Обнаружение веществ в элюате

Для регистрации вещества в момент выхода из колонки существует несколько способов. Для веществ кислого характера можно использовать цветную реакцию с индикатором. Более эффективен и пе вызывает загрязнения элюата метод, при котором элюат по выходе из колонки направляют в микрокювету. Там его непрерывно анализируют потенциометрическим, рефрактометрическим, спектрофотометрическим или колориметрическим методами. Наиболее распространен метод обнаружения веществ анализом каждой из точно отмеренных фракций элюата. Чаще всего хроматографируют каждую фракцию элюата или используют химические превращения с последующим исследованием продуктов реакции. [c.74]

В современной колоночной хроматографии вытекающий из колонки раствор (элюат) пропускают через соответствующий детектор, а затем с помощью автоматического коллектора или вручную собирают в виде отдельных фракций. Результаты обнаружения веществ в элюате представляют в виде хроматограммы (рис. 1.2,6). [c.15]

Главным недостатком адсорбционной колоночной хроматографии липидов является сложность обнаружения веществ в элюате. Обычно хроматографические фракции упаривают досуха и взвешивают или определяют состав элюата методом ТСХ. Непрерывное обнаружение компонентов смеси в поступающем из коло нки элюате было бы предпочтительнее, однако его удается осуществить лишь в считанных случаях 142, 143]. [c.140]

Чем длиннее путь луча в световоде, тем выше чувствительность прибора с другой стороны, для предотвращения размывания хроматографической полосы желательно, чтобы мертвый объем световода был минимальным и не превышал объема газа-носителя, отвечающего полуширине самого узкого пика на хроматограмме, V0.5 [303]. Если объем кюветы-световода оказывается большим, необходимо продувать через нее вспомогательный инертный газ, что приводит к повышению предела обнаружения ИК-детектора. Напротив, если объем световода оказывается меньше Vo.s, в кювету поступает только доля хроматографической зоны и предел обнаружения также повышается. Поэтому экспериментально подбирают такие условия работы хроматографической колонки (включая и режим программирования температуры), чтобы Vb,5 каждого пика был равен или слегка превышал объем кюветы-световода, колеблющийся в пределах от 50 до 300 мкл. Поскольку ИК-облучение не вызывает деструкции вещества, элюат из кюветы-световода может быть направлен на дополнительное детектирование (пламенноионизационный детектор или масс-спектрометр). [c.322]

Обнаружение веществ в элюате [c.191]

Препаративная хроматография имеет своей целью получить некоторые или все компоненты разделяемой смеси в очищенном виде для дальнейшего исследования или использования. В этом случае каждая из разделенных зон после выхода из хроматографической системы должна попасть в отдельный приемник. При наличии непрерывного контроля за выходящей из системы подвижной фазой можно менять приемники после окончания выхода из системы каждой зоны. При жидкостной хроматографии, особенно при разделении очень сложных смесей биополимеров, для обнаружения компонентов приходится проводить специальный анализ проб выходящего из колонки элюата. В этом случае целесообразно собирать элюат в отдельные небольшие фракции и после анализа содержимого каждой из фракций объединять те, которые содержат интересующие экспериментатора вещества, и подвергать их последующей обработке. [c.343]

В разд. 7.2 была описана принципиальная возможность обнаружения бесцветных веществ в табл. 7.8 дан обзор некоторых реагентов, применяемых для проявления бесцветных веществ. Проявление внутренней хроматограммы проводят без приборов. По внутренней хроматограмме трудно провести количественную оценку результатов, для этого применяют внешнюю хроматограмму. Хорошие результаты дает исследование элюата. Для этого необходимы определенные различия величин, характеризующих подвижную фазу и компоненты разделяемой смеси. Устройства для расшифровки смесей на выходе из колонки называют детекторами некоторые наиболее часто используемые в жидкостной хроматографии детекторы приведены в табл. 7.6. [c.353]

