисляется пероксидом водорода в стехиометрическом соотношении 1 1 при pH 5,0 и 1 2 при pH 7,4. Отмечено, что при pH 7,4 кинетика утилизации H Oj при пероксидазном окислении АК имеет аномальный по сравнению с другими субстратами характер, что связано, по-видимому, с модификацией фермента в процессе реакции [Титов и др., 1992]. Однако более подробного исследования кинетических особенностей реакции не проводилось. Поэтому нами изучена кинетика реакций пероксидазного окисления аскорбиновой кислоты, катализируемое пероксидазой хрена [Рогожин, Верхотуров, 1997]. [c.54]

    Широкое примеиеиие химических катализаторов в кинетических методах в настоящее время, приведшее к их значительному развитию, основано на том, что скорость каталитической реакции прямо пропорциональна концентрации катализатора. Поэтому становится возможным разрабатывать высокочувствительные методы определения металлов и неметаллов, облада1ощих каталитическими свойствами. Высокая чувствительность этих методов обусловлена тем, что катализатор не расходуется в процессе реакции, а принимает в ней участие циклическим образом. Другие катализаторы (например, ферменты) обладают высокой чувствительностью по своей природе. [c.337]

    Новый кинетический метод для определения концентрации каталитических центров ацетилхолинэстеразы применили Уилсон и Гаррисон [105]. Метод основан на исследовании скорости взаимодействия фермента с диметилкарбамилфторидом (формула VI), который аналогично фосфорорганическим соединениям ангидридного строения ингибирует холинэстеразы ацилируя их активные центры. [c.172]

    Кинетические методы основаны на завнсимости скорости ферментативных реакций от концентрации субстратов и фермента, а также присутствующих в среде активаторов или ингибиторов. Если анализируемым веществом является субетрат ферментативной реакции, то для определения его концентрации не обязательно доводить реакцию до конца и достаточно определить любым методом начальную скорость реакции, к-рая при прочих равных условиях (концентрация фермента, второго субстрата, величина pH, темп-ра и т. д.) зависит от концентраций этого вещества. Характер этой зависимости определяется законами ферментативной кинетики (см. Ферменты, Михаэлиса константа), он может быть найден эмпирически п выражен в форме калибровочного графика, используемого для нахождения концентрации определяемого вещества по найденной экспериментально скоростп ферментативной реакции. Любой из приведенных выше прямых Ф. м. а. с участием одной ферментативной реакции может быть использован как кинетич. метод. Если же применяется комбинация из нескольких реакций, то скорость индикаторной реакции может служить мерой концентрации субстрата первой вспомогательной реакции в том случае, если предварительно эта реакция доводится до конца. [c.206]

    Можно определять активность АХЭ или ХЭ. Для определения активности АХЭ в большинстве случаев подвергают гемолизу эритроциты ХЭ определяют в сыворотке крови. При использовании цельной крови можно путем выбора специфического субстрата (ацетил-р-метилхолина для АХЭ и бутирилхолина для ХЭ) или применяя определенные концентрации субстрата достигнуть дифференцирования ферментов. Последний из указанных способов основан на уже описанном ингибировании АХЭ более высокими концентрациями субстрата. Так, при концентрации ацетилхолина 10 М определяется преимущественно АХЭ, при концентрации же 10 М — ХЭ, однако в каждом случае в определенной степени (примерно на /б) проявляет активность и другой фермент. Определение активности осуществляют либо по установлению скорости ферментативного расщепления субстрата (кинетический метод) или путем определения конечных продуктов" и не вступившего в реакцию субстрата. [c.165]

    II. Как неоднократно подчеркивалось в этом разделе, кинетические затруднения в протекании гомогенных редокс-взаимодействий ограничивают выбор реа кций, пригодных для аналитических определений. В то же время эта особенность редокс-реакций послужила основой для разработки новых — кинетических — методов анализа [196, 197]. Исходным здесь является следующее положение если анализируемое вещество участвует в лимитирующей стадии процесса, о его концентрация обратно пропорциональна времени, необходимому для протекания реакции до заранее выбранной степени прёвращения. В работе [198] кинетическим методом с использованием оксредметрических измерений определены концентрации глюкозы. Под влиянием фермента глюкозооксидазы в анализируемой пробе происходит реакция  [c.112]

    Изучение удивительной по эффективности кметнческой роли ферментов л 0с)лцествлении определенных реакций служит прогрессу в понимании гомогенных редокс-взаимодействий, в том числе развитшо кинетических методов анализа с потенциометрическим контролем (раздел 11.2), в использовании медиаторов. [c.136]

