Ферменты три точки присоединения к субстрату

А. Лиазы — ферменты, катализирующие присоединение групп по двойным связям или отщепление от субстрата той или иной группы с образованием двойной связи. [c.75]

Этот элементарный расчет проведен в предположении об однородных упругих свойствах белковой глобулы. Если область присоединения субстрата в ФСК имеет повышенную жесткость, то энергия упругой деформации фермента уменьшится и может оказаться даже меньше энергии молекулы субстрата. [c.402]

Если металл участвует в переносе атома или группы атомов, то необходимо лигандное замещение. Активные промежуточные соединения в реакциях замещения простых хелатных соединений металлов предположительно имеют свободные координационные связи или искаженную координационную сферу. По-видимому, такие структуры фигурируют в Со(П)-карбоангидразе, карбоксипептидазе и фосфатазе до присоединения субстрата. Особая активность и в этих ферментах определяется тем, что их комплексы деформируются легче, чем комплексы остальных металлов первого переходного ряда. [c.416]

Если в образовании фермент-субстратного комплекса участвует несколько функциональных групп фермента, то возможно одновременное присоединение к активному центру двух или более субстратов, что однозначно приведет к образованию неактивного комплекса. [c.78]

Единственным объяснением этого является то, что ингибитор образует с ферментом продукт присоединения так же, как и в приведенном выше равновесии (1), конкурируя при этом с субстратом [c.798]

Для удобства одинаковые группы лимонной кислоты обозначены буквами Л и 5. Если лимонная кислота присоединяется к ферменту в одной или двух точках, то группы А я Б различить нельзя. Если же лимонная кислота присоединяется к ферменту в трех точках, то возможен только один вариант. Как показано на фиг. 43, в присоединении субстрата в трех точках может участвовать группа Б, но не Л. [c.185]

Специфичность действия ферментов можно объяснить с точки зрения образования фермент-субстратного комплекса и теории замка и ключа . Для присоединения субстрата или отщепления продуктов реакции необходима определенная молекулярная конфигурация фермента, обусловленная специфической последовательностью аминокислотных остатков и вторичной структурой, а также определенные электрические свойства фермента. То же самое относится и к реакции антиген — антитело. [c.361]

Эти соображения легко понять, если постараться представить себе в деталях, что происходит в процессе ферментативной реакции. Во-первых, субстрат должен присоединиться к ферменту. Вследствие больших различий в размерах молекула субстрата, вообще говоря, может находиться в контакте лишь с ограниченной частью молекулы фермента. Именно это соображение привело к представлению об активных центрах молекулы фермента. Разумеется, активный центр не обязательно представляет собой (а если это и случается, то крайне редко) какой-то отрезок аминокислотной последовательности в первичной структуре фермента. Это скорее некая локализованная область свернутой глобулярной структуры фермента. Присоединение субстрата к активному центру происходит за счет слабых сил (гл. П1), определяющих взаимодействие между некоторыми рсо- [c.92]

Второй метод, разработанный Уонгом и Хейнсом [7], основан на использовании смесей субстратов. Рассмотрим, что произойдет, если в случае упорядоченного механизма для субстратов А и В будет использоваться смесь из двух субстратов, родственных А, которые мы назовем А] и Аг. Если А реагирует с ферментом первым, то субстрат В должен будет взаимодействовать с двумя формами фермента (А1Е) и (А2Е).В результате реакция будет иметь второй порядок по В и стандартные графики будут криволинейными, если только случайно не окажется, что А1 и Аг оказывают одинаковое влияние на Кт- Если же А является вторым субстратом и В реагирует со свободным ферментом, порядок реакции возрастать не будет. Таким образом можно выяснить последовательность присоединения субстратов к ферменту. Этот метод не применим в случае механизма с замещением фермента, поскольку при таком механизме оба субстрата не бывают одновременно связаны с ферментом. Следует заметить, что при использовании этого теста для выявления первого субстрата в упорядоченном механизме с образованием тройного комплекса отсутствуют упомянутые выше трудности, [c.143]