Ионный обмен можно применять для проведения макро- и микроопределений. Для разделения небольших количеств веществ используют ионообменную бумагу или проводят ионный обмен в тонких слоях. Количество анализируемой пробы выбирают в зависимости от последующего метода обнаружения или определения ионов. Для определения ионов после ионного обмена применяют кондуктометрические, полярографические, потенциометрические и радиохимические методы анализа. При проведении ионообменных разделений исследование фракций элюата часто проводят классическими методами анализа. При помощи ионного обмена можно проводить определение различных электролитов. Едва ли можно назвать сочетание элементов, для разделения которых нельзя использовать какой-либо метод ионного обмена [43]. Метод ионного обмена можно применять и для разделения неионогенных веществ после перевода их в ионогенные соединения. В качестве примера можно назвать разделение фруктозы, глюкозы и других сахаров в виде боратных комплексов. [c.381]

На приборе, изображенном на рис. 478, можно осуществить разделение до 1 г смеси веществ. Положение зон бесцветных веществ можно обнаружить способами, используемыми при распределительной хроматографии (стр. 462) или противоточном распределении (стр. 429). После окончания разделения к слою геля можно, например, приложить лист фильтровальной бумаги, в которую диффундирует часть вещества с поверхностного слоя геля. Затем на бумаге можно обнаружить вещества любым из способов, применяемых при хроматографии на бумаге (стр. 462). Вещества, поглощающие свет в видимой или ультрафиолетовой области спектра, можно обнаружить следующим образом. Гель разрезают на узкие полоски параллельно стартовой линии, полоски элюируют и измеряют поглощение элюата при помощи спектрофотометра. После обнаружения разделенные вещества можно выделить из геля экстракцией или другим подходящим способом и получить их таким образом в чистом состоянии. [c.536]

Благодаря большому количеству селективных методов обнаружения, применяемых в ТСХ, тонкослойная пластинка сама по себе может служить в качестве дополнительного детектора, селективного к отдельным компонентам смеси. Тонкослойную пластинку можно применить для анализа только тех фракций, кото-)ые достаточно хорошо удерживаются тонким слоем сорбента. 1ри использовании недеструктивных газохроматографических детекторов, например катарометра, элюат из колонки проходит через детектор и затем адсорбируется слоем сорбента. При использовании деструктивных детекторов, например пламенно-ионизационного, газовый поток из колонки необходимо делить на две части меньшую пропускают через детектор, а основной поток адсорбируют в тонком слое. Эффективность улавливания элюата достигает 80% [108] при условии, что толщина слоя на пластинке достаточна и в трубке, соединяющей выход колонки с пластинкой, не происходит конденсации веществ. [c.144]

Необходимо отметить, что любые варианты схем хроматографического анализа, основанных на детектировании выделенных веществ в элюате, имеют один общий недостаток. Концентрация веществ в элюате в несколько раз меньше, чем в стационарной фазе, а именно тем меньше, чем больше коэффициент распределения, соответствующий условиям элюирования вещества из колонки. Вынужденное разбавление при элюировании приводит к увеличению значений пределов обнаружения. Большие возможности для снижения пределов обнаружения открывает схема хроматографического анализа с непосредственным определением веществ в хроматографической колонке или в плоском слое. Эта схема пока применяется сравнительно редко, что объясняется ограниченными техническими возможностями детектирования веществ непосредственно в стационарной фазе. Во всех видах плоскостной хроматографии, где такую схему детектирования реализовать значительно проще, чем в колоночной, ей отдается предпочтение. В последнее время наметилась тенденция распространения сферы применения этой схемы и на коло- [c.180]