    В заключение раздела еще раз подчеркнем, что основными достоинствами гетерогенных методов ИФА является высокая чувствительность, возможность определения соединений с различной молекулярной массой (от гаптенов до целых к- еток), возможность анализа образцов, содержащих ингибиторы и активаторы фермента-маркера. Развивающиеся в настоящее время кинетические методы твердофазного ИФА, а также ИФА на основе водорастворимых полимеров открывают возможность экспресс -айализа исследуемых веществ. [c.114]

    Большинство ферментов не подчиняются таким простым схемам реакций, как (2.1) или (2.3), тем более если в реакции участвует несколько субстратов и продуктов. В общем случае для получения уравнения скорости для сложных механизмов используют метод Кинга — Альтмана и его модификации (см. гл. 1), но анализ дробно-рациональной функции при этом связан с трудностями, и определение кинетических констант Кт и Утвх при нелинейных графиках 1/и от 1/3 необосновано. Необходимость изучения многосубстратных реакций, однако, остается, и поэтому ряд авторов проанализировали многочисленные частные случаи, которые в силу различных допущений можно описать, используя методы линейной кинетики. В данном разделе приведен подход У. Клеланда, представляющий собой попытку привести уравнения скорости к форме, которая содержит параметры с определенным физическим смыслом и поддающиеся экспериментальному определению. [c.25]

    Рестрикционные эндонуклеазы П-го типа являются гидрола-зами, специфически взаимодействующими с определенными короткими нуклеотидными последовательностями двухцепочечной ДНК и расщепляющими фосфодиэфирную связь в определенном месте относительно участка узнавания. Несмотря на то, что в настоящее время известно более 1000 рестриктаз, и более ста среди них широко используются в качестве аналитических реагентов, кинетика и механизм реакций катализируемых этими ферментами изучены недостаточно. С чем это связано Во-первых, в большинстве экспериментов обычно используется избыток эндонуклеазы рестрикции, чтобы обеспечить полное расщепление ДНК, поэтому не требуется знания определенных кинетических параметров фермента. Во-вторых, для изучения кинетики реакций ДНК с эндонуклеазами рестрикции, используются довольно сложные и относительно длительные количественные методы регистрации каталитической активности рестриктаз, например, разделение рестрикционных фралментов ДНК электрофорезом в агарозном или полиакриламидном геле с последующим определением относительного количества продуктов УФ-сканированием геля, окрашенного бромистым этидием (или фотонегатива этого геля) или подсчетом радиоактивности фрагментов при использовании меченной ДНК (разд. 1, часть II). [c.68]

    Раздел Энзимология рассчитан на студентов, уже иознакомиз-" шихся с некоторыми современными методами химии белка определением концентрации белка, хроматографией, электрофорезом и др. Основная цель его состоит в том, чтобы дать возможность студентам приобрести навыки экспериментальной работы, необходимые для начинающего энзимолога. В ходе практикума студенты осваивают методы выделения и очистки какого-либо фермента, а также изучают свойства полученного препарата. В связи с этим приводятся общие указания по работе с ферментами, способам их очистки, правилам определения каталитической активности и кинетических свойств. Во второй части раздела описываются методы выделения ферментов из пекарских дрожжей и животных тканей (скелетных мышц, печени). Поскольку современные методы очистки ферментов включают большое разнообразие приемов, в ряде случаев для получения одного и того же фермента дается описание 2—3 методик, которые могут быть использованы в соответствии с уровнем оснащенности лаборатории. Кроме того, для ферментов из разных источников приводятся различные методы выделения. [c.196]

    Поставленные задачи решаются на основе современных методов исследования ферментов. Практическая направленность занятий связана с освоением различных методов регистрации скоростей ферментативных реакций, включающих использование сопряженных ферментных систем и метода радиоактивного анализа. С целью определения активности мембранных ферментов осваиваются техника получения различных субклеточных структур и приемы работы с различными типами детергентов. Проблемы структурного анализа ферментов решаются с привлечением методов избирательной химической модификации белков, флуоресцентных методов, а также методов ковалентной и адсорбционной иммобилизации на различных носителях, включая искусственные фосфолипидные мембраны (липосомы). Кроме того, осуществляется практическое знакомство с различными аспектами кинетического исследования ферментов осваиваются различные способы оценки кинетических параметров, ингибиторный анализ, проводится исслс- [c.329]