Благодаря новейшим данным о стереохимических изменениях, происходящих при ферментативном катализе и регуляции активности ферментов, мы можем ответить на эти вопросы с достаточной определенностью. В том, что структура белков существенно зависит от слабых связей, действительно есть больщой смысл . Взаимодействие ферментов с субстратами и с модуляторами ферментов в большинстве случаев, если не всегда,, сопровождается изменениями в третичной и четвертичной структуре фермента. С точки зрения стереохимии эти изменения могут быть большими или незначительными для биологической, функции они абсолютно необходимы. Скорость, с которой фермент катализирует определенную химическую реакцию, вероятно, зависит от того, насколько быстро его конформация может подвергнуться обратимому изменению в результате фер-мент-субстратных взаимодействий. Надлежащая реакция фермента на присоединение регулирующего метаболита тоже зависит от способности фермента изменять свою структуру высшего порядка. В одних случаях эти изменения затрагивают третичную конформацию фермента, в других (например, в случае гликогенфосфорилазы) регуляторный эффект связан с изменением четвертичной структуры. [c.215]

Легко видеть, что влияние температуры на взаимодействия между ферментами и их субстратами и модуляторами сулит организмам как добро , так и зло . Если усиление взаимодействия, определяемого слабой связью (или евязями), облегчает протекание какого-то процесса, то изменение температуры, стабилизирующее эту связь (или связи), может давать организму преимущество. Если, например, более высокая способность фермента к присоединению молекулы субстрата благоприятна для его активности (что, как мы знаем, имеет место при низких концентрациях субстрата) и если слабые связи, стабилизирующие фермент-субстратный комплекс, при низкой температуре усиливаются, то возможно частичное снятие замедляющего влияния низкой температуры на данную реакцию. Если же, наоборот, слишком высокая или слишком низкая температура делает основанное на слабых связях взаимодействие между ферментом и субстратом (или модулятором) очень нестабильным, то это может сказываться на реакции и на организме отрицательно, [c.222]

ТОГО, если данный комплекс важен при катализе, то константы диссоциации, измеренные при изучении связывания, должны приближаться к константам, определенным при изучении начальной скорости реакции в целом, хотя различие в используемых концентрациях белка может вызвать в некоторых случаях трудности при интерпретации. Необходимые константы могут быть получены из изучения начальной скорости для иона металла Ка) и для лиганда, если он является ингибитором Кг). Однако константы диссоциации комплексов фермент — субстрат и фермент — продукт не так легко получить, пока не сделаны допущения относительно скоростьопределяющей стадии реакции и (или) порядка присоединения субстрата (или отщепления продукта). Следовательно, утверждение о кинетической важности таких комплексов, наиболее интересных с точки зрения изучения механизма действия металлоферментов, связано с большими сложностями. [c.450]

Ферментативными реакциями являются реакции гидролиза, гидрирования и дегидрирования (присоединение водорода к молекулам субстрата или отщепление водорода от его молекул), реакции окисления (перенос электронов), реакции переноса групп фосфорной кислоты и органических групп. Резко выраженная специфичность ферментов указывает на то, что между ферментом и молекулой субстрата образуются химические соединения, благодаря которым последние активируются (теория Михаэлиса и Ментена, 1913). Исследованием ферментативных реакций занимается биохимия. [c.298]

В результате эксперимента, который состоит в наблюдении за состоянием отдельной молекулы фермента, может быть зарегистрирован либо фермент-субстратный комплекс ES — это одно событие, либо свободный фермент — это другое событие. Поскольку как присоединение субстрата к отдельной молекуле фермента, так и его освобождение определяются большим числом случайных факторов, то состояния, в которых находится данный фермент в рассматриваемый момент времени, представляют собой случайные события. Следовательно, пространство элементарных событий для каждой молекулы фермента состоит из двух элементов Q = (Oi, (02 = (свободный фермент, фермент-субстратный комплекс , т. е. С1 Е, ES . [c.46]