В табл 4-2 указаны пределы обнаружения антрацена на четырех хроматограммах, изображенных на рис 4-11 Как следует из таблицы, минимальные детектируемые концентрации пропорциональны облучаемому объему элюата Пределы обнаружения (минимальные детектируемые количества вещества) также пропорциональны облучаемому объему в тех случаях, когда размывание пика незначительно В результате применение кюветы объемом 7 мкл дает не столь большое повышение чувствительности, как можно было бы ожидать исходя из соотношения объемов Предел обнаружения при применении обычной колонки и кюветы объемом 7 мкл превышает предел обнаружения для полумикроколонки с кюветой объемом 1,5 мкл, хотя первая кювета повышает чувствительность по концентрации в 4 раза При использовании кюветы в 7 мкл в сочетании с полумикроколонкой удается детектировать до 0,14 пг антрацена, при замене же полумикроколонки в той же системе на обычную колонку чувствительность ухудшается в 5 раз Разумеется, необходимо отметить, что если детектируемый Ник выходит очень быстро (т е если к мало), то применение кюветы объемом 7 мкл влечет за собой заметное размывание пика Однако при разделении методом обращенно-фазовой хроматографии соединений типа антрацена это маловероятно [c.109]

Из числа физических способов обнаружения наиболее чувствительны радиометрические методы, которые прежде всего удобно применять для анализа радиоизотопов. При обнаружении неактивных веществ используют реагенты, содержащие радиоизотоп. Для определения положения ионов можно использовать, например, низко- или высокочастотную кондуктометрию, полярографию и т. п. Физические методы можно применять для непосредственного анализа хроматограмм. Наиболее употребительна фотометрия обнаруженных окрашенных пятен в отраженном или проходящем свете. Точность определения содержания ионов повышается, если эти ионы экстрагируют с хроматограммы и анализируют элюат удобным и чувствительным методом, например колориметрическим, или методом атомноабсорбционной спектроскопии. [c.143]

В колоночной (в том числе газовой) хроматографии по достижении положения, показанного на рис. 61, б, подачу подвижной фазы не прегфащают. Хроматографирование продолжают до тех пор, пока подвижная фаза выносит из колонки разделяемые вещества. Этот процесс называют элюированием, а выходящую из колонки подвижную фазу, содержащую разделяемые вещества, — элюатом. Элюат обычно контролируют на содержание разделяемых веществ с помощью датчиков, которые называют детекторами. Сигналы детекторов принимаются измерительными приборами и передаются к самописцам. Получают хроматограммы, подобные той, которая показана на рис. 61, в. Если на оси абсцисс отложено время, по хроматограмме можно определять время удерживания вещества в колонке. Для 81 это 1, а для 83 — 2 (отсчет времени ведется с момента ввода смеси разделяемых веществ). Часто все же по оси абсцисс откладывают не время, а объем элюата. Нулевая точка тогда соответствует выходу той порции подвижной фазы, в которую была введена смесь разделяемых веществ. Потом в элюате меняются концентрации разделяемых веществ в соответствии с различными степенями их удерживания. По полученной хроматограмме определяют объем удерживания. Для 81 это v , а для 83 = а-Время (объем) удерживания при постоянных условиях хроматографирования представляет собой величину, характерную для данного вещества. Поэтому наряду с другими методами обнаружения для идентификации веществ можно использовать значения времени (объема) удерживания. Количества же разделенных веществ пропорциональны площадям их пиков. Это используют для проведения количественных определений. Можно также собрать отдельные порции элюата и определить содержание в них разделяемых веществ с помощью подходящих методов количественного анализа. [c.258]

Адсорбционная хроматография, старейший хроматографический метод, ведет свое начало с классических исследований Цвета [43, 58]. В течение многих лет ее широко использовали для разделения различных материалов, главным образом сложных смесей природных соединений. Методом проявительной хроматографии можно проводить разделение от миллиграммовых до гектограммовых количеств веществ при мягком режиме и использовании несложного лабораторного оборудования. В последние двадцать лет быстро развились и получили широкое распространение другие хроматографические методы, так что значение адсорбционной хроматографии одно время существенно уменьшилось, однако в последнее время интерес к ней вновь повысился, в первую очередь благодаря развитию теории и совершенствованию инструментального оснащения газовой хроматографии. Примерно десять лет назад были получены модифицированные адсорбенты, обеспечивающие быстрое и эффективное разделение, разработаны новые системы детекторов для обнаружения веществ в элюате, а также аппаратура для автоматической регистрации хода процесса разделения (как и в ГЖХ). [c.152]