    Уникальная активность и селективность действия ферментов стимулировали интенсивные усилия, направленные на выяснение механизма, их действия. Эта проблема складывается из двух главных аспектов кинетического и структурного. Структурный аспект сводится к решению двух вопросов 1) как ферменты узнают строго определенные субстраты 2) как они обеспечивают высокую скорость ферментативного процесса. Для этого необходимо было установить, как расположен субстрат на молекуле фермента, какие группы участвуют в его узнавании, и на этом основании предположить, как некоторые из этих групп обеспечивают каталитический механизм протекания процесса. Наиболее существенная информация была получена методом ] ентге Юструктурного анализа, который в общих чертах описывается в 7.13. Белу для работы фермента требуется кофактор, то необходимо иметь данные о расположении иа молекуле фермента этого кофактора. В настоящее время изучено большое число ферментов. В этой главе детально рассмотрено несколько ферментативных реакций, для которых такие исследования уже проведены. [c.199]

    То обстоятельство, что ферменты обладают высокой специфичностью и часто даже в смеси с другими белками и остатками веществ биологического происхождения кинетически ведут себя по отношению к определенной реакции независимо, т. е. так же, как и в отсутствие этих примесей, делает возможным при известных условиях применение методов кинетики даже в случаях неинди- [c.8]

    В связи с тем, что скорость ферментативной реакции находится 8 определенной зависимости от концентрации фермента, то и для этой последней величины необходим такой же, как и для концентрации субстратов, способ выражения (т. е. гмоли на литр раствора). Однако в настоящее время это возможно далеко не для всех ферментов, поскольку немногие из них получены в индивидуальном состоянии и не во всех случаях надежно определен молекулярный вес ферментов. Помимо того, как оказалось, в одной молекуле фермента может содержаться несколько каталитических центров, и, следовательно, концентрация фермента может быть не равна концентрации каталитических центров. Все это осложняет положение, хотя в некоторых случаях молярную концентрацию каталитических центров удается определить при помощи прямых или косвенных методов (см. гл. IX) и использовать эту величину для вычисления кинетических констант. [c.9]

    Достоинство метода Хестрина при определении активности холинэстераз состоит в том, что он позволяет исследовать кинетику ферментативной реакции при различных условиях метод достаточно чувствителен, т. е. позволяет работать в широком интервале концентраций субстрата (при необходимости исследований больших концентраций субстрата растворы перед определением могут быть разбавлены) метод позволяет производить массовые определения, однако, являясь удобным для определения активности холинэстераз различного происхождения в стандартных условиях (определенные концентрации фермента и субстрата, стандартное время реакции при условии соблюдения нулевого порядка) [35—42], он не пригоден для кинетических исследований. [c.144]

    Тщательное исследование рН-функций оказалось весьма ценным при изучении механизма действия гидролаз. Возможность изолировать индивидуальные кинетические стадии с помощью методов остановленного потока, стационарной кинетики и релаксационной техники позволила получить вполне четкие результаты. Наиболее определенные данные при использовании некоторых субстратов были получены для трипсина и химотрипсина [2,3]. Именно с помощью такого подхода впервые было уста-йовлено участие остатков гистидина в механизме действия химотрипсина на стадиях ацилирования и деацилирования. Некоторые данные стационарной кинетики привели к полезным выводам о механизме действия негидролитических ферментов. Можно думать, что этот метод анализа механизмов ферментативных реакций будет быстро развиваться. Группа Альберти [4] провела очень тщательное измерение величин р/С и энтальпии ионизации связывающих группировок фумаразы. Данные о [c.217]

    Реакции в полиферментных системах с кинетической точки зрения можно рассматривать как последовательные процессы, специфической особенностью которых является катализ ферментами каждой из стадий реакции. Определенные успехи в настоящее время существуют в кинетическом описании и математическом моделировании реакций в полиферментных системах. Большую роль в этом играют методы качественного анализа систем нелинейных дифференциальных уравнений, описывающих кинетику сложных реакций (Иваницкий, Сельков, Кринский, 1978). В последние годы определенное развитие получили методы конкретного детального расчета кинетики процессов на основе подходов, разработанных при изучении отдельных ферментативных реакций. [c.170]