Несомненно, что специфичность ферментов объясняется в первую очередь совпадением пространственных конфигураций субстрата и субстратного центра фермента. Видимо, только тогда, когда совпадение это достаточно полно, может образоваться фермент-субстратный комплекс и, следовательно, начаться процесс ферментативного катализа. Выяснение третичной структуры некоторых белков-ферментов полностью оправдало такую точку зрения. Ткк, в молекуле лизоцима (фермент, ускоряющий гидролиз гликозидных связей в полисахаридах клеточной стенки бактерий) обнаружена выемка (щель) (см. рис. 34) для присоединения субстрата. В эту выемку плотно входит участок молекулы субстрата протяженностью ровно в шесть звеньев [c.110]

В то же самое время, при образовании связи между сериновым кислородом и карбонильным углеродом, происходит ослабление связи между карбонильным углеродом и амидным азотом, и этому ослаблению способствует наличие поблизости атома водорода, ранее принадлежавшего сери-ну, а теперь связанного с азотом гистидина. Когда пептидная связь, N—С, разрывается, этот атом водорода присоединяется к азоту, завершая образование группы —НН2 на конце удаляющейся цепочки, которая на стадии 4 обозначена как продукт 1. Половина цепи субстрата теперь отщепляется, а другая половина остается присоединенной к сериновой боковой цепи фермента. Конфигурация связей вокруг карбонильного атома углерода снова становится плоской тригональной и среди них снова имеется двойная связь С=0. [c.320]

Ингибитор фермента — вещество, соединяющееся с ферментом и лишающее его каталитической активности. Ингибитор может конкурировать с субстратом или быть неконкурентным. Если ингибитор конкурентный, то степень ингибирования фермента определяется соотношением концентраций ингибитора и субстрата. Молекулы ингибитора и субстрата конкурируют за присоединение к одному и тому же активному центру молекулы фермента. [c.399]

Молекула ФЕП становится донором богатой энергией фосфатной фуппы, которая переносится на АДФ с помощью фермента пируваткиназы. Таким образом, в процессе превращения 2-ФГК в пировиноградную кислоту имеет место высвобождение энергии и запасание ее в молекуле АТФ. Это второе субстратное фосфорилирование. По ряду черт оно отличается от первого субстратного фосфорилирования 1) если в первом случае образование макроэргической фосфатной связи протекало одновременно с присоединением к субстрату фосфатной группы, то во втором — фосфатная Фуппа была присоединена к молекуле субстрата задолго до этого события 2) первое субстратное фосфорилирование связано с реакцией окисления, приводящей к тому, что от молекулы 3-ФГА отрываются два электрона и переходят на ПАД , т.е. молекула 3-ФГА служит донором электронов, но вопрос о конечном акцепторе их на этом этапе не решен. Напротив, при втором субстратном фосфорилировании, связанном с реакцией дегидратации молекулы 2-ФГК, решается проблема и донора и акцептора. Здесь в [c.213]

Если предположить, что один и тот же фермент катализирует гидратацию и олефина, и эпокиси, то вполне вероятно, что механизм реакции аналогичен в обоих случаях. В соответствии с этим для молекул субстрата в ходе реакции предполагается сходное геометрическое строение. Для того чтобы получить правильное представление об абсолютной конфигурации продукта транс-присоединения воды к двойной связи олеиновой кислоты, рассмотрим схему на рис. 3.1. Допуская аналогичный способ присоединения к -эпокиси, можно полагать, что гидратация 9R, lOR-энантиомера рацемического субстрата будет приводить к оптически активному веществу, также имеющему 9R, lOR-абсолютную конфигурацию. Если также допустить, что карбоксильный конец цепи фиксирован геометрически относительно активного центра фермента (это наиболее вероятно), то можно ожидать, что при гидратации 9R, lOS-энантиомера рацемического субстрата транс-эпокись будет давать 9R, lOS-диол. [c.108]

Эффект аггравации имеет явно евалентную природу, так как присоединение сложных аддендов к иону или полярной группе существенно не влияет на их валентное состояние, как это показывают прямые спектроскопические определения. Отодвигая на второй план структурпо-ва-лентный фактор ( фермент подходит к субстрату, как ключ к замку ), который усиленно выдвигался в науке со времени Фишера, Эрлиха, Моргенрота, концепция аггравации старается найти иной, более о бший механизм активации сложных структур. Действительно, хотя имеется много данных о тонкой настройке биологических катализаторов на опре- [c.50]