При адсорбционной хроматографии на колонках адсорбент (например, активированная окись алюминия, порошок целлюлозы, кремневая кислота, или кизельгур) в виде сухого твердого вещества или пасты укладывают в трубку (стеклянную, пластмассовую или из другого подходящего материала), имеющую ограниченное выходное отверстие (обычно защищенное стеклянной пористой пластинкой) для вытекания подвижной фазы. Раствор хроматографируемого вещества наносят на поверхность сорбента в колонке и дают ему протечь в сорбент затем на вершину колонки наносят растворитель, представляющий собой подвижную фазу, помещают и дают ему протечь вниз либо под действием силы тяжести, либо под небольшим давлением. При выполнении этой методики надо следить за тем, чтобы вершина колонки не обсыхала. Анализируют протекающий раствор — элюент — либо непрерывно (например, с помощью проточной кюветы, в которой измеряется поглощение в ультрафиолетовой области), либо поэтапно (например, собирая фракции либо через определенные промежутки времени, либо определенного объема или массы элюата с последующим определением разделяемых компонентов в каждой фракции). Необходимость индивидуально анализировать много фракций для получения полной количественной оценки вещества привела к тому, что применение в последние годы классических методик хроматографии на колонках сократилось там, где их продолжают использовать, существует естественная тенденция выбирать те методы обнаружения и определения, которые легко переводятся в автоматические процессы. [c.100]

Имеется в продаже оборудование, обеспечивающее отбор только тех фракций элюата, которые содержат разделенные вещества. Установка работает на принципе изменения соответствующего свойства элюата. Обнаруженное изменение дает импулье для автоматической смены сосуда. Схема одного из коммерчески доступных устройств показана на рис. 4.8. [c.136]

Количественное определение хлорофоса, дихлорофоса и ди-хлорацетальдегида основано на реакции с 2,4-динитрофенилгид-разином. При этом в случае качественного обнаружения одногО из перечисленных веществ определение производится непосредственно в хлороформном экстракте, пр обнаружении нескольких веществ исследуют элюаты после хроматографического разделения U выделения. Фотометрирование ведется в кюветах 3,5 и 20 мм при длине волны 530 нм (зеленый светофильтр). Расчет производится по калибровочному графику. Описанная методика исследования на хлорофос, дихлорофос и дихлорацетальдегид. позволяет обнаруживать в 100 г органов трупа 0,1—0,15 мг этих трех веществ, а определять 0,3—0,5 мг. [c.274]

Примером применения адсорбционной хроматографии для разделения органических веществ является разделение смеси цетена, стеарата холестерина и олеиновой кислоты. Смесь этих веществ в петролейном эфире пропускают через колонку с силикагелем и последовательно промывают избытком петролейного эфира, причем в элюат переходит нетен. зятем тпихлопэтяном—в элюат переходит стеарат холестерина н, наконец, промывают эфиром, вымывающим олеиновую кислоту. Таким же путем можно разделить изомеры питроанилина в растворе в петролейном эфире на колонке из гидроокиси кальция. При промывании избытком растворителя на колонке сверху вниз образуются три зоны верхняя ярко-желтая зона п-нитроанилина, средняя желтая—ж-нитро-анилина, нижняя коричневая—о-нитроанилина. Для обнаружения зон органических веществ на адсорбционных колонках широко применяют люминесцентный анализ. Например, если смесь фенола, резорцина, галловой кислоты и флороглюцина с хлоридом [c.535]

Колонки и детекторы контроль потока подвижной фазы. Для гель-фильтрационной хроматографии с использованием декстрановых гелей обычно применяют простые стеклянные колонки диаметром 2,5 см и длиной 50 см. В таких колонках Уо равен от 50 до 100 мл, а (Уо Уг) —от 200 до 250 мл. Раствор пробы массой несколько миллиграммов вводят в колонку через ее верхнюю часть. Обнаружение зон растворенных веществ по мере их появления из колонки можно проводить посредством спектрофотометрического контроля элюата, измерением его показателя преломления или собирая аликвотные части для дальнейшего анализа. Подвижной фазе позволяют протекать через гeль-ф,ильтpaциoн yю колонну иод действием силы тяжести со скоростью около 3,5 мл/ч на каждый квадратный сантиметр сечения колонки. Так, для колонки диаметром 2,5 см скорость потока равна приблизительно 16 мл/ч, а время, необходимое для элюирования самых малых молекул, составляет около 16 ч. Большая скорость элюирования недопустима, так как мягкий гель деформируется потоком подвижной фазы и колонка выходит из строя (гель выдавливается или же спрессовывается и закупоривает колонку). [c.598]