    Многие из общих подходов к исследованию механизма действия ферментов также применимы и к изучению роли ионов металлов в ферментативном катализе. Схемы координации, описывающие взаимодействие фермента, металла и лиганда, могут быть изучены методами, применяемыми при определении стехиометрии и сродства связывания белками небольших молекул. Эти методы включают гель-фильтрацию в присутствии или в отсутствие небольших молекул [49], метод скоростного диализа [50], ультрафильтрацию, метод ультрацентрифугирования по Хейесу — Велику [52], равновесный диализ [53], а также методы для измерения только сродства взаимодействия [54—58]. Выбор схемы координации ионов металлов и лигандов с ферментами с помощью этих методов возможен только при отсутствии влияния других факторов. Например, если образуется комплекс Е — лиганд — М +, фермент должен проявлять значительное сродство к иону металла только в присутствии лиганда. И, наоборот, если образуется комплекс Е — М + — лиганд, то не должно происходить значительного связывания лиганда в отсутствие иона металла. Однако практически ферменты часто проявляют склонность к связыванию обоих компонентов комплекса, невзирая на выбранную схему координации. Следовательно, важны данные, полученные с учетом стехиометрических и кинетических критериев. Такие важные типы комплексов, как Е — лиганд — М + и Е — М + — лиганд, обычно содержат все три компонента в эквимолярных количествах. Более [c.449]

    Интересные результаты, полученные при определении числа фосфатсвязывающих центров, привлекли в последнее время значительное внимание. Несмотря на димерную природу фермента, кинетические данные указывают на существование одного активного центра [62—64]. Экспериментальное подтверждение этого было получено методом остановленной струи [66, 68, 72], при помощи которого было обнаружено, что величина предста1Ционар-ного выброса продукта равна примерно 1 молю на моль фермента. Однако при высокой онцентрации субстрата (2 10- М) этот метод дал величину 2,7 [73]. Включение фосфата в больщинстве работ, за исключением вышеупомянутой работы Лаздунски и др. [71], составляло 0,6—1,3 моля/моль [64, 74, 75]. Нейман [35] обнаружил связывание 1 моля ингибитора. О-л-нитрофенилтио-фосфата, на 1 моль белка. [c.640]

    При изучении ферментативных реакций кинетические исследования проводят, как правило, в условиях, при которых свободный фермент и его промежуточные формы находятся в стационарном состоянии. Это позволяет значительно упростить уравнения для скорости реакций, но приводит к потере значительной части информации о механизме процесса и промежуточных формах фермента. Поэтому более тонкие кинетические исследования включают определение предстацнонарных характеристик системы. Этот подход более сложен технически, и к тому же при его использовании требуется трудоемкий математический анализ кинетических кривых. Исследования предстационарной кинетики значительно упрощают релаксационные методы, которые стали очень популярны в последние годы. [c.41]

    В гл. 1 было отмечено, что для кинетического изучения транспортных ферментов особое значение приобретает определение таких параметров уравнения скорости, как наименьший показатель степени в числителе и разность между максимальными степенями знаменателя и числителя (параметры n и m в (1.2)). Задача определения этих параметров для Na, К-АТФазы стимулировала поиск соответствующих методов. Было обнаружено, что указанные параметры удобно определить, если к исходной зависимости v x) применить степенное преобразование (3. П. Кометиани, 1982). Непосредственно метод определения параметров пат приводится ниже, а в данном разделе будет рассмотрено универсальное степенное преобразование, когда одновременно функция и аргумент подвергаются всевозможным изменениям степени извлечению корня, возведению в степень, делению и умножению на элементарную показательную функцию. [c.48]

    Стремление создавать количественные методы, основанные на оценке кинетики рестриктазной реакции, реализовывалось апробацией нескольких альтернативных приемов. В частности, как дальнейшее развитие электрофоретического метода, было предложено анализировать кинетику накопления в реакционной смеси конечных и промежуточных продуктов гидролиза субстрата. В качестве субстратов, в зависимости от характера решаемых задач, были использованы линейные ДНК молекулы, содержащие ограниченное количество потенциальных точек разрыва [2541, или кольцевые, содержащие один участок, узнаваемый исследуемым ферментом [106,107]. Для оценки количества ДНК в зонах было применено прямое денситометрирова-ние гелей [254], их фотонегативов [271,254] или измерение радиоактивности [107]. Обсуждаемый подход оправдал себя в опытах по определению некоторых кинетических параметров реакций, катализируемых исследуемыми рестриктазами. [c.128]

Смотреть страницы где упоминается термин Ферменты определение кинетическими методами: [c.258]    [c.13]    [c.158]    [c.223]    [c.85]    [c.114]    [c.176]    [c.140]    [c.164]    [c.327]    [c.231]    [c.298]    [c.75]   
Химическое разделение и измерение теория и практика аналитической химии (1978) -- [ c.667 ]



ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Кинетические методы

Ферменты определение



© 2025 chem21.info Реклама на сайте