Любое локальное химическое изменение молекулы белка (присоединение субстрата или ингабитора к активному центру, редокс изменения металла в простетической группе, ионизация кислотной или основной группы и т.д.) приводит к появлению конформационно неравновесного состояния. Быстрая колебательная релаксация активного центра и его ближайшего окружения происходит немедленно после локального возмущения, в то время как структура основной белковой глобулы остается практически неизменной. Молекула становится неравновесной. Новое, кинетически доступное состояние фермент-субстрат-ного комплекса соответствует конформационно измененной структуре с продуктом, связанным с активным центром. Превращение субстрата в продукт реализуется в ходе конформационной релаксации фермент-субстратного комплекса к новому состоянию равновесия. Этот переход протекает чрезвычайно медленно по сравнению с масштабом времени колебательной релаксации. В некоторых случаях этот процесс занимает несколько сотен миллисекунд или даже несколько секунд [37]). [c.68]

Аконитаза млекопитающих действует на лимонную кислоту между центральным углеродным атомом и углеродом метиленовой группы, ведущей свое происхождение от щавелевоуксусной кислоты. Таким образом, этот фермент различает две явно симметричные метиленовые группы. Подобное поведение фермента можно объяснить на основании теории Огстона [16] о присоединении субстрата к ферменту в трех точках, как показано на фиг. 43. [c.185]

С помощью метода, сходного с только что описапным, было показано, что отнятие водорода от этилового спирта тоже представляет собой стереоспецифическую реакцию. Такого рода асимметрическая атака на симметричную молекулу легко объясняется теорией присоединения субстрата к ферменту в трех точках, предложенной Огстоном (см. стр. 184). [c.230]

Поскольку ДФФ не является полным структурным аналогом нормальных субстратов этих ферментов, опасность присоединения метки не к активному центру, а к каким-то другим участкам молекулы фермента в этом случае, естественно, больше, нежели в случаях описанных выше. Однако скорость, стехиометрия и специфичность реакции присоединения ДФФ явно указывают, что метка действительно попадает в активный центр. Известно, например, что ДФФ специфически фосфорилирует один из двух остатков серина в химотрипсине. Химотрипсин может быть помечен и многими другими аналогичными агентами, в том числе и-нитрофенилацетатом, причем в каждом случае аципируется одна и та же гидроксильная группа серина, тогда как никакие другие группы не ацилируются. Во многих (хотя и не во всех) исследованных эстеразах и протеиназах ДФФ фосфорилирует гидроксильную группу только того серина, с К-концом которого связан либо аланин, либо глицин. Данные, характеризующие окружение реакционноспособного серина в некоторых белках, приведены в табл. 29. Из таблицы видно, что даже ферменты, сильно различающиеся по своей специфичности, могут иметь одинаковую последовательность аминокислот в участках, примыкающих к остатку серина, содержащему реакционноспособную гидроксильную группу. Это позволяет думать, что специфичность фермента и его способность ката- [c.198]

Рассмотрим случай, когда роль модификатора Q играет второй субстрат В. На фиг. 18,/ показана схема упорядоченного механизма реакции (т. е. механизма с обязательной последовательностью присоединения субстратов), при котором образование продукта реакции и регенерация свободного фермента происходят при распаде тройного комплекса фермента с обоими субстратами. В терминах механизма односубстратной реакции это означает, что константа скорости распада (ЕА) с образованием продукта реакции и свободного фермента равна нулю и максимальная скорость определяется другими мономолекулярными стадиями. Здесь очевидна формальная аналогия со случаем неконкурентного ингибирования односубстратной реакции с той лишь разницей, что в данном случае реакция (ЕА) с В ускоряет, а не ингибирует образование продуктов. Помимо этого, рассматриваемый механизм отличается от механизма с замещением фермента тем, что реакции 1 и 2 в данном случае не разобщены в результате процесса освобождения продукта. Таким образом, как [c.135]