Фронтальные выходные кривые можно также использовать для определения ем кости колонок (в миллиэквивалентах на миллилитр набивки колонки). Для определения емкости колонки обычно проводят франтальную хроматографию раствором исследуемого соединения до тех пор, пока концентрация его в элюате не станет равной К01нцентрации в исходном растворе. После этого хроматографирование прекращают и колонку промывают элюентом, который замещает исходный раствор в свободном объеме колонки, не смывая вещества, удерживаемого неподвижной фазой. Когда концентрация вещества в элюате снизится ниже предела обнаружения, элюент заменяют на раствор, который вымывает вещество с неподвижной фазы, и элюируют его полностью. Определение концентрации вещества в этом элюате позволяет определить количество соединения, первоначалыно удерживаемого колонкой. [c.92]

В качестве прямых методов обнаружения пептидов в элюатах применяют колориметрию и спектрофотометрию. При работе с летучими буферами аликвотную часть можно упарить, а затем анализировать методами бумажной и тонкослойной хроматографии или электрофореза. Этот прием требует много времени, но зато дает полезную информацию о составе полученных фракций. В принципе анализ можно вести, наблюдая изменение какого-либо физического параметра, например коэффициента преломления. Действительно, дифференциальные рефрактометры находят применение для разделения некоторых классов веществ, однако для обнаружения пептидов эти приборы обладают недостаточной чувствительностью. [c.390]

В результате элюирования растворителем обычно получают более разбавленные пробы относительно большого объема, что позволяет осуществить несколько аналитических определений состава элюата. Однако концентрации анализируемых соединений в нем обычно ниже предела их обнаружения, поскольку увеличение объема пробы приводит к ее разбавлению. При чрезмерном уменьшении объема растворителя, используемого для элюирования, извлечение проходит неполностью. В то же время если часть растворителя впоследствии удалить вы-лариванием, то при этом может снизиться содержание. летучих компонентов. Некоторые трудности, с которыми -сталкиваются при удалении излишков растворителя, рассматриваются в разделе Экстракционные методы . Недостатком метода элюирования, из-за которого многие авторы предпочитают термическую десорбцию, является также токсичность наиболее эффективных из обычно используемых элюентов, например бензола, толуола, сероуглерода. Избежать потери легкокипящих веществ при испарении можно, применяя в качестве элюента жидкий диоксид углерода. Жидким диоксидом углерода можно проводить и предварительную очистку адсорбента, и выделение пробы с использованием описанного в следующем разделе аппарата Сокслета для экстракции при высоком давлении [73]. Как будет показано далее, жидким диоксидом углерода особенно целесообразно вести элюирование с активного угля. [c.55]

Во многих случаях необходимо не только визуально фиксировать пятна разделенных на бумаге веществ и измерить их величину Rf, но и подвергнуть эти вещества дальнейшей обработ-. ке. Например, может понадобиться экстрагировать пятно с бумаги, чтобы провести колориметрический анализ, подвергнуть элюат масс-спектр а л ьному исследованию или провести микрохимическую реакцию и т. п. Положение пятна, если оно бесцветно, определяют путем обнаружения на контрольной полоске, содержащей вещество-стандарт и подвергнутой хроматографированию на том же листе и в тех же условиях, что и анализируемый образец. Обнаруженное пятно вырезают вместе с участком окружающей бумаги (рис. 3.13) и обрабатывают, как указано ниже. [c.96]