Кинетическое разобщение обусловливается тем, что механизм осложняется какой-то побочной реакцией — либо отщеплением продукта реакции от фермента при нулевой концентрации продукта в растворе, либо присоединением субстрата, присртствующего в насыщающей концентрации. Это разобщение имеет тот же смысл, что и разобщение двух половин процесса в механизме двухтактного замещения, обусловленное отщеплением первого продукта от фермента- [c.143]

В гл. VIII было показано, что даже если в растворе имеется один-единственный фермент, но он образует две формы, способные взаимодействовать с варьируемым субстратом, то кинетика реакции, катализируемой этим ферментом, будет нелинейной. Например, нелинейной кинетикой характеризуется двухсубстратный механизм с образованием тройного комплекса,когда порядок присоединения субстратов при образовании комплекса не имеет значения (т. е. если А может реагировать как со свободным Е, так и с комплексом (ЕВ)) и когда еще не достигнуты равновесные условия. При некоторых условиях зависимость Уо от А будет сигмоидной. Таким образом, любое вещество, которое ускоряет разрушение тройного комплекса, может оказаться эффектором , переводя систему из равновесного состояния в неравновесное. [c.235]

Необходимость учитывать детали химического строения субстрата при его взаимодействии с ферментом привела к попыткам представить себе фермент-субстратные соединения, образованные посредством химической связи. Однако в первых теориях это)го рода не уточнялся характер этой связи, а все внимание концентрировалось, в первую очередь, на стерических моментах. В 1925 г. Г.Эйлер (46) высказал предположение, что в случае гидролитических ферментов можно допустить присоединение субстрата к ферменту в двух точках. Это допущение легло в основу новой теории, получившей название теории деформации. По этой теории (некоторые положения которой были впоследствии использованы Г.Эйрингом), считалось, что при двухточечном соединении фермейта с субстратом точки соединения располагаются несколько дальше друг от друга, чем соответствующие им части молекулы субстрата в свободном состоянии. Про- [c.177]

Присоединение субстрата превращает заполненную молекулами воды полость в сравнительно гидрофобный участок. Остаток Ьеи-203 выступает внутрь полости, тогда как в свободном ферменте он взаимодействует с другими аминокислотами, образующими Р-структуру. Однако вода удаляется из полости лишь частично, и три или четыре ее молекулы остаются внутри после присоединения тирозильной группы субстрата. Поскольку в этом участке происходит связывание боковых групп гидрофобных С-концевых остатков и субстраты с такими остатками гидролизуются быстрее всего (рис. 15.2), то эту полость можно назвать участком специфичности. При этом надо иметь в виду, что другие участки связывания также влияют на специфичность. [c.521]

Непродуктивное связывание, проявляющееся в конкурентном ингибировании субстратом, довольно трудно обнаружить с помощью кинетических измерений [81]. Однако сравнение величин К м и Fm в ряду субстратов (Gly)n-Tyr, где п— —6, позволило однозначно установить его существование в случае дипептида. Величина /См для Gly-Tyr в 5 раз меньще, чем для более длинных субстратов, в то время как Ум для него составляет всего 1/1000 соответствующей величины для (Gly)2-Tyr [82]. Аналогичная закономерность при удлинении олигосахаридной цепи субстрата наблюдается для лизоцима. В случае этого фермента о существовании непродуктивного связывания, определяющего величину /См, хорощо известно [83, 84]. Анализ кристаллического комплекса глицилтирозин— КПА показывает, что сравнительно прочное присоединение субстрата, которое, возможно, мешает образованию переходного состояния, объясняется взаимодействием а-аминогруппы глицилтирозина через молекулу воды с остатком Glu-270 (разд. 3.5). Для более длинных субстратов такое взаимодействие невозможно. [c.527]

Образование бимолекулярного комплекса с ферментом, отьетствен-ного за ингибирование реакции избытком субстрата, имеет место лишь для Зр,17 5-, нопеЗи-оксистероид-дегидро-гепазы. Это явление, по-видимому, связано с присутствием двух реакционных центров в Зр,17р-ОСД и двух функциональных групп в субстрате, причем последние должны быть приблизительно одинаково связаны с ферментом [160]. Подобная ситуация, приводящая к идентичной кинетике, была описана для растительных ауксинов [161 ], в которых биологическая активность связана с двумя реакционноспособными группами и двумя точками присоединения к поверхности рецептора. [c.124]

Если заряженная группа, например карбоксилат-анион, находится в гидрофобной области активного центра фермента и поэтому плохо сольва-тирована, то ее нуклеофильная реакционная способность будет увеличенной. Однако соответственно с этим возрастает также и основность такой группы, поскольку дестабилизация аниона, обусловленная плохой сольватацией, должна способствовать любому процессу, который понижает заряд на анионе. Этот эффект объясняет, по-видимому, высокие значения рК (вплоть до 7 и более) для замаскированных карбоксильных групп в ферментах и других белках [73], и, хотя данный эффект способствует увеличению нуклеофиль-ности этих групп, соотношение нуклеофильностп и основности остается практически неизменным. Следовательно, на основании этого эффекта вряд ли дшжно ожидать больших ускорений, если только нуклеофил не защищен от протонирования под действием растворителя и в то же время сохраняет свободу для атаки субстрата. Это возможно в том случае, когда присоединение субстрата к ферменту вызывает конформационное изменение, в результате которого нуклеофил становится доступным и атакует субстрат в гидрофобной среде. Это может служить еще одним примером, когда силы связывания между ферментом и субстратом используются для продвижения системы вдоль координаты реакции, что облегчает каталитический процесс нри одновременном уменьшении наблюдаемой свободной энергии связывания (более подробно этот вопрос будет рассмотрен в гл. 5 в рамках теории индуцированного напряжения). В общем случае, когда увеличение скорости обусловлено изменением природы растворителя , окружающего субстрат в активном центре фермента, причиной этому всегда должно быть специфическое взаимодействие, использующее энергию связывания фермента с субстратом. Так, скорость реакции двух противоположно заряженных реагентов будет больше в гидрофобной среде активного центра фермента (по сравнению с реакцией в воде), поскольку в неполярном окружении заряженные реагенты дестабилизированы и в тоже время дестабилизация менее зарянч енного переходного состояния будет не столь значительной [схема (46)]. [c.83]

Согласно модели, быстрая миграция энергии по ССИВС обеспечивает сопряженные со стадиями катализа конформационные изменения структуры белка. Близкие взгляды высказываются также в работе [3], однако при рассмотрении фермента в качестве молекулярной машины детерминирующая роль отводится именно конформационному изменению ФСК, следующему за присоединением субстрата к активному центру и носящему характер релаксации к новой равновесной конформации, появившейся в результате локальных микрохимических изменений. Существенной особенностью нашей модели работы олигомерного фермента является то, что реализация предложенного механизма переноса энергии обусловила вращательную симметрию дуплицированной структуры и связанную с этим обратимость конформационных переходов при поочередном функционировании активных центров. Близкие к нашим идеям представления о переносе зарядов с участием полярных групп развиваются, как мы рассматривали в разд. 5.1.1, в работах [21, 119, 136]. Однако авторы этих работ не учли возможной взаимосвязи каталитических механизмов с субъединичной организацией, вследствие чего колебательный режим функционирования ферментов оказался вне их рассмотрения. [c.127]

Механизм большинства ферментативных реакций гораздо проще, чем механизм Уонга—Хейнса. Среди этих механизмов можно выделить две основные группы для одних реакция протекает с образованием в качестве промежуточного соединения тройного комплекса ЕСХУ (названного тройным в связи с тем, что он содержит три реагента — фермент и оба субстрата), а для других— замещенной формы фермента ЕС. Ранние исследователи, например Вульф [151,152] и Холдейн [64], предполагали, что реакции должна протекать через промежуточную стадию образования тройного комплекса, который возникает либо из двойного комплекса ЕОХ, либо из двойного комплекса ЕУ. Иными словами, субстраты могут связываться с ферментом в произвольном порядке, как это показано на рис.5.1. Строгое уравнение стационарной скорости для этого механизма имеет сложный вид и содержит члены, включающие [СХ] и [У] . Однако вклад этих членов в скорость, реакции невелик, и Гулбински и Клеланд [61], используя метод моделирования с применением ЭВМ, показали, что если не брать, маловероятные значения для констант скорости, то получаемые-зависимости скоростей концентраций субстратов имеют точно такой же вид, как и соответствующие зависимости для случая,. коГда все стадии, за исключением стадии взаимного превращении ЕХС-У и ЕХ - СУ, являются равновесными. При этом уравнение-скорости не содержит квадратичных членов, и для простоты мы будет использовать уравнения, выведенные в предположении, что скорость установления равновесий очень велика (речь идет только о механизмах с неупорядоченным присоединением субстратов). Следует, однако, подчеркнуть, что факт выполнимости подобных уравнений нельзя рассматривать как доказательство быстрого установления равновесия, точно так же как на основании выполнимости уравнения Михаэлиса—Ментен для большинстваг ферментов нельзя сделать вывод, что при этом справедливо до- [c.104]