Потенциометрия основана на измерении изменения потенциала электрода, погруженного в раствор, в зависимости от концентрации и температуры определяемой смеси. С помощью этого метода можно анализировать растворы, получающиеся после жидкостного извлечения веществ из слоя сорбента, и элюаты КШХ [21, 22]. Потенциометрия стала широко применяться после разработки ионоселективных электродов [23], позволяющих определять вещества с высокой селективностью и низким пределом обнаружения. Так, например, этим методом можно определить до 10 М сульфид-ионов в присутствии других сильных элек- [c.115]

Для этого ТСХ-пластинку (в слое сорбента не было флуоресцирующих веществ) помеща.ли в камеру объемом 18 л, в которую, добавляли 6 г карбоната аммония, и выдерживали. 3—12 час. при ПО—150° С. Исследовавшиеся стероиды образовывали флуоресцирующие производные после выдержки в течение 3 час. при 110° С. Измеряли флуоресценцию сканирующими устройствами. Такилг образом определяли вещества, у которых возникает флуоресценция под УФ-излучением. На линии подвода элюата был установлен фотометр, что позволило сравнить его показания и результаты сканирования. Предел обнаружения при использовании описываемого лютода равнялся нанограммовым ] оличествам. [c.157]

Еще в 1953 г. Лабат и Монте [1] разделили на слоях смеси силикагель—бентонит (6 1) группу из 7 фенольных соединений, используя два различных растворителя. Вагнер [2] применял смесь кизельгура с кремневой кислотой (1 1) и 5 различных систем растворителей, в том числе ксилол, хлороформ и их смеси. Пастушка и Петрович [3, 4] хроматографировали на силикагеле G большое число фенолов (см. табл. 27.1), элюируя пробы бензолом, смесями бензол—метанол, бензол—диоксан— уксусная кислота и бензол—метанол—уксусная кислота. Пятна разделенных фенолов обнаруживали опрыскиванием диазоние-вой солью. В результате исследования возможности количественного определения фенолов была установлена зависимость между площадью пятна и логарифмом концентрации. На слоях силикагеля толщиной 0,3 мм эти авторы проводили непосредственное измерение оптической плотности пятен и установили ее соотношение с количеством вещества в пробе. Генсхирт и Морианц [5] разделили па силикагеле метил- и пропил- -оксибен-зоаты, использовав как растворитель смесь пентан—уксусная кислота (22 3). Проводя количественный анализ, эти авторы элюировали пятна метанолом и измеряли поглощение элюата в УФ-области при длинах волн 220—300 нм. Точность обнаружения составляет 2,5—3,0%. Петрович [6] хроматографировал изомеры ксиленола и соответствующих анилозов. [c.238]

Янеке и МаасТёбельс [28] разработали методику количественного анализа витамина б, основанную на получении минимальных обнаруживаемых пятен веществ. Согласно этой методике, пластинки опрыскивают фосфовольфрамовой кислотой и после этого греют в термостате при 70°С. Поскольку длительность обнаружения хроматограммы составляет около 30 мин, этот метод позволяет быстро оценить содержание витамина О. Кастрен [29] разработал колориметрический метод определения витамина О пятна витамина элюируют с пластинки и обрабатывают элюат пентахлоридом сурьмы. [c.408]

Штурм и др. [46] определяли наличие, а-, у- и б-токоферолов в арахисовом масле, элюируя пробы масла хлороформом на силикагеле G. Количественные определения они проводили, элюируя эти соединения после разделения с пластинки и обрабатывая элюаты реактивом Эммери—Энгеля. Эти операции следует выполнять при слабом искусственном свете. Лавледи [47] испытал семь различных элюирующих систем в сочетании с силикагелем G и нашел, что наилучшее разделение р- и -токо-феролов дает смесь циклогексан—н-гексан—изопропиловый эфир—аммиак (20 20 10 1). При опрыскивании реактивом,, представляющим собой смесь 1,6 г фосфомолибденовой кислоты и 0,092 г 2,7-дихлорфлуоресцеина в 60 мл этанола, к которой добавляют 7,6 мл аммиака и затем разбавляют до 100 мл деионизованной дистиллированной водой, можно выделить и обнаружить витамины при их содержании 0,08 мкг/мкл. Полученные пятна не обесцвечиваются несколько месяцев. Этим методом определяли содержание индивидуальных токоферолов в плазме крови и красных кровяных тельцах [48], С тем чтобы количественно оценить содержание витаминов, разделенные вещества элюируют с пластинки, получают их триметилсилильные производные и затем анализируют методом газовой хроматографии. Предел обнаружения при использовании водородного пламенного детектора составляет 0,03 мкг. Уиттл и Пеннок [49] разделяли а-, р-, у- и б-токоферолы методом двумерного хроматографирования на силикагеле G, элюируя пробу в одном направлении хлороформом, и в другом смесью петролейный эфир (40—60°С)—диизопропиловый эфир (5 1). Далее зоны элюировали с пластин и обрабатывали реактивом Эммери—Энгеля (Т-108). Выход составлял около 92%. Pao и др. [50] разделяли эти соединения на силикагеле посредством одномернога элюирования смесью петролейный эфир (60—80°С)—диэтиловый эфир—диизопропиловый эфир—ацетон—уксусная кислота (254 3 32 12 3), используя затем ту же методику количественного определения. В этом случае выход разделяемых продуктов составлял 97—98 %. С помощью этой же системы элюентов Стоу [51] разделял р- и -токоферолы. [c.411]

Байер и Андерс [7] использовали самцов тутового шелкопряда Bombyx mori L) для обнаружения экстрагированных из брюшной полости самок веществ, привлекающих особи другого пола. Неочищенный экстракт подвергли хроматографическому разделению и элюаты пропустили через сосуды, в которые поместили самцов шелкопряда. Было отмечено заметное возбуждение самцов при элюировании привлекающих веществ. Конечно, этот метод слишком специфичен, чтобы иметь широкое применение, но аналогичные приложения можно найти в практической деятельности биолога. Обоняние возбуждает более общую биологическую реакцию к сожалению, она качественна и, в лучшем случае, сомнительна. Однако опытный химик, работающий в области ароматических соединений, часто может идентифицировать по запаху неизвестное соединение у выхода из хроматографической колонки. [c.67]

Для быстрого испарения элюата Блэкли и др. [66] использовали кислородно-водородное пламя. Этими авторами установлено, что для анализа биологических препаратов требуется 1—10 нг вещества при условии записи полного масс-спектра и менее 1 нг при обнаружении элюата по заранее выбранным в масс-спектре ионам. Авторы использовали эту методику для масс-спектрометрического анализа аминокислот. Полученные спектры очень просты и содержат в основном пики, отвечающие протонированным молекулярным ионам МН+ (рис. 2.5). Исключение составляют лишь лизин и гистидин, в масс-спектрах которых интенсивность пиков МН+ составляет соответственно 60 и 80%. Ограниченная фрагментация молекул позволяет отличить глутаминовую кислоту от лизина, однако лейцин и изолей- [c.48]

Для препаративного выделения монотерпенов предпочтительны полностью стеклянные системы. Поскольку анализируемые вещества могут разлагаться в катарометре препаративного хроматографа, мы используем стеклянный делитель потока элюата, который позволяет направить в детектор (в нашем случае пламенно-ионизационный) лишь часть элюата (2—5%). Как выяснилось, по своим возможностям такая система обнаружения значительно превосходит детектор по теплопроводности. В сущности любые неподвижные фазы и твердые носители, применяемые в аналитической практике, пригодны и для препаративной работы. Достаточно лишь увеличить диаметр колонки и использовать носители с несколько большим размером частиц ( О—80 меш вместо 80—100 меш). Чтобы в автоматическом режиме работы обеспечить четкую воспроизводимость результатов, разделение проводят, как правило, в изотермических условиях. Поэтому часто желательно провести предварительно фракционирование образца в соответствии с температурами кипения или химическими свойствами его компонентов (например, отделить непредельные монотерпены от непредельных сесквитерпенов или олефины от спиртов). Чтобы осуществить такое предварительное фракционирование, являющееся полезной процедурой и при аналитических исследованиях, можно провести разделение методом колоночной хроматографии или фракционную перегонку или же получить легкоразделимые производные, которые несложно регенерировать до исходных соединений (например, терпеновые спирты превращают в 2,4-динитробензоаты, которые после отделения от других компонентов гидролизуют) [82—88], [c.235]

Значительные успехи в жидкостной хроматографии были достигнуты в последние несколько лет, после того как выяснилось, что эффективность разделения можно существенно повысить, если проводить разделение на адсорбентах с частицами размером 5—10 мкм. Колонки, заполненные такими мелкими частицами, отличаются высоким сопротивлением потоку жидкости, и, следовательно, чтобы продавить через них элюент, его необходимо подавать под большим давлением (порядка 3,447—34,47 МПа). Однако осуществить это не столь уже сложно, поскольку насосы, способные развивать такие давления легкодоступны. Существенно большее значение имеет тот факт, что у колонок, предназначенных для ВЭЖХ, низкая емкость по веществу( от нескольких миллиграммов и ниже), поэтому их применение в методах типа 0 2549 невозможно. Поскольку процедура сбора фракций и определения их состава весьма трудоемка и отнимает много времени, при помощи детектора проводится непрерывное обнаружение соединений в элюате. Как и для газовой хроматографии, для жидкостной хроматографии предложено много различных типов детекторов, однако, как впоследствии выяснилось, три типа детекторов — УФ-детекторы с фиксированной и переменной длиной волны, флуориметрические и проточные рефрактометры — значительно превосходят все остальные, и именно они получили наиболее широкое рас-пространение. Рефрактометр является универсальным детектором и как таковой пригоден для обнаружения углеводородов. [c.399]

Обнаружение и элюирование пептидов. После проведения хроматографии листы бумаги извлекают из камеры (в резиновых перчатках ) и сушат хроматограммы на воздухе. От каждого листа отрезают боковые полоски с маркерами и определяют на них места расположения отдельных компонентов смеси используя реактивы, дающие специфические цветные реакции— см. стр. 129—134). Затем вырезают из хроматограмм полоски бумаги, содержащие нужные пептиды, и эти пептиды элюируют. Обычными растворителями для элюирования являются вода, 0,1 н. раствор аммиака, 1 н. раствор уксусной кислоты. Полоски бумаги либо экстрагируют элюирующими растворителями, либо помещают их на фитили из влажной, предварительно промытой соответствующим растворителем бумаги ватман ЗММ, укрепленные в закрытых хроматографических камерах, и элюируют вещество в течение ночи методом нисходящей хроматографии (со отеканием растворителя), собирая элюаты в специальные приемники. Полноту элюции вещества с бумаги проверяют путем опрыскивания полосок последней соответствующим специфическим реактивом. Элюаты после фильтровяния концентрируют выпариванием в сакууме или лиофилизацией. [c.121]

Хроматограмму окрашивают парами йода, как описано ниже, для обнаружения пятен фосфолипидов. Ее слегка увлажняют над водяным паром и снимают силикагель в каждом пятне лезвием бритвы. Снятый силикагель переносят в отдельную пастеровскую пипетку с тампоном из стекловолокна в суженном ее конце. По пипетке слегка постукивают до тех пор, пока силикагель не осядет в виде слоя на тампоне из стекловаты. Такую колонку из силикагеля промывают 2 мл смеси хлороформ — метанол (1 1, по объему), а затем 2 мл метанола для элюирования фосфолипидов. Элюаты собирают в пробирки со стеклянными пробками. Каждый фосфолипид разливают поровну в две 15-мл пробирки со стеклянными пробками и в ампулу для лиофилизации и в дальнейшем анализируют. Растворители выпаривают при 37°С в токе азота. Одна пробирка предназначена для анализа на суммарный органический фосфор с целью определения количества каждого присутствующего фосфолипида. Две другие пробы можно подвергнуть кислотному или щелочному гидролизу с последующей идентификацией веществ для установления их возможной структуры. [c.315]