Механизм с неупорядоченным присоединением субстратов отличается от механизма с упорядоченным присоединением тем, что ни одна из обменных реакций не подавляется избытком альтернативного субстрата полностью. Например, если В присутствует в избытке, то А не может связаться формой Е, а вместо этого присоединяется к ЕВ с образованием комплекса ЕА В, который может распадаться, давая Р или Р. Поскольку радио-аггтивность определяется с очень высокой чувствительностью, метод иэотопного обмена позволяет обнаружить второстепенные альтернативные пути реакции. Следует, однако, оговориться, что для получения методом изотопного обмена достаточно надежных результатов необходимы гораздо более очищенные препараты ферментов, чем при обычных кинетических измерениях. Причина этого очень проста. Допустим, что мы изучаем алкогольдегидро-геназу, которая катализирует реакцию [c.137]

В отсутствие инсулина РИ не проявляет тирозинкиназной активности присоединение инсулина к центру связывания на а-субъединицах активирует фермент. При этом субстратом служит сам фермент, т, е. происходит аутофосфорилирова-ние одна Р-цепь фосфорилирует другую Р-цепь той же молекулы РИ. Фосфорилируется 6-7 тирозиновых остатков. [c.218]

Согласно полученному уравнению, присоединение как первой, так и второй молекулы субстрата к R-форме димерного фермента имеет одну и ту же микроскопическую константу диссоциации Xr. Коэффициент 2 в уравнении (31) указьшает на то, что субстрат может связаты я с любьп из двух активных центров на Rq с образованием Ri, и аналогичным образом субстрат может высвободиться из любого из активных центров на R2 с образованием R . [c.119]

Кроме гидроксильных групп в р-положении к карбоксильной группе могут присоединяться (или отщепляться от нее) и другие группы. Так, бактериальный фермент аспартаза катализирует присоединение аммиака к фумарату с образованием Ь-аспартата — реакцию, аналогичную реакции, катализируемой фумаразой. При этом наблюдается гранс-присо-единение, а изотопные эффекты при измерении скорости реакции указывают на механизм с участием карбоний-иона [121]. В то же время Р-метиласпартаза, катализирующая аналогичное присоединение, вызывает быстрый обмен дейтерия из воды с протонами субстрата [122]. [c.150]

С другой стороны, некоторые наблюдения позволяют считать, что субстрат соединяется с ферментом в нескольких точках. Так, все протеолитические ферменты расщепляют пептидные связи, но эти связи должны быть ориентированы строго специфично в отношении к окружающим белковым цепям и полярным группам молекулы субстрата. Действию протеолити-ческих ферментов подвергаются только 1-формы аминокислотных остатков, (1-формы синтетических пептидов полностью инертны. Для объяснения стереохимической специфичности предполагается, что субстрат должен быть присоединен к ферменту по крайней мере в трех точках. [c.261]

Однако ферменты, связанные с нерастворимыми подложками, важны не только с практической точки зрения. Ферменты, присоединенные к нерастворимым подложкам, имеющим хорошо охарактеризованную поверхность, представляют собой простые модели для изучения влияния микроокружения на связывание субстрата, а также на общий ход катализа, что имеет несомненно и теоретический интерес. Поскольку большинство ферментов in vivo связаны с мембранами или находятся в виде каких-то других комплексов в естественном окружении, исследования в этом направлении имеют особое значение. [c.12]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология